专利名称：防治蔬菜疫病的菌药合剂及其制备方法
技术领域：
本发明属化学、生物土壤处理剂及其制备方法领域，特别涉及一种对蔬菜疫病具有预防及控制作用的菌药合剂及其制备方法领域。
背景技术：
疫病是蔬菜生产上的一类重大病害，常见的疫病主要有辣椒疫病、番茄晚疫病和黄瓜疫病等。在我国，辣椒疫病的发生最为严重。近年来，由于品种、栽培制度、肥水条件的改变，病害逐年加重，病区由南向北逐年扩展，重病区的枯死率可达到80％以上，产量损失十分显著。辣椒疫病在辣椒的整个生育期均可发生，尤其在辣椒现蕾和坐果时发生严重。在气候条件适宜的情况下，此病可危害根、茎秆、枝条、果实和叶片，严重时可造成死秧、烂果，减产甚至绝产。
生产实践中，疫病的综合治理主要是依靠选用抗病品种、合理轮作和使用内吸性杀菌剂。但目前生产上可应用的抗疫病的蔬菜品种有限，同时因为疫病病原菌为土壤习居菌，轮作也难以有效地控制该病。因此较长时期以来化学防治一直使该病最有效的的防治手段之一，生产上主要以药剂喷雾和灌根来防治辣椒疫病。现有防治疫病的主要药剂甲霜灵、霜脲氰、乙磷铝等内吸性杀菌剂，这类杀菌剂属于特异性位点抑制剂，对病原菌的作用位点单一，只对病原菌的单一代谢环节起作用，一旦此位点发生突变，药剂即不能与其产生作用，从而导致病菌产生抗药性，使药剂防治病害的效果降低。随着社会经济发展和人民物质生活水平的迅速提高，“绿色蔬菜”和“无公害蔬菜”需求量也越来越大，作物安全生产和农产品安全倍受重视。因此，单一利用化学农药防治疫病的策略和实践受到了挑战，探索新的防治途径是目前蔬菜疫病防治必须解决的重要问题。发展生物防治技术来防治植物病害越来越受到各国政府、科技工作者和民众的关注，据申请人所知，国内外研究生物措施防治疫霉病害已有许多报道。但由于单一的生防因子难以在不同环境条件下取得与使用化学杀菌剂相匹配的防效；而且生防因子对土壤或作物根围环境条件的波动比较敏感，在田间存在病原菌的生态条件下，生防因子的定殖能力有很大差异。生物防治控制蔬菜疫病的研究目前多在实验室和温室条件下进行，尚未大面积用于生产实践中。
在化学防治受到越来越多的质疑，生物防治体系还不完善的条件下，发展生物-化学协同控制蔬菜疫病的策略逐渐引起各国政府和科研人员的重视。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效、低毒，与环境相容并对蔬菜疫病具有预防及控制作用的生物-化学协同控制的菌药合剂及其制备方法。
本发明的目的是这样实现的提供一种防治蔬菜疫病菌药合剂含有生防菌剂和杀菌剂，所述生防菌剂与杀菌剂按质量计用量比为1∶1。优选的杀菌剂选自阿米西达、百菌清、代森锰锌、甲霜灵、绿帝、氟吗啉、烯酰吗啉、乙磷铝、银泰中的一种或多种。进一步优选杀菌剂为烯酰吗啉，更进一步优选烯酰吗啉有效成分含量25％-90％的可湿性粉剂，最优选50％安克可湿性粉剂(烯酰吗啉制剂)。优选的生防菌剂中含有的生防菌株选自枯草芽孢杆菌BS、枯草芽孢杆菌GF1、荧光假单胞菌LX1、荧光假单胞菌BCA1中的一种或多种。进一步优选的生防菌剂中含有的生防菌株为枯草芽孢杆菌BS。
本发明还提供一种制备上述防治蔬菜疫病菌药合剂的方法，它包括如下步骤a)将对蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株进行发酵培养，再将发酵液离心获得的菌体沉淀按1∶1的质量比与微粉碳酸钙混合制得生防菌剂；优选的生防菌株选自枯草芽孢杆菌BS、枯草芽孢杆菌GF1、荧光假单胞菌LX1、荧光假单胞菌BCA1中的一种或多种。进一步优选的生防菌株为枯草芽孢杆菌BS。
b)将步骤a形成的生防菌剂与杀菌剂按1∶1的质量比复配。
优选的杀菌剂为有效成分含量25％-90％的制剂，进一步优选的杀菌剂为有效成分含量50％的制剂。
优选的杀菌剂选自阿米西达、百菌清、代森锰锌、甲霜灵、绿帝、氟吗啉、烯酰吗啉、乙磷铝、银泰中的一种或多种。进一步优选杀菌剂为烯酰吗啉，更进一步优选烯酰吗啉有效成分含量25％-90％的可湿性粉剂，最优选50％安克可湿性粉剂(烯酰吗啉制剂)。
本发明基于生物-化学协同控制原理的菌药合剂，通过生物因子和化学因子的协同增效作用，可以在设施蔬菜上减少化学农药施用量50％以上，完全替代传统的高毒、高残留农药，确保蔬菜的农药残留量在允许标准以下，符合无公害蔬菜生产要求。从而节约生产成本并改善了蔬菜品质。
图1为本发明的工艺流程框图。
具体实施例方式
下面结合附图所描述的实施方式对本发明作进一步详细说明。
防治蔬菜疫病菌药合剂，它含有生防菌剂和50％安克可湿性粉剂；所述生防菌剂与50％安克可湿性粉剂的质量比为1∶1。
如图所示，防治蔬菜疫病菌药合剂制备方法，可按如下步骤依次进行a)将对辣椒疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株枯草芽孢杆菌BS进行发酵培养，再将发酵液离心获得的菌体沉淀按1∶1的质量比与微粉碳酸钙混合制得生防菌剂；
b)将步骤a形成的生防菌剂与有效成分含量为50％的安克可湿性粉剂按1∶1的质量比复配。
本发明立足于已经获得的几种拮抗微生物、已经登记的生物防治菌株和国内外生产上防治疫病常用的几种杀菌剂，以辣椒疫病病菌为靶标菌，通过离体和活体筛选，分别获得一株对辣椒疫霉具有较强拮抗作用的生防菌株和一种高效、低毒、环境友好的化学农药，通过离体和活体试验测定生物农药和化学农药毒力系数，明确生物因子与化学药剂之间专化特异性的增效作用，筛选高效广谱生物杀菌剂的增效组合，研制成菌药合剂，并对其施用方式进行了研究。
本发明的具体操作步骤如下(1)拮抗微生物的的筛选在初步筛选的基础上，选择枯草芽孢杆菌BS、荧光假单胞菌LX1、枯草芽孢杆菌GF1、荧光假单胞菌BCA1四株生防菌株分别进行了离体抑菌实验和活体植株筛选，发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS对辣椒疫病病菌具有较强的拮抗作用，温室防病实验中具有较高的防效。具体的数据见表1和表2。因此选择枯草芽孢杆菌BS作为研制菌药合剂的生物组分。
(2)杀菌剂的筛选采用生产中常用的9种不同类型的杀菌剂，分别测定了对辣椒疫病病菌不同菌体形态的抑制作用，结果如表3所示，烯酰吗啉和氟吗啉两种杀菌剂对所测定的各种菌体形态都有显著的抑制作用。在离体筛选的基础上，又以防治疫病的典型药剂甲霜灵为对照，进行了烯酰吗啉和氟吗啉的温室防病实验，发现烯酰吗啉的防治效果要优于氟吗啉(见表4)。因此选择烯酰吗啉作为构建菌药合剂的化学组分。
(3)菌药合剂的研制 将枯草芽孢杆菌BS发酵培养，再将发酵液离心获得的菌体沉淀按1∶1的质量比与微粉碳酸钙混合制得生防菌剂，其菌量大于108cfu/g。然后与50％安克可湿性粉剂(烯酰吗啉制剂)按1∶1的质量比复配获得本发明防治蔬菜疫病的菌药合剂。
(4)菌药合剂质量指标的检测 烯酰吗啉和枯草芽孢杆菌BS的含量指标是菌药合剂的基本质量指标，烯酰吗啉含量的测定采用高效液相色谱进行(≥25％)，枯草芽孢杆菌的菌数采用稀释平板法进行测定(活菌落数量≥107cfu/mL)。经热贮实验表明，枯草芽孢杆菌对烯酰吗啉没有代谢作用，烯酰吗啉对枯草芽孢杆菌的菌落数形成也没有干扰作用。
实施例1采用北京地区主栽辣椒品种京研辣椒3号，模拟自然条件下辣椒疫病的侵染方式，分别采用灌根法和喷雾法接种病菌的方式建立致病体系，研究了不同的施药方式对菌药合剂DMBS防治辣椒疫病效果的影响。结果如表5、表6所示，在不同的致病体系下，菌药合剂的防治效果与药剂的使用方式有关，灌根法施药对于防治地下部的病害扩展效果较好，喷雾法施药对于防治地上部病菌的传播效果较好。但无论采用哪种接菌方式都可以发现，在供试的杀菌剂单剂、生防菌单剂和菌药合剂三种处理中，单一的生防制剂防效表现欠稳定，而菌药合剂则表现出与单一杀菌剂相同的趋势，随药剂浓度的升高，防治效果提高；更重要的是，减少了一半剂量的菌药合剂的防治效果与同浓度的单一杀菌剂可以取得大致相当的防治效果，在个别浓度下，甚至高于杀菌剂处理。
实施例2采用辣椒疫病的通用感病品种茄门甜椒，模拟自然条件下辣椒疫病的侵染方式，分别采用灌根法和喷雾法接种病菌的方式建立致病体系，研究了不同的施药方式对菌药合剂DMBS防治辣椒疫病效果的影响。结果如表7、表8所示，其规律与京研辣椒3号相似。
表1、4株生防菌株对7株辣椒疫病病菌的抑菌作用测定
表2、生防因子防治辣椒疫病温室试验
表3、9种杀菌剂对辣椒疫病病菌不同菌体形态的抑制作用
表4、杀菌剂防治辣椒疫病温室试验
表5、本发明菌药合剂对京研辣椒3号灌根法接种辣椒疫病病菌的防治效果
注DMM为烯酰吗啉，BS为枯草芽孢杆菌，DMBS为菌药合剂。下同。
表6、本发明菌药合剂对京研辣椒3号喷雾法接种辣椒疫病病菌的防治效果
表7、本发明菌药合剂对茄门甜椒灌根法接种辣椒疫病病菌的防治效果
表8、本发明菌药合剂对茄门甜椒喷雾法接种辣椒疫病病菌的防治效果
权利要求
1.一种防治蔬菜疫病菌药合剂，它含有生防菌剂和杀菌剂，所述的生防菌剂与杀菌剂按质量计用量比为1∶1。
2.根据权利要求1所述的防治蔬菜疫病菌药合剂，其特征在于，所述杀菌剂选自阿米西达、百菌清、代森锰锌、甲霜灵、绿帝、氟吗啉、烯酰吗啉、乙磷铝、银泰中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述防治蔬菜疫病菌药合剂，其特征在于，所述生防菌剂中含有的生防菌株选自枯草芽孢杆菌BS、枯草芽孢杆菌GF1、荧光假单胞菌LX1、荧光假单胞菌BCA1中的一种或多种。
4.一种制备权利要求1所述防治蔬菜疫病菌药合剂的方法，它包括如下步骤a)将对蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株进行发酵培养，再将发酵液离心获得的菌体沉淀按1∶1的质量比与微粉碳酸钙混合制得生防菌剂；b)将步骤a形成的生防菌剂与杀菌剂按1∶1的质量比复配。
5.根据权利要求4所述的制备防治蔬菜疫病菌药合剂的方法，其特征在于，所述生防菌株选自枯草芽孢杆菌BS、枯草芽孢杆菌GF1、荧光假单胞菌LX1、荧光假单胞菌BCA1中的一种或多种。
6.根据权利要求4或5所述的制备防治蔬菜疫病菌药合剂的方法，其特征在于，所述杀菌剂选自阿米西达、百菌清、代森锰锌、甲霜灵、绿帝、氟吗啉、烯酰吗啉、乙磷铝、银泰中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的制备防治蔬菜疫病菌药合剂的方法，其特征在于，所述杀菌剂为烯酰吗啉。
全文摘要
本发明属化学、生物土壤处理剂及其制备方法领域，特别涉及一种对蔬菜疫病具有预防及控制作用的菌药合剂及其制备方法领域，该方法可按如下步骤依次进行a)将对蔬菜疫病病菌具有拮抗作用的生防菌株进行发酵培养，再将发酵液离心获得的菌体沉淀按1∶1的质量比与微粉碳酸钙混合制得生防菌剂；b)将步骤a形成的生防菌剂与有效成分含量为50％的杀菌剂按1∶1的质量比复配。本发明可以在设施蔬菜上减少化学农药施用量50％以上，部分或全部替代传统的高毒、高残留农药，确保蔬菜农药残留量在允许标准以下，符合无公害蔬菜生产要求。
文档编号A01N63/02GK1695457SQ200510011438
公开日2005年11月16日 申请日期2005年3月17日 优先权日2005年3月17日
发明者李健强, 尹敬芳, 刘西莉, 吴学宏, 刘鹏飞, 张文华 申请人:中国农业大学