专利名称：一种人工快速培养葛仙米藻种的方法
技术领域：
本发明是关于蓝藻藻种的人工培养方法，更具体地说，是关于葛仙米藻种的人工培养方法。
背景技术：
葛仙米是一种多细胞丝状蓝藻，据《本草纲目》和《本草纲目拾遗》等记载，葛仙米除可食用外，还有多种疗效，如治疗夜盲症、脱肛、烫伤和兼具美容之功效。但葛仙米野生资源非常匮乏，加之葛仙米的生态环境遭到破坏，要想满足市场需求，急需能够进行人工规模化生产。目前，有关葛仙米藻种的人工培养方法已有研究报道中国专利文献CN1294190(申请日1999.10.22)中公开的方法包括培养液配制、藻种制备、制备接种物、培养、实时监控、筛选收获、提高筛上球形体的机械强度及干燥八个环节，一个周期历时30～90天，且需要抗生素进行无菌纯化；中国专利文献CN1528127(申请日2003.10.10)中公开的方法包括培养液配制、藻种制备、生物反应器培养、制备接种物、培养、实时监控、筛选收获、提高筛上球形体的机械强度及干燥九个环节，一个周期也要历时30～90天，且需要多级制种和生物反应器培养；中国专利文献CN1544611(申请日2003.11.11)中公开的方法包括选取藻种、清洗杀菌、匀浆、配制培养液、固体纯化、接种培养、及扩大制种七个环节，一个周期历时18～35天。综上可见，人工培养葛仙米藻种的现有技术存在周期长、制种效率低、难以满足大规模人工养殖葛仙米需求等缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人工快速培养葛仙米藻种的方法，以满足能够大规模人工养殖葛仙米的需求。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现通过筛选无机盐离子的浓度，配制成最适宜于葛仙米藻种生长的培养液，然后直接进行液体接种和培养，具体过程为1)配制适宜的培养液；2)原种筛选；3)原种消毒；4)液体接种和培养；5)藻种的形成和纯化；6)藻种的扩大培养。
本发明筛选得到的培养液的组成为碳酸钠25-45mg/L、磷酸氢二钾70-90mg/L、柠檬酸4-7mg/L、柠檬酸铁铵4-7mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐0.5-2mg/L、氯化钙180-240mg/L、硫酸镁60-90mg/L、硼酸1.5-3g/L、氯化锰1.5-2g/L、硫酸锌0.2-0.3g/L、钼酸钠0.3-0.4g/L、硫酸铜0.05-0.1g/L、硝酸钴0.03-0.06g/L。
本发明所配制的培养液的pH值为7.8-8.0。
因为本发明所提供的人工快速培养葛仙米藻种方法，无需进行抗生素无菌纯化或固体培养基纯化过程，通过适宜的培养液直接进行液体接种和培养，所以与现有技术相比具有以下有益效果操作简单，培养周期短，一次制种量大，能适合大规模人工养殖葛仙米的需求。
具体实施例方式
本发明所提供的人工快速培养葛仙米藻种的方法包括以下具体步骤1.配制适宜的培养液称取碳酸钠25-45mg/L、磷酸氢二钾70-90mg/L、柠檬酸4-7mg/L、柠檬酸铁铵4-7mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐0.5-2mg/L、氯化钙180-240mg/L、硫酸镁60-90mg/L、硼酸1.5-3g/L、氯化锰1.5-2g/L、硫酸锌0.2-0.3g/L、钼酸钠0.3-0.4g/L、硫酸铜0.05-0.1g/L、硝酸钴0.03-0.06g/L，用无菌蒸馏水定容。
2.原种筛选选择饱满，颜色深绿、生长旺盛的葛仙米藻体作为原种。
3.原种消毒将葛仙米藻体用无菌蒸馏水冲洗干净后用70％乙醇溶液消毒20-30秒，然后用无菌蒸馏水冲洗3-5次。
4.液体接种和培养将消毒后的葛仙米球形藻体用适量无菌培养液在玻璃匀浆器中研磨破碎得藻浆，内含丝状藻体和藻殖段。将藻浆用无菌培养液稀释3-5倍后倒入离心管内，4000rpm离心5分钟，弃上清液，留下层藻丝体和胶质混合物，重复两次；向沉淀的混合物中加入无菌培养液以2000rpm的转速离心2分钟，取上层悬浮液(主要为藻丝体溶液)，弃下层胶鞘等物质，重复两次得到丝状藻体和藻殖段溶液。将得到的丝状藻体和藻殖段溶液倒入盛有培养液的锥形瓶中，置于130rpm摇床上摇动，温度控制在25℃左右，24小时连续光照培养，光强约为5000lx。
5.藻种的形成和纯化上述溶液经15-20天的摇荡培养，丝状藻体或藻殖段形成了直径约0.5-1mm的球状藻体，将藻种置于离心管中用旋涡混合器震荡3～5分钟后离心，重复2-3次，进行镜检无杂藻。
6.藻种的扩大培养将上述纯化后的藻种进行通气培养。
权利要求
1.一种人工快速培养葛仙米藻种的方法，其特征在于，所述方法包括以下过程1)配制适宜的培养液；2)原种筛选；3)原种消毒；4)液体接种和培养；5)藻种的形成和纯化；6)藻种的扩大培养。
2.根据权利要求1所述的人工快速培养葛仙米藻种的方法，其特征在于，所述适宜的培养液的组成为碳酸钠25-45mg/L、磷酸氢二钾70-90mg/L、柠檬酸4-7mg/L、柠檬酸铁铵4-7mg/L、乙二胺四乙酸二钠盐0.5-2mg/L、氯化钙180-240mg/L、硫酸镁60-90mg/L、硼酸1.5-3g/L、氯化锰1.5-2g/L、硫酸锌0.2-0.3g/L、钼酸钠0.3-0.4g/L、硫酸铜0.05-0.1g/L、硝酸钴0.03-0.06g/L。
3.根据权利要求2所述的人工快速培养葛仙米藻种的方法，其特征在于，所配制的培养液的pH值为7.8-8.0。
4.根据权利要求1所述的人工快速培养葛仙米藻种的方法，其特征在于，所述液体接种和培养操作按以下步骤顺序进行1)将消毒后的葛仙米球形藻体用适量无菌培养液在玻璃匀浆器中研磨破碎得藻浆；2)将藻浆用无菌培养液稀释3-5倍后倒入离心管内，4000rpm离心5分钟，弃上清液，留下层藻丝体和胶质混合物，重复两次；3)向沉淀的混合物中加入无菌培养液以2000rpm的转速离心2分钟，取上层悬浮液，弃下层胶鞘等物质，重复两次得到丝状藻体和藻殖段溶液；4)将得到的丝状藻体和藻殖段溶液倒入盛有培养液的锥形瓶中，置于130rpm摇床上摇动，温度控制在25℃左右，24小时连续光照培养，光强约为5000lx。
全文摘要
本发明公开了一种人工快速培养葛仙米藻种的方法，该方法包括以下过程1)配制适宜的培养液；2)原种筛选；3)原种消毒；4)液体接种和培养；5)藻种的形成和纯化；6)藻种的扩大培养。本发明所提供的人工快速培养葛仙米藻种方法，无需进行抗生素无菌纯化或固体培养基纯化过程，通过适宜的培养液直接进行液体接种和培养，与现有技术相比具有操作简单，培养周期短，一次制种量大，能适合大规模人工养殖葛仙米的需求。
文档编号A01G1/00GK101036445SQ20071003986
公开日2007年9月19日 申请日期2007年4月24日 优先权日2007年4月24日
发明者曹建国, 刘晶晶, 王全喜 申请人:上海师范大学