专利名称：金钗石斛组培技术及栽培方法
技术领域：
本发明专利申请涉及一种中药材栽培技术领域，尤其 涉及一种药用石斛金钗石斛的组培生产技术及栽培方法。
二背景技术：
金钗石斛是《中国药典》收载三大石斛品种之首，在 《神农草本经》和《本草纲目》上早有记载，是石斛中的 上品，名扬中外。金钗石斛以茎入药，具有益胃生津、滋 阴清热、止痛、清嗓、明目、降血脂、血压等功效，是生 产"石斛夜光丸"、"石斛鲜露"、"石斛饮料"、"石斛胶囊" 等产品的主要原料。以石斛为主要原料开发的"脉络宁" 系列产品，被国家指定为全国各医院心血管疾病必备良药， 石斛还广泛用于食品、美容、保健等领域。国内以石斛为
原料的制药企业有160多家，年需求鲜石斛l万多吨。目 前，石斛产品供不应求，价格呈稳中逐年上涨的发展趋势。 金钗石斛是国家二级保护的珍稀名贵中药材，1998年 国家中医药管理局国中医药生生[1998]17号文件批复在贵 州省赤水市建立石斛生产基地。2005年，赤水金钗石斛获 得国家地理标志产品保护，是国内众多石斛品种中，唯一 获得国家地理标志产品保护的石斛品种，也是贵州唯一获 得地理标志产品保护的中药材品种。赤水具有得天独厚的 气候环境条件，是金钗石斛的地道产地和主产区。是目前
国内最大的金钗石斛基地，但其种植规模和产量，还远远
不能满足市场的巨大需求。
但在种植方法上，多数药农是延用传统方式，用实生苗 分株栽培和扦插栽培，大量消耗石斛实生苗，导致种质资源 稀缺，繁殖系数低，发展速度缓慢，栽种面积规模无法有效 扩大。而且由于栽培技术落后、管理粗放简单，导致石斛的 成活率低，生长周期长，产量低，效益差。
。采用独特的金钗石斛组培苗生产技术和栽培方法，
从一颗金钗石斛蒴果培养出io万株以上的种苗，有效地解
决了种苗的紧缺和来源问题；组培苗练苗、移栽成活率达 到97%以上、产量提高40%以上的巨大成功，其先进性位 居国内外同行研究及应用的前列，对濒危紧缺药用植物资 源再生和持续利用具有重要意义，弥补了国内这一领域的 空白。
本发明的目的在于，促进赤水的并开发出与野生金钗 石斛的有效成份含量相当或略高的金钗石斛的组培生产技 术及栽培方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种金钗石斛组培生产技术及栽 培方法，提高金钗石斛种苗的扩繁速度、提高有效成份含 量，提高炼苗和移栽成活率，尽快实现金钗石斛的规范化、 规模化发展，为了实现这一目的，发明人经过试验，成功 完成了各种药用石斛的组织培养基质配方及其培养方法， 对组织培养基质配方和生产工艺，特别是对细胞分裂素和 生长素的使用比例和有机添加物筛选和用量，针对金钗石 斛特殊的生长习性，进行了多次研究和试验，获得了独创的培养配方和培养方法；又解决了金钗石斛组培苗的炼苗、 移栽方法，完成了金钗石斛的组培生产技术及栽培方法的 发明研究。
金钗石斛组培生产技术及栽培方法，它包括金钗石斛 组培生产技术、金钗石斛组培苗炼苗技术、金钗石斛组培 苗移栽技术和金钗石斛的采收方法。
上述的金钗石斛工厂化生产技术及栽培方法，它包括 (1)金钗石斛组培生产技术分为三个阶段；
A、 将新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理 程序，播入N6基本培养基+NAA ( a -萘乙酸)0. 3mg/L + 土 豆汁20。/。(V/V) +琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培 养，培养温度22 25。C，每日光照10--12小时，光强1800 25001x， 15 20天种胚开始萌动，25 30天种胚膨大，逐
渐萌发形成绿色的原球茎；
B、 将原球茎转入N6基本培养基+BA (6-苄基腺嘌呤)
0. 2mg/L +土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L培养基里进行原球
茎增殖、分化培养，约25天可观察到瓶内原球茎重叠堆积
在培养基中，此时再一次进行转接，后让其分化小苗，苗 高1 cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；
C、 将小苗转入N6基本培养基+NAA ( a -萘乙酸) 0.2mg/L+香蕉汁10% (V/V) +土豆汁10% (V/V) +琼脂6g/L 的培养基里，进行壮苗培养，2个月可观察到小苗发育成 2.5 4cm的中苗，将3 cm以下的中苗再转接到同样的培养 基里，继续培养，3 cm以上的大苗进入生根培养基中培养， 2个月可培养出5 cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽。
(2)炼苗、移栽基质应用技术
本发明的关键就是金钗石斛炼苗基质和移栽基质的选择。
根据金钗石斛特殊的生长习性和特点，采用种子繁殖，
每粒种子萌发苗可达10万株以上。其组培苗通过炼苗再移
栽的基质运用技术，既保证了植株根系的透水、透气性， 又具备保温性和肥力，使金钗石斛组培苗人工栽培的成活
率达到97%以上。
A、 炼苗基质
由于金钗石斛组培苗是在无菌、恒温、高湿等条件下 培养而成。因此，组培苗出瓶炼苗是金钗石斛产业化关键 环节。
本发明采用青石+锯木屑+腐熟有机肥的炼苗基质，厚
度比为4 cm :4 cm: 1 cm ，主要解决瓶中组培苗到移栽大田的 过渡适应期，既要保证植株根部的透水、透气性，又要具 有保湿性强、肥力好、不易滋生病虫害的要求，随时保证 合理的水分、温湿度、光照控制，这样能使金钗石斛组培 苗炼苗成活率达到97%以上，而且植株生长良好。
B、 移栽基质
金钗石斛组培苗经12个月炼苗后，已经从组培室无菌 环境自然过渡到栽培大棚新的生长环境，这时的植株已较 为健壮，生长稳定，可移栽到赤水各乡镇适宜栽种石斛的 区域。通过对野生金钗石斛原生态生长环境的深入调研， 通过研究和创新，采用线卡+活苔藓盖根法，并按照GAP要 求进行统一指导和规范化管理；经示范种植的50多万丛组 培苗，目前其成活率在97%以上，并且植株生长良好。 (3)金钗石斛的采收
金钗石斛组培苗按本发明所用的方法经炼苗、移栽后，
经2年即可采收。采收期以每年的入冬为宜，采收前1.5 个月应停止给植株施肥和用药。采收时应将生长期2. 5年 3年生长的老茎剪下，新芽及根部保留，这样可连续采收6 年以上。
上述的金钗石斛的工厂化生产技术及栽培方法中，所 提到的对于金钗石斛各生长过程培养基质的配方是(1) 种胚诱导及壮苗生根培养基N6基本培养基+NAA( ct -萘乙 酸)0. 3mg/L+土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/; (2)原球茎增 殖与分化培养基N6基本培养基+BA (6-苄基腺嘌呤) 0. 2mg/L +土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L; (3)壮苗培养基 N6基本培养基+NAA( a -萘乙酸)O. 2mg/L+香蕉汁10%( V/V) + 土豆汁10% (V/V) +琼脂6g/L。
采用本发明所提供的金钗石斛组培生产技术及栽培方 法，可有效解决金钗石斛种苗的来源和种苗的地道性，从 金钗石斛种子到培养成大苗，只需8个月，大大縮短了种 苗组培时间和成本，与传统种苗扩繁相比，种苗的扩繁速 度提高了上百倍，炼苗、移栽成活率提高到97%以上，产量 提高40%以上；与野生金钗石斛的有效成份含量相比，本发 明栽培的金钗石斛多糖含量高于野生金钗石斛，微量元素 含量略高于野生金钗石斛含量。
采用本技术方案的有益效果解决金钗石斛人工大面 积栽培，所面临的种苗来源紧缺、炼苗、移栽成活率低、 产量不髙、有效成份低等问题，起到了关键性的作用，使 种苗的扩繁速度提高了上百倍，炼苗、移栽成活率提高到 97%以上，产量提高40%以上，为尽快推动金钗石斛产业化、
规模化发展，提供了有力保证。具有良好的社会和经济效
、'-
四
(无)
五具体实施例方式
实施例
1、金钗石斛组培生产技术
将野生金钗石斛原产地成熟的蒴果采回后，放在干净 的培养皿里，待其自然开裂后，将种子装入洁净的烧杯里 密封起来，放于冰箱内保存。
A、 将新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理 程序，播入N6基本培养基+NAA ( a -萘乙酸)0. 3mg/L + 土 豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培 养，培养温度22 25。C，每日光照10—12小时，光强1800 25001x， 15 20天种胚开始萌动，25 30天种胚膨大，逐
渐萌发形成绿色的原球茎；
B、 将原球茎转入N6基本培养基+BA (6-苄基腺嘌呤) 0. 2mg/L +土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L培养基里进行原球 茎增殖、分化培养，25天后可观察到瓶内原球茎重叠堆积 在培养基中，此时再一次进行转接，后让其分化小苗，苗 高1 cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；
C、 将小苗转入N6基本培养基+NAA ( a -萘乙酸) 0. 2mg/L+香蕉汁10% (V/V) +土豆汁10% (V/V) +琼脂6g/L 的培养基里，进行壮苗培养，2个月可观察到小苗发育成 2.5 4cm的中苗，将3 cm以下的中苗再转接到同样的培养
基里，继续培养，3 cm以上的大苗进入生根培养基中培养， 2个月可培养出5 cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽。
2、 金钗石斛组培苗炼苗技术
炼苗基质是青石+锯木屑+腐熟有机肥的炼苗基质，厚
度比为4 cm : 4 cm : 1 cm );
炼苗方法采用1. 2mX30m苗床，在苗床上铺4cm小 青石、4cm锯木屑、lcm腐熟有机肥，均作杀菌处理后，将 培养瓶中的小苗取出洗净，然后在多菌灵中杀菌5-10分钟， 再分级炼苗，取3-5株为一丛，将根部栽入锯木屑中，苗 要栽稳，但不要栽深，植株的基部应露于外，然后浇一次 定根水为宜。
炼苗条件 一般炼苗采用温棚，要有塑料膜和遮阳网， 大棚在春夏秋季要保持通风透气，冬季要能够适当保温。 炼苗分两步进行，恒温下先在瓶中炼7天，第二步再移至 炼苗床。棚内温度控制在13°C 38°C，空气湿度为60%-85% 左右，遮阴度60 70%，光照度8000 15000x，浇水采取 喷淋法，浇水以基质湿润为度，不宜过湿或过干。炼苗时 间在每年3月中旬起进行，炼苗期一年。
3、 金钗石斛组培苗移栽技术
(1)、露地移栽条件移栽基质，原生态石头(红色 页岩)+苔藓+线卡
① 气候条件年平均气温18°C， 1月平均气温7。 9°C， 7月平均气温28。C，海拔在300m 800m，相对湿度75% 80%的适宜区域。
② 遮阴主要采用阔叶林树木遮阴，遮阴度在55 70% 左右最合适。
③ 石旮旯地石面上长有苔藓的石旮旯场地。
④ 水源条件附近有符合国家二级标准的水源。
(2)、棚内栽培，以塑料大棚，采取苗床或栽培，苗 床为1.5mX22m。棚内达到40%以上散射光，约1500 28001x。温度在5。C 35。C内均可，湿度不得低于60%，高 为85%左右。
栽培方法
① 栽种时间以每年3月10日 4月10日为宜，9月份 次之。
② 栽培密度金钗石斛的产量主要决定于单株茎杆重 和有效分蘖数，这就要求根据栽培场地的具体情况进行适 当密植。 一般情况下，按30cmX30cm的间距栽种为宜。
③ 栽种方式
a栽苗时，按30X 30cm密度种植，将栽苗点局部的苔 藓抠掉，再将苗的根须、基部贴于石面用线卡固定好，根 系要自然伸展。
b用线卡固定苗时，应卡在种苗主茎(粗茎)基部以 上1. 5cm 2. 5cm处，使苗稳固于石面。
c在钉压苗时，注意不要卡住嫩芽和损伤植株。
d固定好苗后，用活的苔藓轻轻贴于植株根部。注意 植株的基部应露于外，不能捂住或盖住，否则会严重影响 新芽、新根的萌发和生长。
上述炼苗和移栽苗的管理过程中，应根据当地生态的 实际情况，按照国家GAP质量管理规范，合理浇水、施肥 和防治病虫害。 '4、金钗石斛采收方法
①金钗石斛移栽后2年后开始采收，采收主要取茎， 一般为2. 5 3年的茎株为宜，这个时间的各种成份含量比
较饱满，药用最佳。
② 新苗萌发一般以春季为最佳期，所以，采收时间最 好在次年的入冬期为佳。
③ 采收期前45天须停止施肥和喷药。
④ 采收用剪刀在茎的最下部，与根部往上留一寸处剪 下茎株，不得连根拔取。
⑤ 采收的茎株必须及时送加工处加工炮制。
权利要求
1、一种金钗石斛的组培生产技术及栽培方法，其特征在于A、将野生新鲜未裂开的金钗石斛果实或储存在冰箱的种子，经过消毒处理，播入N6基本培养基+NAA(a-萘乙酸)0.3mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22-25℃，每日光照10-12小时，光照强度1800-2500Lx，15-20天种胚开始萌动，25-30天种胚膨大，萌发形成绿色的原球茎；B、将原球茎转入N6基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L培养基里进行原球茎增殖、分化培养，25天后可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，此时再一次进行转接，后让其分化小苗，苗高1cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；C、将小苗转入N6基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.2mg/L+香蕉汁10％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L的培养基里，进行壮苗培养，2个月后可观察到小苗发育成2.5～4cm的中苗，将3cm以下的中苗再转接到同样的培养基里，继续培养，3m以上的大苗进入生根培养基中培养，2个月后可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽；(2)金钗石斛组培苗炼苗技术炼苗基质是青石+锯木屑+腐熟有机肥；厚度比为4cm∶4cm∶1cm；炼苗采用1.2m×30m苗床，在苗床上铺4cm小青石、4cm锯木屑、1cm腐熟有机肥，均作杀菌处理后，将培养瓶中的小苗取出洗净，然后在多菌灵中杀菌5-10分钟，再分级炼苗，取3-5株为一丛，将根部栽入锯木屑中，苗要栽稳，但不要栽深，植株的基部应露于外，然后浇一次定根水为宜；炼苗采用温棚，要有塑料膜和遮阳网，塑料大棚在春夏秋季要保持通风透气，冬季要能够适当保温，炼苗分两步进行，恒温下先在瓶中炼7天，第二步再移至炼苗床，棚内温度控制在13℃～38℃，空气湿度为60％-85％，遮阴度60～70％，光照度8000～15000x，浇水采取喷淋法，浇水以基质湿润为度，不宜过湿或过干；炼苗时间在每年3月中旬起进行，炼苗期一年。
2、按权利要求1的金钗石斛的组培生产技术及栽培方 法，其特征在于金钗石斛组培苗移栽技术移栽基质原生态石头(丹霞石即红色页岩)+苔藓+ 线卡；(1)露地移栽条件A、 气候条件年平均气温18。C以上，1月平均气温 7.9°C， 7月平均气温28。C海拔在300m 800m，相对 湿度75% 80%的适宜区域；B、 遮阴主要采用阔叶林树木遮阴，遮阴度在55 70%左右最合适；C、 石旮旯地石面上长有苔藓的石旮旯场地；D、 水源条件附近有符合国家二级标准的水源；(2) 、棚内栽培，以塑料大棚苗床栽培，苗床为1.5m X22m;棚内达到40%以上散射光，照度1500 28001x;温 度在5°C 35°C内均可，湿度不得低于60%，高为85%左右；(3) 栽培时间、密度和方法-A、 栽种时间以每年3月10日 4月10日为宜，9月 份次之；B、 栽培密度金钗石斛的产量主要决定于单株茎杆重 和有效分蘖数，这就要求进行适当密植，按30cmX30cm的 间距栽种为宜；C、 栽种方式a、 栽苗时，将栽苗点局部的苔藓抠掉，再将苗的根须、 基部贴于石面，用线卡固定好，根系要自然伸展；b、 用线卡固定苗时，应卡在种苗主茎(粗茎)基部以 上1. 5cm 2. 5cm处，使苗稳固于石面；c、 在钉压苗时，注意不要卡住嫩芽和损伤植株；d、 固定好苗后，用活的苔藓轻轻贴于植株根部；使植 株的基部露于外，不能捂住或盖住，否则会严重影响新芽、 新根的萌发和生长；上述移栽苗的管理过程中，应根据当地生态的实际情 况，按照国家GAP质量管理规范，合理浇水、施肥和防治 病虫害。
3、按权利要求1的金钗石斛的组培生产技术及栽培方 法，其特征在于金钗石斛移栽后2年后开始采收，采收 主要取茎，为2.5 3年的茎株，药用最佳；采收季节最好 在入冬期；采收前45天须停止施肥和喷药；采收用剪刀在 茎下部，与根部往上留一寸处剪下茎株，不得连根拔取；E、采收的茎株必须及时送加工处加工炮制。
全文摘要
金钗石斛的组培生产技术及栽培方法，将种子插入N6培养茎+NAA。0.3mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L温度22-25℃，日光照10-12小时，照度1800-2500Lx，15-30天转入N6培养茎+BA0.2mg/L+土豆汁20％(V/V)+琼脂5g/L培养25天转入N6培养茎+NAA0.2Lg/L+香蕉汁10％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g，2月后将大苗，用青石+木屑+腐熟有机肥，载入木屑中在温棚中，温度13-38℃，及时喷水每年3月起，炼苗1年，移载露地或大棚，移载基质，页岩+苔藓+线卡固定，在适宜的温湿度和光照按GAP质量规范管理。
文档编号A01G1/00GK101336605SQ200710077830
公开日2009年1月7日 申请日期2007年7月7日 优先权日2007年7月7日
发明者廖方华, 廖晓康, 张万兴, 彭贵湖, 袁明贵 申请人:赤水市金斛产业开发有限公司