具有提高的胁迫耐受性的转基因农作物植物的制作方法

专利名称：具有提高的胁迫耐受性的转基因农作物植物的制作方法
交叉参考相关申请该申请要求在2006年6月23日提交的美国临时申请系列No.60/816,086(其通过以其全文引用合并入本文)在35USC§119(e)下的优先权。
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发明领域
本文公开了具有提高的胁迫耐受性的种子和植物中的转基因植物细胞以及产生和使用此类细胞、种子和植物的方法。

背景技术：

农作物植物上的许多生物或非生物胁迫中的任一种减少此类植物的产量。栽培者已使用许多策略以使来自胁迫的有害作用最小化。例如，可通过使用除草剂减少来自杂草的胁迫，可通过使用杀虫剂减少来自昆虫的胁迫，可通过灌溉减少来自水分亏缺的胁迫，可通过延迟种植时间减少来自寒冷的胁迫，和可通过用肥料处理来减少来自营养不足的胁迫。

植物的产量受到环境因素包括水的可得性、对冷或热的暴露、营养物质例如磷和氮的可获得性、种植密度等影响。植物对此类环境胁迫的反应可受到内在遗传机制的影响。植物基因工程的目的是产生具有农艺上、园艺上或经济上重要的性状(包括增加的对多种环境胁迫的任一种的耐受性)的新型植物。

考虑到陆生植物中水使用的复杂性(特别是在产生水分亏缺的条件期间)，已鉴定了相对少的特异性与该生理方面相关的基因。在US 2005/0022266A1中公开了表达某些结合Hap 3CAAT盒DNA的转录因子的重组DNA用于提高水分亏缺耐受性的用途。Hap3转录因子也称为NF-YB蛋白，其在植物中与NF-YA和NF-YC蛋白形成复合物。此类蛋白质统称为NFY蛋白。玉米NF-YB蛋白的氨基酸序列是SEQ IDNO28。
发明概述
本发明提供了包含提供NF-Y蛋白的表达的重组多核苷酸的新型植物染色体DNA，所述NF-Y蛋白的表达提供抗水分亏缺胁迫条件的保护作用。此类植物染色体DNA侧翼于天然植物DNA。为了适应自然的变化无常，当植物在水分亏缺胁迫条件下生长时，植物染色体DNA的实施方案可为植物提供与对照农作物植物相比增加的产量，当在水分充足的条件下生长时，可提供与对照农作物植物相比相当的或提高的产量。本发明还提供具有本发明的新型植物染色体DNA的转基因植物细胞、植物、种子和农作物。

用于本发明的植物染色体DNA片段的特征是重组多核苷酸的存在，所述重组多核苷酸编码低表达，例如在接近天然NF-Y蛋白的背景表达的水平的组成型表达，即其中NF-Y蛋白以达到每微克植物叶组织细胞中的总蛋白40皮克或更少，例如达到每微克植物叶组织细胞中的总蛋白大约30或20皮克的水平在叶细胞中产生。在其他实施方案中，从重组多核苷酸表达的NF-Y蛋白在每微克植物叶组织细胞中的总蛋白0.1至11皮克的范围内。

在本发明的一些实施方案中，重组多核苷酸提供了至少一种NF-Y蛋白和标记蛋白的表达。在另一个实施方案中，重组多核苷酸提供了单种NF-Y蛋白的表达。

在一些实施方案中，由重组多核苷酸表达的NF-Y蛋白是天然NF-YA、NF-YB或NF-YC蛋白。在其他实施方案中由重组多核苷酸表达的NF-Y蛋白是外源NF-YA、NF-YB或NF-YC蛋白，例如来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的NF-YB蛋白。在再其他的实施方案中，由重组多核苷酸表达的NF-Y蛋白是天然NF-YA、NF-YB或NF-YC的变体，例如，在玉米染色体DNA中，重组多核苷酸表达包含来自天然玉米DNA序列的连续氨基酸的变体NF-YB蛋白。

通过使用许多低水平组成型启动子用于表达NF-Y蛋白来提供本发明的植物染色体DNA片段。此类启动子很容易由本领域技术人员鉴定和分离，其可包括选自稻α微管蛋白启动子、稻肌动蛋白启动子、PPDK叶肉组织增强型启动子(mesophyll tissue-enhancedpromoter)和Rubisco活化酶维管束鞘组织增强型启动子的启动子。

本发明的此类染色体DNA用于希望展示水分亏缺胁迫耐受性的植物的转基因植物细胞。此类植物染色体DNA用于提供耐受水分亏缺胁迫的植物的转基因农作物，例如其中所述农作物的收获的产量得到增加，超过不具有所述植物染色体DNA片段的对照植物的农作物的产量。因为降雨和/或灌溉水的可获得性的不可预测性，所以可将本发明的植物栽培在广泛的水分充足性条件中，其范围从植物的整个生命过程中水分充足的条件至植物的整个生命过程中不同水平的水分亏缺胁迫条件。为了适应水分充足性的变化，本发明的某些实施方案提供了转基因农作物，所述转基因农作物，当在水分亏缺胁迫条件下栽培时，展示与对照农作物植物相比增加的收获产量，以及当在水分充足的条件下栽培时，展示与对照农作物植物相比相当的或增加的产量。此类农作物包括玉米、棉花、大豆、甘蔗、柳枝稷、稻、小麦、苜蓿或芸苔植物的耐受水分亏缺的植物。在本发明的一个方面，植物染色体DNA存在于转基因玉米植物中，且包含用于表达其为天然玉米蛋白或其变体的NF-YB蛋白的重组多核苷酸。

本发明的另一个方面提供了包含含有本发明的植物染色体DNA片段的植物细胞的单倍体衍生物的转基因花粉粒。本发明的另一个方面是具有拥有本发明的所述染色体DNA片段的植物细胞作为来源标志的防伪研磨种子(anti-counterfeit milled seed)。

本发明的其他方面提供了提高农作物植物品系的水分亏缺胁迫耐受性和产量的方法，该方法包括在农作物植物品系的基因组中提供本发明的植物染色体DNA片段。

本发明的另一个方面提供非天然的、转基因种子或繁殖体的制造，所述种子或繁殖体可用于产生具有由于从本发明的植物染色体DNA片段表达NF-YB蛋白而导致的增强的水分亏缺耐受性的转基因植物的农作物。此类方法包括当在水分亏缺胁迫的条件下栽培时就所述增加的产量和当在水分充足的条件下栽培时就增加的或相当的产量筛选具有此类植物染色体DNA片段的植物群体和对照植物，从所述群体选择一株或多株在水分亏缺胁迫的条件下展示与对照植物的产量相比增加的产量或当在水分充足的条件下栽培时与对照植物的产量相比增加的或相当的产量的植物，验证所述植物染色体DNA片段稳定地整合入所述选择的植物中，分析选择的植物的叶组织以确定转基因NF-YB蛋白以达到每微克所述叶组织中的总蛋白40皮克的NF-YB蛋白的水平产生，以及从选择的植物收集种子或再生性繁殖体。

另一个方法提供了近交玉米种子的生产的方法，其包括从也具有稳定整合的本发明的染色体DNA片段的耐受除草剂的玉米植物获得杂交玉米种子，通过允许包含具有所述染色体DNA片段的单倍体衍生物的花粉粒对所述第二玉米品系传粉以产生杂交种子而将来自所述获得的杂交玉米种子的染色体DNA片段渗入第二玉米品系，从杂交种子(其中一部分通过所述传粉产生的种子对于该染色体DNA片段是纯合的，一部分是半合子的，一部分不具有该染色体DNA片段)产生植物群体，通过用除草剂处理选择对于所述染色体DNA片段是纯合的和半合子的的玉米植物，收集来自经除草剂处理后存活的玉米植物的种子和栽培所述种子以产生下一代玉米植物，将从所述后代种子栽培的植物与所述第二玉米品系回交以产生近交玉米品系。还可通过将该近交玉米品系与第三玉米品系杂交以产生杂交种子来进一步使用所述方法。

本发明的另一个方面提供了在无灌溉水的情况下栽培玉米、棉花、大豆、甘蔗、柳枝稷、稻、小麦、苜蓿或芸苔农作物的方法，该方法包括种植具有含有本发明的植物染色体DNA片段的植物细胞的种子，其中从就增加的水分亏缺胁迫耐受性选择的植物产生种子。
附图概述


图1是植物转化载体pMON82754的质粒图谱。

图2是植物转化载体pMON63796的质粒图谱。

图3举例说明在水分亏缺胁迫的条件下植物的产量性能，其中不同的启动子用于重组多核苷酸以表达NF-Y蛋白。

图4举例说明在水分充足的条件下植物的产量性能，其中不同的启动子用于重组多核苷酸以表达NF-Y蛋白。
发明详述
除非明确定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有与本领域技术人员一般理解的意义相同的意义。本领域技术人员熟知和通常使用用于制备和筛选下面描述的转基因植物的方法。

如本文所使用的，“水分亏缺”是指当不以其被植物消耗的速度补充植物可获得的水时的时期。长期水分亏缺通俗称为干旱。如果存在可满足植物的生长率的地下水的可获得的水库，那么降雨或灌溉的缺乏可以不产生立即的水胁迫。在无降雨或灌溉的情况下，在具有充足的地下水的土壤中栽培的植物可存活数天而不对产量产生不利的影响。在干燥的土壤中栽培的植物，对于最小限度的水分亏缺，可能遭受不利的影响。严重的水分亏缺胁迫可引起枯萎和植物死亡；中等干旱可引起减少的产量、矮小的生长或迟缓的发育。植物可从一段时期的水分亏缺胁迫恢复而不显著影响产量。然而，在传粉时，水分亏缺胁迫可在降低产量中具有不可逆转的作用。因此，对于观察水分亏缺胁迫耐受性，玉米生命周期中有用的时期是抽穗前的晚营养体生长期。通过与对照植物比较来确定水分亏缺胁迫耐受性。例如，本发明的植物可经历水分亏缺胁迫而存活，产量比对照植物更高。在实验室和田间试验中，可通过给本发明的植物和对照植物提供比给予充分浇灌的对照植物更少的水来模拟干旱，然后测量性状的差异。

合适的对照植物可以是用于产生本文的转基因植物的亲本品系的非转基因植物。对照植物在一些情况下可以是包含空载体或标记基因但不包含在待评估的转基因植物中表达的本发明的重组多核苷酸的转基因植物品系。在其他情况下，对照植物是表达具有组成型启动子的基因的转基因植物。通常，对照植物是与待检测的转基因植物相同的品系或品种的植物，其不具有表征转基因植物的赋予特定性状的重组DNA。缺乏该赋予特定性状的重组DNA的此类祖先植物可以是天然的、野生型植物，优良的、非转基因植物或无表征转基因植物的赋予特定性状的重组DNA的转基因植物。不具有赋予特定性状的重组DNA的祖先植物可以是具有赋予特定性状的重组DNA的转基因植物的姐妹株。此类祖先姐妹植物可包含其他重组DNA。

如本文所使用的，农作物植物的“产量”是指例如以每英亩蒲式耳或每公顷公吨表示的每单位生产面积农作物例如去壳的玉米粒或大豆或棉花纤维的产量，其通常基于调整的含水量报导，例如通常以15.5％的含水量报导玉米产量。此外，1蒲式耳玉米在Iowa州由法律定义为按重量计算56磅，用于玉米产量的有用的转换因子是每英亩100蒲式耳等于每公顷6.272公吨。产量的其他度量单位也是通行的。

转基因“植物细胞”是指例如通过土壤杆菌介导的转化或通过使用重组多核苷酸包被的微粒进行的轰击，用稳定整合的、非天然的、重组多核苷酸转化的植物细胞。本发明的植物细胞可以是作为微生物或后代植物细胞存在的原始转化的植物细胞，所述后代植物细胞再生成分化的组织，例如再生成在其染色体DNA中具有稳定整合的、非天然的重组多核苷酸的转基因植物、或得自后代转基因植物的种子或花粉。

“转基因”植物或种子是指这样的植物或种子，其基因组已通过重组多核苷酸在其染色体DNA中的稳定整合(例如，通过转化，通过从来自种子或繁殖体的转化植物再生或通过用转化的植物育种)而被改变。因此，转基因植物包括得自转化方法的原始植物的后代植物，包括将转基因植物与野生型植物或其他转基因植物杂交的后代。可通过将具有赋予性状的重组DNA的转基因植物中的性状性质与祖先植物中的性状水平相比来测量希望的性状的增加。尽管可有利地使用用于表达NF-YB蛋白的重组DNA转化许多品种的植物来提供水胁迫耐受性和/或增加的产量，但特别有用的具有水胁迫耐受性的转基因植物包括玉米(maize)、大豆、棉花、芸苔(油菜)、小麦、稻、苜蓿、高粱、草例如柳枝稷、蔬菜和水果。

“表达蛋白质”是指细胞将重组DNA转录成mRNA，并将mRNA翻译成蛋白质的功能。为了表达，重组DNA通常包含调控元件，包括5’调控元件例如启动子、增强子和内含子；其他元件可包括聚腺苷酸化位点、转运肽DNA、标记和通常由本领域技术人员使用的其他元件。可通过蛋白质例如转录因子和通过与启动子连接的内含子或增强子元件调节启动子。还可通过近旁启动子(nearby promoter)调节重组多核苷酸中的启动子。例如，本发明中使用的低组成型启动子的活性可被重组多核苷酸中的第二高表达启动子的活性显著增加至不希望的高水平。例如，US 2005/0022266A1中公开了重组多核苷酸构建体包含与编码NF-YB蛋白的DNA有效连接的低水平表达的稻肌动蛋白启动子的转录单位，之后是包含与编码nptII标记的DNA有效连接的CaMV35S启动子的转录单位。尽管在染色体DNA中具有此类重组多核苷酸的植物展示水分亏缺胁迫耐受性，但CaMV 35S启动子能够使附近的稻肌动蛋白启动子的本来的低水平表达增加至这样的高水平，以至引起在水分充足条件下栽培的植物产量减少。本发明的方面包括具有用于以低水平表达NF-Y蛋白的启动子的重组多核苷酸用于避免当植物在水分充足条件下栽培时产量减少的用途。

“重组多核苷酸”是指通过组合两段不同的分离的DNA片段(例如通过化学合成或通过借助基因工程技术进行的分离的核酸片段的操作)产生的DNA构建体。重组DNA可包含外源DNA或只包含操作的天然DNA。通常以表达盒的形式提供用于在植物中表达蛋白的重组DNA，所述表达盒具有在植物细胞中具有活性的、与编码蛋白质例如NF-YB蛋白的DNA(所述DNA与提供聚腺苷酸化位点和信号的3’DNA元件连接)有效连接的启动子。有用的重组DNA还包括用于表达一个或多个赋予除草剂耐受性和/或抗虫性的蛋白的表达盒。参照序列表，表1中鉴定了各种启动子的DNA，表2中鉴定了编码NF-YB蛋白的不同实施方案的DNA。使用“Gnnnn”命名法鉴定编码天然NF-YB亚基的某些基因，例如拟南芥G481基因。参照用于不同的举例说明性实施方案中的启动子元件(包括增强子、前导序列和内含子元件)的序列表中的DNA，表1中公开了一组有用的启动子。在植物中具有功能的这些启动子和许多其他启动子为本领域技术人员所熟知，且可获得用于本发明的可选择的实施方案中以提供NF-Y蛋白在转基因植物细胞中的表达。
表1

表2
重组DNA构建体通常包括通常包含聚腺苷酸化信号和位点的3′元件。熟知的3’元件包括来自根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)基因的此类元件例如nos 3’、tml 3’、tmr 3’、tms3’、ocs 3’、tr7 3’，例如在U.S.6,090,627中所公开。来自植物基因例如小麦(Triticum aestivum)热休克蛋白17(Hsp17 3’)、小麦泛素基因、小麦果糖-1，6-二磷酸酶基因、稻谷蛋白基因、稻乳酸脱氢酶基因和稻β微管蛋白基因的3’元件公开于美国公开专利申请2002/0192813 A1。

构建体和载体还可包括用于将基因靶靶向植物细胞器，特别地靶向叶绿体、白色体或其他质体细胞器的转运肽。叶绿体转运肽的使用公开于美国专利5,188,642和5,728,925中。

可通过叠加的性状进一步增强本发明的植物，例如具有由于本文公开的DNA的表达而导致的增强的农艺性状、结合除草剂抗性和/或抗虫性性状的农作物。例如，可用农艺学益处的其他性状例如提供除草剂抗性或抗虫性的性状(例如通过使用来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的基因以提供抗鳞翅类，鞘翅类，同翅类，半翅类(hemiopteran)和其他昆虫的抗性的基因)叠加本发明的基因。对于其的抗性用于植物的除草剂包括草甘膦除草剂、二氯甲氧苯酸除草剂、草铵膦除草剂、oxynil除草剂、咪唑啉酮除草剂、二硝基苯胺除草剂、吡啶除草剂、磺酰脲类除草剂、双丙氨磷除草剂、氨苯磺胺除草剂和草丁膦除草剂。通过参考U.S.2003/0106096A1和2002/0112260A1和美国专利5,034,322、5,776,760、6,107,549和6,376,754使得本领域技术人员能够提供叠加的性状，对于昆虫/线虫/病毒抗性，参考美国专利5,250,515、5,880,275、6,506,599、5,986,175和U.S.2003/0150017 A1。
植物细胞转化方法
用于使用重组DNA转化植物细胞的许多方法在本领域内是已知的且可用于本发明。两种通常使用的用于植物转化的方法是土壤杆菌介导的转化和微粒轰击。在美国专利5,015,580(大豆)、5,550,318(玉米)、5,538,880(玉米)、5,914,451(大豆)、6,160,208(玉米)、6,399,861(玉米)和6,153,812(小麦)中举例说明了微粒轰击方法，在美国专利5,159,135(棉花)、5,824,877(大豆)、5,591,616(玉米)和6,384,301(大豆)中描述了土壤杆菌介导的转化，以上所有专利通过引用并入本文。对于基于根癌土壤杆菌的植物转化系统，存在于转化构建体上的额外的元件可包括T-DNA左和右边界序列以帮助重组多核苷酸整合入植物基因组。

通常将重组DNA随机地(即在非特异性位置)导入靶植物品系的基因组中是有用的。在特定情况下，为获得位点特异性整合，例如为替换基因组中现有的基因，为使用植物基因组中的现有启动子，或为在已知对于基因表达是有活性的预先确定的位置插入重组多核苷酸，使重组DNA插入寻靶是有用的。存在的对于功能性移植物是已知的几个位点特异性重组系统包括美国专利4,959,317中公开的cre-lox和美国专利5,527,695中公开的FLP-FRT。

优选在组织培养中在培养基上和在受控的环境中实施本发明的转化方法。“培养基”是指用于体外(即在完整的活生物外)培养细胞的许多营养物的混合物。受体细胞靶包括但不限于分生组织细胞、愈伤组织、未成熟胚和配子细胞例如小孢子、花粉、精子和卵细胞。预期从其可再生能繁殖的植物的任何细胞用作受体细胞。愈伤组织可起源自组织源包括但不限于未成熟胚、幼苗的顶端分生组织、小孢子等。能够如愈伤组织增殖的细胞也是用于遗传转化的受体细胞。用于产生本发明的转基因植物的实用转化方法和材料，例如各种培养基和受体靶细胞、未成熟胚细胞的转化和随后能繁殖的转基因植物的再生公开于美国专利6,194,636和6,232,526中，所述专利通过引用合并入本文。

可从能繁殖的转基因植物收获转基因植物的种子，所述种子用于生长本发明的转化的植物的后代，包括用于选择具有增强的性状的植物的杂交植物品系。除了用重组DNA直接转化植物外，可通过将具有重组DNA的第一植物与缺乏所述DNA的第二植物杂交来制备转基因植物。例如，可将重组DNA导入易于转化的第一植物品系，从而产生转基因植物，所述转基因植物可与第二植物品系杂交以将重组DNA渗入第二植物品系。可将具有提供增强的性状例如增加的产量的重组DNA的转基因植物与具有赋予另一种性状例如除草剂抗性或抗虫性的其他重组DNA的转基因植物品系杂交，从而产生具有赋予两种性状的重组DNA的后代植物。通常，在用于组合性状的此类育种中，提供额外性状的转基因植物是雄性系，携带基本性状的转基因植物是雌性系。该杂交的后代将进行分离，以便一些植物将携带针对两个亲本性状的DNA，一些将携带针对一个亲本性状的DNA；可通过与亲本重组DNA关联的标记鉴定此类植物，例如通过重组DNA的分析进行的标记鉴定或在其中选择标记与重组体连锁的情况下，通过使用选择剂例如除草剂(与除草剂抗性标记一起使用)，或通过选择增强的性状来鉴定此类植物。携带针对两个亲本性状的DNA的后代植物可与雌性亲本品系回交多次，例如通常6至8代，从而产生除了另一个转基因亲本品系的重组DNA外还具有与一个原始转基因亲本品系大体上相同的基因型的后代植物。

在转化的实践中，通常在任一转化实验中只将DNA导入小百分比的靶植物细胞。标记基因用于提供用于鉴定通过接收转基因DNA构建体且将其整合入它们的基因组而被稳定转化的细胞的有效系统。优选的标记基因提供赋予对选择剂例如抗生素或除草剂的抗性的选择标记。本发明的植物对其可具有抗性的任何除草剂是针对选择标记的有用的试剂。将潜在的转化细胞暴露于选择剂。存活细胞群体将通常是其中整合了赋予抗性的基因且所述基因以足以允许细胞存活的水平表达的细胞。可进一步检测细胞以确认外源DNA的稳定整合。通常使用的选择标记基因包括赋予对抗生素例如卡那霉素和巴龙霉素(nptII)、潮霉素B(aph IV)和庆大霉素(aac3和aacC4)的抗性或对除草剂例如草丁膦(bar或pat)和草甘膦(aroA或EPSPS)的抗性的选择标记基因。在美国专利5,550,318、5,633,435、5,780,708和6,118,047中举例说明了此类可选择的实例。还可使用提供目视鉴定转化体的能力的选择标记，例如，表达有色或荧光蛋白例如萤光素酶或绿色荧光蛋白(GFP)的基因或表达β葡萄糖苷酸酶的基因或对于其已知各种生色底物的uidA基因(GUS)。

可在再生培养基中培养暴露于选择剂后存活的植物细胞或在筛选测定中评分为正的植物细胞，并允许其成熟为植物。可将从转化的植物细胞再生的发育中的小植株转移至植物生长混合物(plantgrowth mix)中，并且在转移至温室或生长箱中以进行成熟之前，在例如大约85％的相对湿度、600ppm CO2和25-250微爱因斯坦m-2s-1的光下在可控环境箱中使之受冷而变得耐寒。取决于原始组织，在鉴定转化体后再生植物大约6周至10个月。可使用本领域技术人员已知的常规植物育种方法对植物传粉并产生种子，例如对于转基因玉米通常使用自花传粉。可就重组DNA的表达检测再生的转化的植物或其后代种子或植物，并就增强的农艺学性状的存在进行选择。
转基因植物和种子
栽培得自本发明的植物细胞的转基因植物以产生具有与对照植物相比增强的性状的转基因植物和产生本发明的转基因种子和单倍体花粉。通过就增强的性状选择转化的植物或后代种子鉴定具有增强的性状的此类植物。为有效起见，设计选择方法以评估包含重组DNA的多个转基因植物(事件)，例如2至20或更多个转基因事件的多个植物。从本文提供的转基因种子生长的转基因植物显示了促成增加的产量或增强的水分亏缺耐受性或两者的提高的农艺学性状。

取决于因素例如重组DNA的位置和完整性、拷贝数、无意的其他DNA的插入等，并非所有的转基因事件是提供具有增强的或希望的性状的植物和种子的转基因植物细胞。因此通过就增强的水分亏缺胁迫耐受性和产量筛选转化的后代植物来鉴定本发明的转基因植物细胞。为有效起见，设计筛选程序以评估优选具有单拷贝的来自2个或更多个转基因事件的重组DNA的多转基因植物。

下列实施例用于示范本发明的实施方案。本领域技术人员应当认识到，下列实施例中公开的技术代表了由本发明者发现的在本发明的实践中良好地发挥作用的技术。然而，在本公开内容的教导下，本领域技术人员应当认识到，在公开的特定实施方案中可产生许多变化，但仍获得相似或类似的结果而不背离本发明的精神和范围，因此所有示于或显示于附图和实施例中的物质都应理解为举例说明性的且不起限定作用。
实施例1
本实施例描述了用于转化用于本发明的不同方面的植物细胞的植物表达载体的构建。在
图1和2中举例说明了此类DNA构建体的质粒图谱，其中
图1的质粒用于转化单子叶植物例如玉米，图2的质粒用于转化双子叶植物例如大豆。各质粒在分别鉴定为LB和RB的根癌土壤杆菌T-DNA边界内包含NF-YB表达盒和草甘膦除草剂抗性表达盒。各质粒还包含用于细胞中复制的复制起始区和阻抑物元件(oriV、rop和oriColE)和，壮观霉素/链霉素杀细菌选择标记(SPC/STR)。

特别地参照
图1，质粒pMON82754在左和右土壤杆菌T-DNA边界(LB和RB)之间包含含有NF-YB蛋白表达盒和草甘膦抗性表达盒的重组DNA构建体。NF-YB表达盒具有启动子元件(SEQ ID NO8)，其包含玉米维管束鞘增强型启动子和来自玉米热休克蛋白70基因的转录增强内含子，之后是编码玉米NF-YB蛋白的DNA(SEQ ID NO44)和来自根癌土壤杆菌转录物7的3’元件。草甘膦抗性表达盒包含与编码来自拟南芥EPSPS基因的叶绿体转运肽的DNA有效连接的稻肌动蛋白1启动子、前导序列和内含子以及编码来自根癌土壤杆菌的EPSPS(CP4)的DNA和来自根癌土壤杆菌胭脂碱合酶基因的3’元件。制备其中用表1中鉴定的每一个启动子元件和表2中鉴定的每一个编码NF-YB蛋白元件的DNA取代启动子元件和编码NF-YB元件的DNA的其他质粒。因此，用于转化单子叶植物细胞的分离质粒具有用于表达NF-YB蛋白的重组DNA构建体，其中表1中鉴定的各启动子与表2中鉴定的各编码NF-YB蛋白的DNA有效连接。用每一个产生各重组DNA构建体的多转基因事件的质粒转化来自玉米、柳枝稷、稻和甘蔗的单子叶植物细胞；并且对于每一个转基因事件，再生转基因植物，将其栽培至产生转基因种子或繁殖体(在甘蔗的情况下)。

参照图2，质粒pMON63796包含用于表达NF-YB蛋白的、具有与鉴定为G481(SEQ ID NO53)的编码天然拟南芥NF-YB蛋白的DNA有效连接的CaMV35S增强型启动子(SEQ ID NO1)的重组DNA建体。质粒用于产生其中拟南芥NF-YB蛋白通过启动子遍在表达的的转基因双子叶植物细胞。制备其中用表1中鉴定的每一个动子元件取代启动子元件且用表2中鉴定的每一个编码NF-YB蛋白元件的DNA取代编码NF-YB元件的DNA的其他质粒。因此，用于转化双子叶植物细胞的分离质粒具有用于表达NF-YB蛋白的重组DNA构建体，其中表1中鉴定的各启动子与表2中鉴定的各编码NF-YB蛋白的DNA有效连接。用每一个产生各重组DNA构建体的多转基因事件的质粒转化芸苔、苜蓿、棉花和大豆植物细胞；并且对于每一个转基因事件，再生转基因植物，将其栽培至产生转基因种子。

其存活至产生种子和后代植物的能繁殖的转基因植物的许多转基因事件将不展示水分亏缺胁迫耐受性和增加的产量的性状。后代转基因植物的筛选对于鉴定本发明的转基因植物细胞是必需的。通过在多种水分亏缺测定中评估性状从本文描述的转化的植物群体鉴定具有增强的水分亏缺耐受性的转基因植物。更特别地，在转化后，繁殖转基因植物以产生种子或繁殖体，就水分亏缺耐受性鉴定和筛选(例如使用下面描述的方法)纯合后代植物以鉴定产生本发明的种子的植物。

通过在称为“干旱处理”的水分扣留(water withholding)后的高通量温室筛选法就与对照植物(检测为近交种或杂种)相比的水分亏缺耐受性筛选本发明的植物。例如，就水利用率对转基因玉米植物进行的温室筛选在植物的干旱处理过程中测量与对照植物相比，高度和生物量的植物生长率的改变，例如至少10％的提高。也测量干旱后苗组织的水合状态。苗起始高度(Shoot Initial Height)(SIH)是在最佳条件下生长3周后植物的高度。苗枯萎高度(Shoot WiltHeight)(SWH)是在6天的干旱结束时植物的高度。时间进程实验已显示在大约3天的干旱处理下，野生型玉米植物基本上停止了生长并开始枯萎。因此，具有提高的水利用率的转基因玉米植物将继续生长(可能比有水时的程度低)，从而在干旱实验结束时长成为显著更高的植物。苗枯萎质量(SWM)是在干旱结束时苗中(在土壤线与根球(rootball)分开的植物)的湿物质和干物质的量；在干燥室中在2至3周后测量SDM。苗肿胀质量(Shoot Turgid mass)(STM)是SWM加上在黑暗中3天的40摄氏度的水中浸渍中运输入植物组织的水的质量。实验已显示大多数水在24小时中被阻止，但其在额外的增加变得不显著之前又花费了2天的时间。STM-SWM表示植物中的水利用率，其中从胁迫的恢复比胁迫耐受性本身更重要。相对含水量(RWC)是收获时植物的多少(％)是水的测量。RWC＝(SWM-SDM)/(STM-SDM)*100。充分浇灌的玉米植物RWC为大约98％。通常，在枯萎筛选中，植物RWC为大约60％。在干旱结束时具有更高RWC的植物被认为是更健康的植物且更适合于干旱后的恢复和生长。使用公式RGR＝(SWH-SIH)/((SWH+SIH)/2)*100计算每一颗苗的相对生长率(RGR)。在干旱处理后对转基因芸苔、棉花和大豆植物进行相似的筛选。

表达来自SEQ ID NO29-43的DNA的修饰的NF-YB蛋白的转基因玉米植物的事件显示与表达天然NF-YB蛋白的野生型对照植物和转基因对照植物相比提高的水分亏缺胁迫耐受性。

表达来自与选自SSQ ID NO1-27的启动子有效连接的SEQID NO44或45的DNA的天然NF-YB蛋白的转基因玉米植物的事件显示与野生型对照植物相比提高的水分亏缺胁迫耐受性。
实施例2
本实施例描述了US 2005/0022266A1中公开的转基因植物的产量分析结果。公开的植物包含含有与编码NF-YB(SEQ ID NO28)蛋白的DNA有效连接的低水平表达的稻肌动蛋白启动子的重组转录单位，之后是含有与编码nptII标记的DNA有效连接的CaMV 35S启动子的转录单位(pMON73605)。

表3A表明这些植物在水分亏缺胁迫下显示增加的产量(蒲式耳/英亩)，如通过连续2年的检测所证明。
表3A-在水分亏缺胁迫下的提高的产量

表3B提供了在水分充足的条件下的产量结果(蒲式耳/英亩)，且表明在水分充足的条件下pMON73605转基因植物的产量显著减少。
表3B-在水分充足的条件下减少的产量
下面的表3C中提供了对这些转基因事件确定的NFY B蛋白水平。
表3C NF-YB2蛋白水平
该构建体中的CaMV 35S启动子能够增加附近稻肌动蛋白启动子的本来的低表达，导致大于40皮克NF-YB2蛋白/微克植物叶组织中的总蛋白的产量。转基因植物中高水平的蛋白导致当在水分充足的条件下栽培植物时产量减少。相反地，下面描述了产生低于20pgNF-YB2/微克总叶蛋白的无增强子稻肌动蛋白/NFYB表达构建体(pMON82452和pMON82453)，描述了在水分亏缺胁迫条件和水分充足条件下都具有增加的产量的转基因植物。
实施例3
就在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下的产量评估如实施例1中所述制备的、包含稳定地插入在染色体中且在表4中所示的启动子控制下表达NF-YB蛋白的DNA构建体的转基因玉米植物。
表4转基因玉米植物中的启动子NF-YB构建体
就在水分亏缺胁迫条件下的产量，就在水分充足条件下的产量和就叶组织中表达的NF-YB蛋白的量分析这些转基因玉米植物。

将具有实施例1中描述的重组DNA的纯合近交玉米植物与相容性测交品系杂交以产生杂交种子。将所得的种子继续用于在常规栽培玉米的地理区域例如在Iowa、Illinois、Kansas和California州的重复产量试验。在一些试验中，田间水含量受灌溉的控制，然而其他试验依赖于天然降雨。预选择继续进行该研究的转基因事件为对于与转基因关联的选择标记是单拷贝。以相同的植物密度和重复栽培对照和转基因事件。植物害虫、杂草、耕地和施肥的田间管理与地理特异性实践(geography specific practice)一致。

在灌溉的田间，灌溉转基因和对照植物至田间持水量(water-holding capacity)内直至V10玉米叶期。通过滴灌或空中线性灌溉(overhead linear irrigation)递送灌溉水。为了提供水分亏缺胁迫条件，一旦玉米植物达到V10叶期，允许限制灌溉水直至植物显示显著的AM卷叶(连续2天)。该水分状况的持续时间跨越V10叶至R2生殖期。一旦农作物达到R2发育期，重新浇灌直至完全恢复经过余下的生长季节。

一旦玉米农作物达到生理成熟即10-25％的谷粒含水量，收获小块土地。将所得的谷粒产量标准化为15.5％的含水量，并表示为蒲式耳/英亩。

针对水分亏缺胁迫和水分充足条件进行产量数据分析。以几种方法分析产量。一个方法包括使用统计学聚类分析以选择具有与干旱相关的相似环境特征的位置的组。用于形成相似位置的聚类的三个变量是在开花前30天期间和开花后30天期间平均日高温；通过使用标准正态分布以定义权重按对开花的接近度加权的、相同的60天期间累积降水量和使用的水对蒸发蒸腾作用之间的平均差异；和在该位置上对照家系的平均产量。然后使用另一种方差分析模式分析产量，其中聚类的固定效应和位置的随机效应嵌套在它们相应的聚类内。

产量数据分析比较与相应的对照地块相比的来自单个构建体的所有事件的产量。还将事件与相应的对照比较用于事件水平分析。产量分析的结果(以蒲式耳/英亩表示的产量Δ)报导于表5A至5M中。
表5A
表5B
表5C
表5D
表5E
表5F
表5G
表5H
表5I
表5J
表5K
表5L
表5M

为了使NF-YB蛋白的表达与水分亏缺耐受性和在水分亏缺以及最佳水分条件下的产量相互关联，使用在兔子中产生的多克隆抗体通过标准的ELISA技术测量转基因植物中的NF-YB2蛋白。NF-YB2蛋白水平报导为“皮克NF-YB2蛋白每微克总蛋白”，其包括天然和外源NF-YB2蛋白。使用Bradford蛋白质测定法(Bio-Rad，Hercules，CA)测量总蛋白。测量的每一种组织中的NF-YB2蛋白的背景水平(pgNF-YB2/μg总蛋白)如下 V3叶 3.5 V12叶 6 根 2.5 穗 5 雄花穗 3.2 谷粒 9.1 未成熟的穗轴22.6
不同组织和不同发育阶段的蛋白质水平的分析结果在表6A和6B中报导为各构建体的多事件的平均值。
表6A
表6B

表7中提供了(与表6A和6B中提供的集合的构建体水平的数据相比)个体事件在水分亏缺胁迫条件下的产量、在水分充足的条件下的产量和叶组织中表达的NF-YB蛋白的量(经校正减去从天然DNA产生的NF-YB蛋白的背景水平)的数据分析的结果。数据表明表达的NF-YB蛋白的水平与在水分亏缺胁迫条件下和水分充分条件下都增加的产量之间的负相关。当将产量(蒲式耳/英亩)对NF-YB水平作图时，在水分亏缺胁迫条件下显示增加的产量的事件也包含低水平的NF-YB(达到40皮克NF-YB2蛋白/微克植物叶组织中的总蛋白)(图3)。类似地，在水分充足条件下显示增加的产量(产量Δ表示为蒲式耳/英亩)的事件也包含低水平的NF-YB(达到40皮克NF-YB2蛋白/微克植物叶组织中的总蛋白)(图4)。对于在广泛的可获得的水的条件下玉米中增加的产量的特别有用的实施方案提供0.1至11pg NFB2/ug总蛋白。特别的实例是ZM_M87949(8.0pg NFB2/ug总蛋白；在水分亏缺胁迫下+6.6蒲式耳/英亩的产量增加；在水分充足的条件下+5.2蒲式耳/英亩的产量增加)和ZM_M88595(7.5pg NFB2/ug总蛋白；在水分亏缺胁迫下+6.6的产量增加；在水分充足的条件下+6.3蒲式耳/英亩的产量增加)。
表7.来自包含启动子NF-YB构建体的玉米的产量和蛋白质数据 实施例4
就在水分亏缺胁迫和充足的条件下的产量评估如实施例1中所述制备的、包含稳定地插入染色体中并在表8中所示的启动子控制下表达NF-YB蛋白的DNA构建体的转基因棉花植物。
表8转基因棉花植物中的启动子NF-YB构建体
在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下栽培包含上述构建体且表达拟南芥NF-YB蛋白的转基因棉花植物的事件，并鉴定具有低叶蛋白水平的事件，其当在水分亏缺胁迫条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比提高的产量(蒲式耳/英亩)，且当在水分充足的条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比相当的或提高的产量。
实施例5
就在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下的产量评估如实施例1中所述制备的、包含稳定地插入染色体中并在表9中所示的启动子控制下表达NF-YB蛋白的DNA构建体的转基因大豆植物。
表9转基因大豆植物中的启动子NF-YB构建体
在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下栽培包含上述构建体且表达拟南芥或大豆G481NF-YB蛋白的转基因大豆植物的事件，并鉴定具有低叶蛋白水平的事件，其当在水分亏缺胁迫条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比提高的产量(蒲式耳/英亩)，且当在水分充足的条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比相当的或提高的产量。
实施例6
就在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下的产量评估如实施例1中所述制备的、包含稳定地插入染色体中且在表1中所示的启动子控制下表达NF-YB蛋白的DNA构建体的转基因苜蓿、芸苔、柳枝稷、甘蔗和稻植物。在水分亏缺胁迫和水分充足的条件下栽培这些转基因植物的事件，并鉴定具有低叶蛋白水平的事件，其当在水分亏缺胁迫条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比提高的产量，且当在水分充足的条件下栽培植物时，赋予与野生型对照植物相比相当的或提高的产量。

如上述公开内容所教导，可制备和使用本文公开或请求保护的所有材料和方法而无需过度实验。尽管以优选实施方案和示例性实施例的方式描述本发明的材料和方法，但对于本领域技术人员来说很明显的是可对本文描述的材料和方法进行改变而不背离本发明的概念、精神和范围。对于本领域技术人员来说很明显的所有此类相似的替换和修饰视为在由所附权利要求所定义的本发明的精神、范围和概念之内。
序列表
<110>Nelson，Donald E.
Heard，Jacquel ine
<120>具有提高的胁迫耐受性的转基因农作物植物
<130>38-15(54485)B
<150>60/816,086
<151>2006-06-23
<160>61
<210>1
<211>613
<212>DNA
<213>花椰菜花叶病毒
<400>1
ggtccgatgt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga aacctcctcg gattccattg 60
cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag gaaggtggct cctacaaatg 120
ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc tctgccgaca gtggtcccaa 180
agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa gacgttccaa ccacgtcttc 240
aaagcaagtg gattgatgtg atggtccgat tgagactttt caacaaaggg taatatccgg 300
aaacctcctc ggattccatt gcccagctat ctgtcacttt attgtgaaga tagtggaaaa 360
ggaaggtggc tcctacaaat gccatcattg cgataaagga aaggccatcg ttgaagatgc 420
ctctgccgac agtggtccca aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga 480
agacgttcca accacgtctt caaagcaagt ggattgatgt gatatctcca ctgacgtaag 540
ggatgacgca caatcccact atccttcgca agacccttcc tctatataag gaagttcatt 600
tcatttggag agg 613
<210>2
<211>612
<212>DNA
<213>花椰菜花叶病毒
<400>2
ggtccgattg agacttttca acaaagggta atatccggaa acctcctcgg attccattgc 60
ccagctatct gtcactttat tgtgaagata gtggaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc 120
catcattgcg ataaaggaaa ggccatcgtt gaagatgcct ctgccgacag tggtcccaaa 180
gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca 240
aagcaagtgg attgatgtga tggtccgatt gagacttttc aacaaagggt aatatccgga 300
aacctcctcg gattccattg cccagctatc tgtcacttta ttgtgaagat agtggaaaag 360
gaaggtggct cctacaaatg ccatcattgc gataaaggaa aggccatcgt tgaagatgcc 420
tctgccgaca gtggtcccaa agatggaccc ccacccacga ggagcatcgt ggaaaaagaa 480
gacgttccaa ccacgtcttc aaagcaagtg gattgatgtg atatctccac tgacgtaagg 540
gatgacgcac aatcccacta tccttcgcaa gacccttcct ctatataagg aagttcattt 600
catttggaga gg 612
<210>3
<211>293
<212>DNA
<213>花椰菜花叶病毒
<400>3
ccgatcctac ctgtcacttc atcaaaagga cagtagaaaa ggaaggtggc atctacaaat 60
gccatcattg cgataaagga aaggctatca ttcaagattc ctctgccgac agtggtccca 120
aagatggacc cccacccact aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca accacgtctt 180
caaagcaagt ggattgatgt gatacttcca ctgacgtaag ggatgacgca caatcccact 240
atccttcgca agacccttcc tctatataag gaagttcatt tcatttggag agg 293
<210>4
<211>1696
<212>DNA
<213>稻(Oryza sativa)
<400>4
tattctgtca tcagctatca ctgctctgcc tgaacttgtc tgagctatta ctactgtagt 60
atatgaattt atgaagtgga gtctcgtaac aaaaatacga gtatactccg tactgtacta 120
cccttatcag gattcaagga tactaggagt atagcattac cagatcaggc acttagatgt 180
ggccatccaa agagtaatgg taatagccta ataggagtac catctactat tgatctttca 240
aaaaaaaaag tactagtata gaagtagtat ccagctagag ctgcttaaca gggtcagaat 300
ttgtccaaac agagcttgta atgcacactg acgaagtcga tccgatcgaa tcagagtcaa 360
catttaaaga gtactatttc gaagtaaaac tgttcagttc ttacaagatt acatgtgaat 420
ttgcaagact tggacatgag tgttcatctc gtagtttaat gatgggtacc caacctgcaa 480
caacagtgct ttaaattgta caagcagagg gtaccaacag agtaatttgc acatgcagtc 540
ctgaacctga tgccattgcg aaacacacaa ccctatacgg tgcagatgca agggagccca 600
attcagtccc agccattatc tgtattgccg tacttccgca gggaaagtta ccctctcatc 660
tgatctacca ttgcatacat ctcaaaagga agtgagtaaa aaagaaaaca ggaccaatct 720
tcagagataa gtttttgaaa cctatcttca gagataagtt cactcggcga taggagagga 780
cctgatttgg actcaaatca ggtgttgacg aatagagtag caagagtttt ttcgacgggt 840
caagacctca agggtcttaa cagttgaact aactcggtta tgatttggac acttggtgat 900
taactactga taatagtact acttattgtt attggcttgt tacatcattc ggtgctcaaa 960
aatcagatgc aaatttagat gggacagaca gcagctacta gcaacataag agaattatgt 1020
tcagtgtatc atgcatgact aaactctgaa cgtactcacc tggatccaga tgcgagcagt 1080
acagtacctg tgcacattgc ttgtgtatta ctccacttaa ttacgaactc tattattttc 1140
ctccgataat gcccgcagaa caaggttgtc actgaaaaat ggtcctctcc agagtccagg 1200
agctatagga ggagtatgat actccttagc aatcatatac tcatatgaca tatccaaatt 1260
gacaccgggg ttaagccgtt aaccgtcact acgagttgca cttgtataaa caaaaaacaa 1320
gggagaaaac cttgtgtccc ccccatgatg cagaaatcta ataagagcag cccaacgctt 1380
ccggttggtg gcggtagacc ggcctcttta aactacccca tccgccccag atttatcaat 1440
tactcctcgt catctcgtct cgtctccgcc accgtgcgcg cgtcccctat attagacccc 1500
ccaaccgggc accggacaca ccatcaccaa cacaccactg caaacccatc cgcctccgca 1560
ccgcatcgca cctacaaatt gtgcacgctg caccgctcaa aaaaaagaag aaactaaagt 1620
cgtacgtagg acgcggcgtg cgagcgttgg tgcggtgcgc ggcggcgcgc ggggaagtag 1680
tgagagcatc gatcat 1696
<210>5
<211>1406
<212>DNA
<213>玉米(Zea mays)
<400>5
gattggtaga atccgacggg ttgatacccc tgcaatcgta gcgtgatgag ggtgtgaatg 60
ttgccgatgt gtggacttcg aggaaatgat agcccctgga tgccgagata gccgaagtcg 120
aggtggtcgt ggtcgggaga cacgcagcag tagcctattc tttggtaggg gtcgatgttc 180
aagcgtcaac gatcggctgg gcgacataaa aattagcacc agggtgacct tcttgcttct 240
tcgatcgtct ggacgtcgag gagccccgcg gcagcgcacg cgtctgcacc gttatggtgg 300
ccgcgctcgc gatggaatag aaggggtaat gatggatccg gccaggaagg ccacgacatc 360
gacggatcca accggcaaga cggcgatccg gttaaataga cgacggatct agctgggaag 420
gtagactcta tattaaatga ggttgtacat gccctaataa ctttataaat ctaatttatt 480
cagaggcaag gtagtagtat tatctttccc aacggatagt tatctgatct gccgttcagc 540
ttgatcgata actttataaa tctaatttat tcagaggccg gcggcagcgc acacgtctgc 600
accagtaatg ttagccgcgc ctgtggcgta atagaagggg taacgatgga tccgaccaga 660
aaggcctcga catcgacgga tccagacggc gatccggtca aagagacgac gaatctagcc 720
gagaaggtag atctctcgag agagttcata ttaaatgatg ttgtacatgc cataataact 780
ctataaatct aatttattca taggcgaagg tagtagtatt atctttccca gcggatcgtt 840
atctgatctg ccgttcagct tgatcgatcc acgtcgtttg atctcggcga gcagcacatg 900
gcggctcttc ttgtgtacag gtctcactct ctgctacttc agtgcaaggc ggagtgaacg 960
cacacaataa cgtgagtatt gtgggaacta ccttgtagat gcaaacgatg taaatccacc 1020
tgctccacca agtgcccgcc cggctctatc cattccattc gtcaacatgc aggttcaaga 1080
ctggcccgtg ctggaccagt gagcggtgcc ggtggacccc aatgcaagcg aagcgagtga 1140
ccatcgggga agcctcccgt gctgccccca catggcttgc ctgaatgcct ctctctcgcc 1200
gcagtgccct ctctctctcc tcctcctctc cgtcgaaggg cgtcacgaga gcccagaggg 1260
catccgaggc ccccacccca ccccttcctc ccgtgtatat aagcagtggc agggtgagcg 1320
tctctcctca gaccaccact gcgccatggc cagctagagc caaccagaag agcttgcagt 1380
tactgagagt gtgtgagaga gagagg 1406
<210>6
<211>763
<212>DNA
<213>高梁属的种(Sorghum sp.)
<400>6
ccggccgcca tggcggccgc gggaaattcg attccacgga gttctagatt tggtttttgc 60
ggtgaactaa acaaggccat atattagtgt gctgtgtttc cccctacgaa gcattgtgga 120
gtcgtgcttg atccacgtcg tttgatctgg gcgaggtgca caaacgtcac atggctcttc 180
ttgctacttc agtgcaaagg gagtgtatgc atgcacacaa taatgcggcc tgcgtctgtg 240
tacggtagaa aaatacttta tacaggatat gcaacgacgt gaatgctgca cctgccccct 300
gcccctgccc ctgcccgccc tagtagctat tcacggctct atccattcca ttgccgtgcg 360
tcaacaggtc cagactggcc cgggtccaag cgagtgacca acgcgggaag cctcccgtcc 420
ctccctcccc cacatgggac atggctgcct gatgaatgcc tctcgccgca ctgcccctgc 480
ccctgcccct gcccctgccc tcactccatc ggagggcggc ggcttcacga gagccgagca 540
ggacccagac ccagcgggca tccgaggccc ccacccccac ccccacccct tcctccgtgt 600
ataaaagcgg tgccagggtg agcgtctctc ctcacactga ctgcaccaga acaagagctt 660
gagagtgaga gtgaggctgc agggaagtgt aatcactagt gaattcgcgg ccgcctgcag 720
gtcgaccata tgggagagct cccaacgcgt tggatgaagc tgg763
<210>7
<211>1031
<212>DNA
<213>玉米
<400>7
gatcgtgatt taaccgcaag tcacatttag cacttaaatc cttccaccac cagctcaata 60
atctttataa aaaaacccct aacaaatcat ggttgtatct gtggttggat cgtaatctaa 120
tgaatcaaat agtttgcttg cacgcttaca cagaaacact gcttgcatag cagtcgttgc 180
ctatgtctta catgcaaatt tcatgagtca tgggctcata accaatgcca ctggtacact 240
gttataagga atattcgtcc tagcgtaaag aacttaagta tattaatata atttacctta 300
cacatctaaa gaagcacaaa tccattgaaa atgataaatt tcagttctta ccttgtcctc 360
gatctcatct gttttgattg ctggtaaata cattcgatcc tttttttaaa aaaaaactga 420
agatattttt gccacttcaa tctattttga cgtgatcata cggaccgcca ggcatttttt 480
ttcgcctttc tttaacctca tctcatcggc aattaaagac cagggaaata gtaattgcga 540
caggcttctc tggtcctatt ggcgatcagg acaacccacc taaaacacat gccaaaaagg 600
gctttctctc cctgctgaac accaactacc ctgcgccggg tccagggtgc gccgggttct 660
ccctctcgct cccacgcggc aaaccccacg acgtgctata aatattccac gaacggcccg 720
gatacctcca gccccgcatc gcaccctccc tggccgcctt ctcttctcca gcgtccgatc 780
tctcccactc gccttcctca ccgcagctct cccggctcgg tcgcttcgcc acctccgtcc 840
tccccccgcg ctcggtcgct cgccacctgc tctcccctcc ctccacgttg ctcgcgcccg 900
cgcttatata aggtacgccg cctcgactct ccaaacccct ccgcgtggac ctaaggtccg 960
gcgcgccgag atggagctga tggatctagg gtttcggttg cggcggcggt cctgtagtgc 1020
aggaggagct c 1031
<210>8
<211>1603
<212>DNA
<213>玉米
<400>8
ctgcgtgtac aactaatata attgtccaaa caatttctgt ggcacgtact taagtttgag 60
ccaggataca aactttggcc gctaatggtt gctgtcgccg gtcaagaggg cgttggctac 120
ttgagttaga ttttggttgt gtttcatccc cacgtacgtc cagcaaagaa aaattgaagc 180
tagtgcatgc atggttcgtc atcaaatgca tggccggccg gatacaaatt tgaactgtag 240
ctatcgacgt acgcatgtat taatttatat cagagaagac aaggaacaca gatacataca 300
tgtcgaaaca atcattttct atggcacttg agctagctag catacaattt tgttttaaat 360
gaaatgaaac tgaagacgat cgatcgaatt gaaggttgtg gttcgtgagc aatgcaatgc 420
agtttcacag aacgttgcca atgcaacaag ccaccaagaa aagagaagtc tactcgatct 480
tgcaatgatt aggcttggat gatgcgtggg gccacgtacg tatggacatc gaagaacccc 540
atcctcagcg tgtggcctga gggtgatggc aaagctgatc cacacattgc ggcccccttt 600
cccccctcag agaccctgac ctcccgagca cagccagcca ccgcgcaacg ccggccacca 660
ccaccaccac catacctgct agcgctagct ctctttattt aacgccgccg tgtgcgtgcc 720
tcgacgacct cactactttg agctgcaagg tccgaactaa aaagcacaag aaagatctac 780
cgtcttcggt acgcgctcac tccgccctct gcctttgtta ctgccacgtt tctctgaatg 840
ctctcttgtg tggtgattgc tgagagtggt ttagctggat ctagaattac actctgaaat 900
cgtgttctgc ctgtgctgat tacttgccgt cctttgtagc agcaaaatat agggacatgg 960
tagtacgaaa cgaagataga acctacacag caatacgaga aatgtgtaat ttggtgctta 1020
gcggtattta tttaagcaca tgttggtgtt atagggcact tggattcaga agtttgctgt 1080
taatttaggc acaggcttca tactacatgg gtcaatagta tagggattca tattataggc 1140
gatactataa taatttgttc gtctgcagag cttattattt gccaaaatta gatattccta 1200
ttctgttttt gtttgtgtgc tgttaaattg ttaacgcctg aaggaataaa tataaatgac 1260
gaaattttga tgtttatctc tgctccttta ttgtgaccat aagtcaagat cagatgcact 1320
tgttttaaat attgttgtct gaagaaataa gtactgacag tattttgatg cattgatctg 1380
cttgtttgtt gtaacaaaat ttaaaaataa agagtttcct ttttgttgct ctccttacct 1440
cctgatggta tctagtatct accaactgac actatattgc ttctctttac atacgtatct 1500
tgctcgatgc cttctcccta gtgttgacca gtgttactca catagtcttt gctcatttca 1560
ttgtaatgca gataccaagc ggcctctaga ggccctacgg gcc 1603
<210>9
<211>582
<212>DNA
<213>玉米
<400>9
ggtactcctg agatactata ccctcctgtt ttaaaatagt tggcattatc gaattatcat 60
tttacttttt aatgttttct cttcttttaa tatattttat gaattttaat gtattttaaa 120
atgttatgca gttcgctctg gacttttctg ctgcgcctac acttgggtgt actgggccta 180
aattcagcct gaccgaccgc ctgcattgaa taatggatga gcaccggtaa aatccgcgta 240
cccaactttc gagaagaacc gagacgtggc gggccgggcc accgacgcac ggcaccagcg 300
actgcacacg tcccgccggc gtacgtgtac gtgctgttcc ctcactggcc gcccaatcca 360
ctcatgcatg cccacgtaca cccctgccgt ggcgcgccca gatcctaatc ctttcgccgt 420
tctgcacttc tgctgcctat aaatggcggc atcgaccgtc acctgcttca ccaccggcga 480
gccacatcga gaacacgatc gagcacacaa gcacgaagac tcgtttagga gaaaccacaa 540
accaccaagc cgtgcaagca ccctgcaggg gccctacggg cc582
<210>10
<211>1790
<212>DNA
<213>玉米
<400>10
gacatggagg tggaaggcct gacgtagata gagaagatgc tcttagcttt cattgtcttt 60
cttttgtagt catctgattt acctctctcg tttatacaac tggtttttta aacactcctt 120
aacttttcaa attgtctctt tctttaccct agactagata attttaatgg tgattttgct 180
aatgtggcgc catgttagat agaggtaaaa tgaactagtt aaaagctcag agtgataaat 240
caggctctca aaaattcata aactgttttt taaatatcca aatattttta catggaaaat 300
aataaaattt agtttagtat taaaaaattc agttgaatat agttttgtct tcaaaaatta 360
tgaaactgat cttaattatt tttccttaaa accgtgctct atctttgatg tctagtttga 420
gacgattata taattttttt tgtgcttaac tacgacgagc tgaagtacgt agaaatacta 480
gtggagtcgt gccgcgtgtg cctgtagcca ctcgtacgct acagcccaag cgctagagcc 540
caagaggccg gaggtggaag gcgtcgcggc actatagcca ctcgccgcaa gagcccaaga 600
gaccggagct ggaaggatga gggtctgggt gttcacgaat tgcctggagg caggaggctc 660
gtcgtccgga gccacaggcg tggagacgtc cgggataagg tgagcagccg ctgcgatagg 720
ggcgcgtgtg aaccccgtcg cgccccacgg atggtataag aataaaggca ttccgcgtgc 780
aggattcacc cgttcgcctc tcaccttttc gctgtactca ctcgccacac acaccccctc 840
tccagctccg ttggagctcc ggacagcagc aggcgcgggg cggtcacgta gtaagcagct 900
ctcggctccc tctccccttg ctccatttga tagtgcaacc catcgagcta caggcctaat 960
ctagcctcgg actagtcgag agatctaccg tcttcggtac gcgctcactc cgccctctgc 1020
ctttgttact gccacgtttc tctgaatgct ctcttgtgtg gtgattgctg agagtggttt 1080
agctggatct agaattacac tctgaaatcg tgttctgcct gtgctgatta cttgccgtcc 1140
tttgtagcag caaaatatag ggacatggta gtacgaaacg aagatagaac ctacacagca 1200
atacgagaaa tgtgtaattt ggtgcttagc ggtatttatt taagcacatg ttggtgttat 1260
agggcacttg gattcagaag tttgctgtta atttaggcac aggcttcata ctacatgggt 1320
caatagtata gggattcata ttataggcga tactataata atttgttcgt ctgcagagct 1380
tattatttgc caaaattaga tattcctatt ctgtttttgt ttgtgtgctg ttaaattgtt 1440
aacgcctgaa ggaataaata taaatgacga aattttgatg tttatctctg ctcctttatt 1500
gtgaccataa gtcaagatca gatgcacttg ttttaaatat tgttgtctga agaaataagt 1560
actgacagta ttttgatgca ttgatctgct tgtttgttgt aacaaaattt aaaaataaag 1620
agtttccttt ttgttgctct ccttacctcc tgatggtatc tagtatctac caactgacac 1680
tatattgctt ctctttacat acgtatcttg ctcgatgcct tctccctagt gttgaccagt 1740
gttactcaca tagtctttgc tcatttcatt gtaatgcaga taccaagcgg1790
<210>11
<211>1263
<212>DNA
<213>玉米
<400>11
acttaaaaat caacaatatc ttcacatgac ttaattataa tgtcttgctt gagacgttgt 60
ttttgctact acataagata aagttcaaat aaatgcatgg tggagttcag cctaggcaaa 120
gtgatggtcc gaatgattaa caccccaagc aagacattat aagtcatgtg aagatctgca 180
agacgtgcta agagtctctg acacaccaac aagtggaagc ccgaacaaac aaaaacgaag 240
ccatcaaagt tgagataaag aggtggataa attgaaaatt gtctcatgat tttggatata 300
ctcaaatcga catgacttca tctctaaact atagaacttt tgatttgctt ttcaaaaagt 360
ccaagatcaa caaaacgtgt tggtgggtgc gggtttggtt cttaacccaa taggtttttt 420
ctcgtgtgta tgaaaaggtt gtacccatgt gtgaccgagc cagacagggg tacgggcaaa 480
ccgaagggaa accacttagg tggatccctt ggctagcctg agactgacac accataagtg 540
atcggccgct tttaactacg cctggtgccg agccacaata gagatgtcgg tctgtctccc 600
acttatgacc tacgaacccc tcgtactatg gctcatctat gggtcgtgtg ccccttggct 660
tactgcgcac tcatgcccta tcaaggctag gccagagtgc gtaggccgct ttcagagatc 720
actcggtgaa aaaatcactc ggtgatgaaa ccggcgaact gtcgttgggt gggtgggtct 780
tactatcaaa gaaaacgtat tccagcaaac gtattccact ctccacaaaa taaacatttc 840
tgttcggtta cctaggtgag gcatcctgta agaacttggc tgtgtttagt cacagcaaac 900
gtataccact ctccacaaaa taaaataaaa aacgggtcag tgaagctgca attaatccct 960
tctcttgctt gctggttgct gccagggaaa tggcattagt gtttgttccc gttccgaaga 1020
ccgcagcaac ccccggaatc ggaaacgcct gccccctgca gcaccaaaga ccgtaccaac 1080
ccccgcaatc gcagttcgca aaccaaacta atttgtgtac acaaaccggc cccgtctcgg 1140
ttctattcta taaaaccccc gccagaccgc tggcttgttc cgtcgcctcc gctgtccgct 1200
gcacagactg tagtaccggg gcaggggcag gggcaggggc acaaacagag ccacaccaca 1260
cac 1263
<210>12
<211>925
<212>DNA
<213>豌豆(Pisum sativum)
<400>12
tatgaaccaa gtttcttgtt cttcaaactt tttctaattc tccatcttag agtttctttt 60
cataattaat gtaggaattg accctagtaa gaaagtcact catacccttt ccttcttcta 120
gccctaaatt tccgtgaaac atatagtctt cccttaaccc tttttggaac atccaacatt 180
gcagcttatc atatattgat cctactttgg tgaagcgttc catgtactcc cggaggattt 240
ccattttcat ctattggatt cctatgaaga caactatagt cttggatttc aaattttggg 300
aagtaaacta ggaagtgaag gagtagcaga attccttcca agaatctatg caaccatcag 360
gtaagatttt aaaccatgtc atggcagctc cattgtgggt cagggcgtat agtttacatt 420
tcacaacgct ctatcccgtg acattattaa ataccatttt gaaataaaaa gtttctacaa 480
aaaaagtcct tcgtcgttat ccatcatttt tattaaagta tattttatta tttattcaaa 540
caagtaatca tccattagcg gagaaataga ggagtgaagc atttaacttt tccaaacgaa 600
agcgacgtaa tcaacctaca tttgacttag attggattaa gcatgcaaca aattaaaatt 660
taatcgccgt tgcaatttgc acaccacaat aagacgtgtg atgaaaacga tatctacgtg 720
gaaataatcc aagggtggcc ttgtggaccc atgcaacaca ggatgacaac acgtggacgg 780
tcaagatttc accaattatt ctctcccacc ttataaaatg gggcacgcaa catcattaaa 840
agacatcaat tgtagtgaaa ataacagcaa ccaagcaatt aatatcaatt gttgtttgca 900
aaaaatctta ggttctgaaa atacc925
<210>13
<211>2192
<212>DNA
<213>稻
<400>13
gacaacaaca tgcttctcat caacatggag ggaagaggga gggagaaagt gtcgcctggt 60
cacctccatt gtcacactag ccactggcca gctctcccac accaccaatg ccaggggcga 120
gctttagcac agccaccgct tcacctccac caccgcacta ccctagcttc gcccaacagc 180
caccgtcaac gcctcctctc cgtcaacata agagagagag agaagaggag agtagccatg 240
tggggaggag gaatagtaca tggggcctac cgtttggcaa gttattttgg gttgccaagt 300
taggccaata aggggaggga tttggccatc cggttggaaa ggttattggg gtagtatctt 360
tttactagaa ttgtcaaaaa aaaatagttt gagagccatt tggagaggat gttgcctgtt 420
agaggtgctc ttaggacatc aaattccata aaaacatcag aaaaattctc tcgatgaaga 480
tttataacca ctaaaactgc cctcaattcg aagggagttc aaaacaatta aaatcatgtt 540
cgaattgagt ttcaatttca ctttaacccc tttgaaatct caatggtaaa acatcaaccc 600
gtcaggtagc atggttcttt ttattccttt caaaaagagt taattacaaa cagaatcaaa 660
actaacagtt aggcccaagg cccatccgag caaacaatag atcatgggcc aggcctgcca 720
ccaccctccc cctcctggct cccgctcttg aatttcaaaa tccaaaaata tcggcacgac 780
tggccgccga cggagcgggc ggaaaatgac ggaacaaccc ctcgaattct accccaacta 840
cgcccaccaa cccacacgcc actgacaatc cggtcccacc cttgtgggcc cacctacaag 900
cgagacgtca gtcgctcgca gcaaccagtg ggcccacctc ccagtgagcg gcgggtagat 960
ctggactctt acccacccac actaaacaaa acggcatgaa tattttgcac taaaaccctc 1020
agaaaaattc cgatattcca aaccagtaca gttcctgacc gttggaggag ccaaagtgga 1080
gcggagtgta aaattgggaa acttaatcga gggggttaaa cgcaaaaacg ccgaggcgcc 1140
tcccgctcta tagaaagggg aggagtggga ggtggaaacc ctaccacacc gcagagaaag 1200
gcgtcttcgt actcgcctct ctccgcgccc tcctccgccg ccgctcgccg ccgttcgtct 1260
ccgccgccac cggctagcca tccaggtaaa acaaacaaaa acggatctga tgcttccatt 1320
cctccgtttc tcgtagtagc gcgcttcgat ctgtgggtgg atctgggtga tcctggggtg 1380
tggttcgttc tgtttgatag atctgtcggt ggatctggcc ttctgtggtt gtcgatgtcc 1440
ggatctgcgt tttgatcagt ggtagttcgt ggatctggcg aaatgttttg gatctggcag 1500
tgagacgcta agaatcggga aatgatgcaa tattaggggg gtttcggatg gggatccact 1560
gaattagtct gtctccctgc tgataatctg ttcctttttg gtagatctgg ttagtgtatg 1620
tttgtttcgg atagatctga tcaatgcttg tttgtttttt caaattttct acctaggttg 1680
tataggaatg gcatgcggat ctggttggat tgccatgatc cgtgctgaaa tgcccctttg 1740
gttgatggat cttgatattt tactgctgtt cacctagatt tgtactcccg tttatactta 1800
atttgttgct tattatgaat agatctgtaa cttaggcaca tgtatggacg gagtatgtgg 1860
atctgtagta tgtacattgc tgcgagctaa gaactatttc agagcaagca cagaaaaaaa 1920
tatttagaca gattgggcaa ctatttgatg gtctttggta tcatgctttg tagtgctcgt 1980
ttctgcgtag taatcttttg atctgatctg aagataggtg ctattatatt cttaaaggtc 2040
attagaacgc tatctgaaag gctgtattat gtggattggt tcacctgtga ctccctgttc 2100
gtcttgtctt gataaatcct gtgataaaaa aaattcttaa ggcgtaattt gttgaaatct 2160
tgttttgtcc tatgcagcct gatccttaat ta 2192
<210>14
<211>1400
<212>DNA
<213>稻
<400>14
ctcgaggtca ttcatatgct tgagaagaga gtcgggatag tccaaaataa aacaaaggta 60
agattacctg gtcaaaagtg aaaacatcag ttaaaaggtg gtataaagta aaatatcggt 120
aataaaaggt ggcccaaagt gaaatttact cttttctact attataaaaa ttgaggatgt 180
ttttgtcggt actttgatac gtcatttttg tatgaattgg tttttaagtt tattcgcttt 240
tggaaatgca tatctgtatt tgagtcgggt tttaagttcg tttgcttttg taaatacaga 300
gggatttgta taagaaatat ctttaaaaaa acccatatgc taatttgaca taatttttga 360
gaaaaatata tattcaggcg aattctcaca atgaacaata ataagattaa aatagctttc 420
ccccgttgca gcgcatgggt attttttcta gtaaaaataa aagataaact tagactcaaa 480
acatttacaa aaacaacccc taaagtccta aagcccaaag tgctatccac gatccatagc 540
aagcccagcc caacccaacc caacccaacc caccccagtc cagccaactg gacaatagtc 600
tccacacccc cccactatca ccgtgagttg tccgcacgca ccgcacgtct cgcagccaaa 660
aaaaaaaaaa gaaagaaaaa aaagaaaaag aaaaaacagc aggtgggtcc gggtcgtggg 720
ggccggaaac gcgaggagga tcgcgagcca gcgacgaggc cggccctccc tccgcttcca 780
aagaaacgcc ccccatcgcc actatataca tacccccccc tctcctccca tccccccaac 840
cctaccacca ccaccaccac cacctccacc tcctcccccc tcgctgccgg acgacgagct 900
cctcccccct ccccctccgc cgccgccgcg ccggtaacca ccccgcccct ctcctctttc 960
tttctccgtt ttttttttcc gtctcggtct cgatctttgg ccttggtagt ttgggtgggc 1020
gagaggcggc ttcgtgcgcg cccagatcgg tgcgcgggag gggcgggatc tcgcggctgg 1080
ggctctcgcc ggcgtggatc cggcccggat ctcgcgggga atggggctct cggatgtaga 1140
tctgcgatcc gccgttgttg ggggagatga tggggggttt aaaatttccg ccatgctaaa 1200
caagatcagg aagaggggaa aagggcacta tggtttatat ttttatatat ttctgctgct 1260
tcgtcaggct tagatgtgct agatctttct ttcttctttt tgtgggtaga atttgaatcc 1320
ctcagcattg ttcatcggta gtttttcttt tcatgatttg tgacaaatgc agcctcgtgc 1380
ggagcttttt tgtaggtaga 1400
<210>15
<211>1403
<212>DNA
<213>稻
<400>15
ctcgaggtca ttcatatgct tgagaagaga gtcgggatag tccaaaataa aacaaaggta 60
agattacctg gtcaaaagtg aaaacatcag ttaaaaggtg gtataaagta aaatatcggt 120
aataaaaggt ggcccaaagt gaaatttact cttttctact attataaaaa ttgaggatgt 180
ttttgtcggt actttgatac gtcatttttg tatgaattgg tttttaagtt tattcgcttt 240
tggaaatgca tatctgtatt tgagtcgggt tttaagttcg tttgcttttg taaatacaga 300
gggatttgta taagaaatat ctttaaaaaa acccatatgc taatttgaca taatttttga 360
gaaaaatata tattcaggcg aattctcaca atgaacaata ataagattaa aatagctttc 420
ccccgttgca gcgcatgggt attttttcta gtaaaaataa aagataaact tagactcaaa 480
acatttacaa aaacaacccc taaagttcct aaagcccaaa gtgctatcca cgatccatag 540
caagcccagc ccaacccaac ccaacccaac ccaccccagt ccagccaact ggacaatagt 600
ctccacaccc ccccactatc accgtgagtt gtccgcacgc accgcacgtc tcgcagccaa 660
aaaaaaaaaa agaaagaaaa aaaagaaaaa gaaaaaacag caggtgggtc cgggtcgtgg 720
gggccggaaa cgcgaggagg atcgcgagcc agcgacgagg ccggccctcc ctccgcttcc 780
aaagaaacgc cccccatcgc cactatatac ataccccccc ctctcctccc atccccccaa 840
ccctaccacc accaccacca ccacctccac ctcctccccc ctcgctgccg gacgacgagc 900
tcctcccccc tccccctccg ccgccgccgc gccggtaacc accccgcccc tctcctcttt 960
ctttctccgt tttttttttc cgtctcggtc tcgatctttg gccttggtag tttgggtggg 1020
cgagaggcgg cttcgtgcgc gcccagatcg gtgcgcggga ggggcgggat ctcgcggctg 1080
gggctctcgc cggcgtggat ccggcccgga tctcgcgggg aatggggctc tcggatgtag 1140
atctgcgatc cgccgttgtt gggggagatg atggggggtt taaaatttcc gccatgctaa 1200
acaagatcag gaagagggga aaagggcact atggtttata tttttatata tttctgctgc 1260
ttcgtcaggc ttagatgtgc tagatctttc tttcttcttt ttgtgggtag aatttgaatc 1320
cctcagcatt gttcatcggt agtttttctt ttcatgattt gtgacaaatg cagcctcgtg 1380
cggagctttt ttgtaggtag acc 1403
<210>16
<211>1189
<212>DNA
<213>玉米
<400>16
atcggaatat tagcatgtca acttgcactc tctaaggctc ctttggaaag caggatttta 60
gaaaaaaaaa tcatataaat tttttacatg aatcagttta ttttcggatt atgaaatatt 120
ttctcataac agtataacac atattttgta tataagttat tatgttatta tatataaccg 180
ttgcaacgta cgggcattca cctagtaaag aaagaagatt aattattctc tggtggagat 240
tgtgcccgag cccgaaggtc atgatatgga cgttgcaaac ccacttcacg aggggacaaa 300
aaagaaatag ggttaccact ttcatcagtt aaagggcgtg acatggacgt gttgaagatc 360
cggcacattc cctgcgaaat atacacgtca tggtactaac gaggcatgaa actggccaca 420
tggccgtgga cgcgtgaagc gtgccatgca ttggacatgc ggcatccgaa cttctgaaga 480
tcatatcaga gagacactga tgtacgaact gccgtaacat tctattctat atataccctc 540
agtccctgtt ccagttctcg ttaagctagc agcaccaagt tgtcgaacac ttgcctgctc 600
ttgagctcga tcaagctatc atcagctgcg tcttgcgcac agcaacagct tcccaactgc 660
aaccgtagca gccagatcca agggaggcct ccgccgccgc cggtaaccac cccgcccctc 720
tcctctttct ttctccgttt ttttttccgt ctcggtctcg atctttggcc ttggtagttt 780
gggtgggcga gaggcggctt cgtgcgcgcc cagatcggtg cgcgggaggg gcgggatctc 840
gcggctgggg ctctcgccgg cgtggatccg gcccggatct cgcggggaat ggggctctcg 900
gatgtagatc tgcgatccgc cgttgttggg ggagatgatg gggggtttaa aatttccgcc 960
gtgctaaaca agatcaggaa gaggggaaaa gggcactatg gtttatattt ttatatattt 1020
ctgctgcttc gtcaggctta gatgtgctag atctttcttt cttctttttg tgggtagaat 1080
ttgaatccct cagcattgtt catcggtagt ttttcttttc atgatttgtg acaaatgcag 1140
cctcgtgcgg agcttttttg taggtagaag tgatcaggcc ctacgggcc 1189
<210>17
<211>1809
<212>DNA
<213>大麦(Hordeum vulgare)
<400>17
catcgatttt aaaaaaaagt tcataccttt caaaaacgtt catcaatttt tttaaaaagt 60
tcactaaaaa tgaaaaaaag ttcatccaat ttaaaaaaag ttcattaatt ttttataaat 120
ttcaataaat ttgaaaaaac ttcataaaat tcaacaaaag ttcattgaag tgaaaaaagc 180
tcataaatct ttaaaaagtg catccatttt caaaaagatg ttcatcaaaa ttcaatatag 240
ttcaccaata ttcaaaaaag ttcattaatc ttaaaaaata ttcgctaaaa tttaaaaaat 300
gtttatcaat atttaaacgg cgtctagatg agccggtcta tttacaaaca ccataggcgc 360
caattaacaa aaatgcacgt tagatcacgt ctacggcgtc aaataggaaa tgcccatcgg 420
ccttactatt aagagttgtt ttggttatcc tttaggattt atgctgtggg ctggacttaa 480
cacaaaaccc acagccatgg taggccggaa tctattattc agctcacaaa cgatgttcta 540
ctcaaaagaa gaaaaaaatc tgttgtcaga aaaagagaac aaaaaaggct cacgaacatg 600
ccgcggctcg cacaggtggc cgtgagcttc tgaatgactt ggccacccgg catgtccact 660
gcccccctag acggtgtggg tgggtggaca ggtcaagcgc attgaacaag gtcaccctgc 720
gttctgccac gaggccaact gcgtggccct catgcaacgc gccttgctgc cacttctaca 780
cacgccctcg ccggccgacc gctgctataa aagcagctcc ccgttgcgtc ctcgacggca 840
tccatcgaga gacgttcgca gcagcaaaga gcacgcagca actagctttc agttgtttca 900
accatcccgg gacctgcagg accaggtggg cccaccgtct tcggtacgcg ctcactccgc 960
cctctgcctt tgttactgcc acgtttctct gaatgctctc ttgtgtggtg attgctgaga 1020
gtggtttagc tggatctaga attacactct gaaatcgtgt tctgcctgtg ctgattactt 1080
gccgtccttt gtagcagcaa aatataggga catggtagta cgaaacgaag atagaaccta 1140
cacagcaata cgagaaatgt gtaatttggt gcttagcggt atttatttaa gcacatgttg 1200
gtgttatagg gcacttggat tcagaagttt gctgttaatt taggcacagg cttcatacta 1260
catgggtcaa tagtataggg attcatatta taggcgatac tataataatt tgttcgtctg 1320
cagagcttat tatttgccaa aattagatat tcctattctg tttttgtttg tgtgctgtta 1380
aattgttaac gcctgaagga ataaatataa atgacgaaat tttgatgttt atctctgctc 1440
ctttattgtg accataagtc aagatcagat gcacttgttt taaatattgt tgtctgaaga 1500
aataagtact gacagtattt tgatgcattg atctgcttgt ttgttgtaac aaaatttaaa 1560
aataaagagt ttcctttttg ttgctctcct tacctcctga tggtatctag tatctaccaa 1620
ctgacactat attgcttctc tttacatacg tatcttgctc gatgccttct ccctagtgtt 1680
gaccagtgtt actcacatag tctttgctca tttcattgta atgcagatac caagcgggag 1740
ctcgacgtcc ctcagcagtc gctgtgcgat cgccagcggt actcgctgag gcctaggcgc 1800
ggatccccc 1809
<210>18
<211>973
<212>DNA
<213>拟南芥(Arabidopsis thaliana)
<400>18
actaaatcta gccttttcag accggacatg aacttcgcat attggcgtaa ctgtgcagtt 60
ttaccttttt cggatcagac aagatcagat ttagaccacc caacaatagt cagtcatatt 120
tgacaaccta agctagccga cactactaaa aagcaaacaa aagaagaatt ctatgttgtc 180
attttaccgg tggcaagtgg acccttctat aaaagagtaa agagacagcc tgtgtgtgta 240
taatctctaa ttatgttcac cgacacaatc acacaaaccc ttctctaatc acacaacttc 300
ttcatgattt acgacattaa ttatcattaa ctctttaaat tcactttaca tgctcaaaaa 360
tatctaattt gcagcattaa tttgagtacc gataactatt attataatcg tcgtgattcg 420
caatcttctt cattagatgc tgtcaagttg tactcgcacg cggtggtcca gtgaagcaaa 480
tccaacggtt taaaaccttc ttacatttct agatctaatc tgaaccgtca gatatctaga 540
tctcattgtc tgaacacagt tagataaaac tgggaataaa tctggacgaa attacgatct 600
tacaccaacc ccctcgacga gctcgtatat ataaagctta tacgctcctc cttcaccttc 660
gtactactac taccaccaca tttctttagc tcaaccttca ttactaatct ccttttaagg 720
taagttcact tttcttcgat tcatactttc tcaagattcc tgcatttctt tagaatttga 780
accaagtgtc gatttttgtt tgagagaagt gttgatttat agatctggtt attgaatcta 840
gattccaatt tttaattgat tcgagtttgt taagtgcgtt tatactactt ctcattgatc 900
ttgtttgatt tctctgctct gtattaggtt tctttcgtga atcagatcgg aacctgcagg 960
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<212>DNA
<213>拟南芥
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attttacgta taaaataaaa gatcatacct attagaacga ttaaggagaa atacaattcg 60
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cacatgatgg gccaatagac atggaccgac tactaataat agtaagttac attttaggat 180
ggaataaata tcataccgac atcagtttga aagaaaaggg aaaaaaagaa aaaataaata 240
aaagatatac taccgacatg agttccaaaa agcaaaaaaa aagatcaagc cgacacagac 300
acgcgtagag agcaaaatga ctttgacgtc acaccacgaa aacagacgct tcatacgtgt 360
ccctttatct ctctcagtct ctctataaac ttagtgagac cctcctctgt tttactcaca 420
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aaaaaaatct ttggaaaaga tctacc 506
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<212>DNA
<213>拟南芥
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caaatttatt atgtgttttt tttccgtggt cgagattgtg tattattctt tagttattac 60
aagactttta gctaaaattt gaaagaattt actttaagaa aatcttaaca tctgagataa 120
tttcagcaat agattatatt tttcattact ctagcagtat ttttgcagat caatcgcaac 180
atatatggtt gttagaaaaa atgcactata tatatatata ttattttttc aattaaaagt 240
gcatgatata taatatatat atatatatat atatgtgtgt gtgtatatgg tcaaagaaat 300
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tgagttggtg catggccaaa acaaatatgt agattaaaaa ttccagcctc caaaaaaaaa 420
tccaagtgtt gtaaagcatt atatatatat agtagatccc aaatttttgt acaattccac 480
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catttactaa taacattcat acgttttcat ttgaaatatc ctctataatt atattgaatt 600
tggcacataa taagaaacct aattggtgat ttattttact agtaaatttc tggtgatggg 660
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caccaggcaa gtaaaatgag caagcaccac tccaccatca cacaatttca ctcatagata 1440
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<212>DNA
<213>拟南芥
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agatacgaat cgagaatgcc ttttttcctt gtttccgaca attatcgatt gacgtgtgac 60
cactttaaaa gtttaaacag ctcgactttc caatatgggt ttatttcttg ttttatccac 120
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<212>DNA
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<400>22
gtatttttga tattttaaaa taataaatta tcctcgtgta gacgtatgag tctttgaatt 60
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<212>DNA
<213>拟南芥
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agctctacta tagcaattga cgggacagga ctcataagta acaacaaagt acacttcgaa 60
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gaattcatca acaaattact cctcaatcac actcctatag aaaacggttt aagctatcat 60
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tatctacttt gttcttatgt tttatctcta gccaagagtt attattatta tcagaagaag 960
aaaaaaaaaa gaagcatata tacaaaaggt ttaataaaat gtattataca aggcaattat 1020
ccaaattttt tttgttttgg tttacattga tgctctcagg atttcataag gatagagaga 1080
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<212>DNA
<213>拟南芥
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ggcgagtgat ggtatattta ttggttgggc ttaaatatat ttcagatgca aaaccatatt 60
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cacatgttgg tgttataggg cacttggatt cagaagtttg ctgttaattt aggcacaggc 2460
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gttcgtctgc agagcttatt atttgccaaa attagatatt cctattctgt ttttgtttgt 2580
gtgctgttaa attgttaacg cctgaaggaa taaatataaa tgacgaaatt ttgatgttta 2640
tctctgctcc tttattgtga ccataagtca agatcagatg cacttgtttt aaatattgtt 2700
gtctgaagaa ataagtactg acagtatttt gatgcattga tctgcttgtt tgttgtaaca 2760
aaatttaaaa ataaagagtt tcctttttgt tgctctcctt acctcctgat ggtatctagt 2820
atctaccaac tgacactata ttgcttctct ttacatacgt atcttgctcg atgccttctc 2880
cctagtgttg accagtgtta ctcacatagt ctttgctcat ttcattgtaa tgcagatacc 2940
aagcgg2946
<210>28
<211>185
<212>PRT
<213>玉米
<400>28
Met Ala Glu Ala Pro Ala Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser His Glu
1 5 10 15
Ser Gly Ser Pro Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Val Arg Glu Gln
20 25 30
Asp Arg Phe Leu Pro Ile Ala Asn Ile Ser Arg Ile Met Lys Lys Ala
35 40 45
Ile Pro Ala Asn Gly Lys Thr Ile Pro Ala Asn Gly Lys Ile Ala Lys
50 55 60
Asp Ala Lys Glu Thr Val Gln Glu Cys Val Ser Glu Phe Ile Ser Phe
65 70 75 80
Ile Thr Ser Glu Ala Ser Asp Lys Cys Gln Arg Glu Lys Arg Lys Thr
85 90 95
Ile Asn Gly Asp Asp Leu Leu Trp Ala Met Ala Thr Leu Gly Phe Glu
100 105 110
Asp Tyr Ile Glu Pro Leu Lys Val Tyr Leu Gln Lys Tyr Arg Glu Met
115 120 125
Glu Gly Asp Ser Lys Leu Thr Ala Lys Ser Ser Asp Gly Ser Ile Lys
130 135 140
Lys Asp Ala Leu Gly His Val Gly Ala Ser Ser Ser Ala Ala Gln Gly
145 150 155 160
Met Gly Gln Gln Gly Ala Tyr Asn Gln Gly Met Gly Tyr Met Gln Pro
165 170 175
Gln Tyr His Asn Gly Asp Ile Ser Asn
180 185
<210>29
<211>558
<212>DNA
<213>玉米
<400>29
atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60
aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120
atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180
aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240
atcactgccg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300
gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360
tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420
ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540
ggggatatct caaactga558
<210>30
<211>324
<212>DNA
<213>玉米
<400>30
atggtcaggg agcaggacag gttcctgccc atcgccaaca tcagtcgcat catgaagaag 60
gccatcccgg ctaacgggaa gaccatcccg gctaacggga agatcgccaa ggacgctaag 120
gagaccgtgc aggagtgcgt ctccgagttc atctccttca tcactagcga agcgagtgac 180
aagtgccaga gggagaagcg gaagaccatc aatggcgacg atctgctgtg ggccatggcc 240
acgctggggt ttgaagacta cattgaaccc ctcaaggtgt acctgcagaa gtacagagag 300
atggagggtg atagcaagtt atga 324
<210>31
<211>207
<212>DNA
<213>玉米
<400>31
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gacaagtgcc agagggagaa gcggaagacc atcaatggcg acgatctgct gtgggccatg 120
gccacgctgg ggtttgaaga ctacattgaa cccctcaagg tgtacctgca gaagtacaga 180
gagatggagg gtgatagcaa gttatga 207
<210>32
<211>558
<212>DNA
<213>玉米
<400>32
atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60
aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120
atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180
aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtccg tctccgagtt catctccttc 240
atcactagcg aagcgagtga caagtcccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300
gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360
tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420
ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
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ggggatatct caaactga 558
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<211>558
<212>DNA
<213>玉米
<400>33
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ggggatatct caaactga558
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<213>玉米
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tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420
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<213>玉米
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ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
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<213>玉米
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<213>玉米
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<213>玉米
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tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420
ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540
ggggatatct caaactga558
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<211>558
<212>DNA
<213>玉米
<400>39
atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60
aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120
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<212>DNA
<213>玉米
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ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
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ggggatatct caaactga558
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<212>DNA
<213>玉米
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ggggatatct caaactga 558
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<212>DNA
<213>玉米
<400>42
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<212>DNA
<213>玉米
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ggggatatct caaac 555
<210>44
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<212>DNA
<213>玉米
<400>44
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ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540
ggggatatct caaactga 558
<210>45
<211>537
<212>DNA
<213>玉米
<400>45
atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60
aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catcgccaac 120
atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agatcgccaa ggacgctaag 180
gagaccgtgc aggagtgcgt ctccgagttc atctccttca tcactagcga agcgagtgac 240
aagtgccaga gggagaagcg gaagaccatc aatggcgacg atctgctgtg ggccatggcc 300
acgctggggt ttgaagacta cattgaaccc ctcaaggtgt acctgcagaa gtacagagag 360
atggagggtg atagcaagtt aactgcaaaa tctagcgatg gctcaattaa aaaggatgcc 420
cttggtcatg tgggagcaag tagctcagct gcacaaggga tgggccaaca gggagcatac 480
aaccaaggaa tgggttatat gcaaccccag taccataacg gggatatctc aaactga 537
<210>46
<211>558
<212>DNA
<213>玉米
<400>46
atggcggaag ctccggcgag ccctggcggc ggcggcggga gccacgagag cgggagcccc 60
aggggaggcg gaggcggtgg cagcgtcagg gagcaggaca ggttcctgcc catagccaac 120
atcagtcgca tcatgaagaa ggccatcccg gctaacggga agaccatccc ggctaacggg 180
aagatcgcca aggacgctaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240
atcactagcg aagcgagtga caagtgccag agggagaagc ggaagaccat caatggcgac 300
gatctgctgt gggccatggc cacgctgggg tttgaagact acattgaacc cctcaaggtg 360
tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagcaagt taactgcaaa atctagcgat 420
ggctcaatta aaaaggatgc ccttggtcat gtgggagcaa gtagctcagc tgcacaaggg 480
atgggccaac agggagcata caaccaagga atgggttata tgcaacccca gtaccataac 540
ggggatatct caaactga558
<210>47
<211>516
<212>DNA
<213>大豆(Glycine max)
<400>47
atggccgacg gtccggctag cccaggcggc ggcagccacg agagcggcga ccacagccct 60
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gattatatgg atcctcttaa aatttacctc actagatacc gagagatgga gggtgatacg 360
aagggctctg ccaagggtgg agactcatct gctaagagag atgttcagcc aagtcctaat 420
gctcagcttg ctcatcaagg ttctttctca caaaatgtta cttacccgaa ttctcagggt 480
cgacatatga tggttccaat gcaaggcccg gagtag 516
<210>48
<211>516
<212>DNA
<213>大豆
<400>48
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tgcgtgtcgg agttcatcag cttcataaca ggagaagcgt ccgataagtg ccagaaggag 240
aagaggaaga cgatcaacgg cgatgatctg ctgtgggcca tgaccacgct ggggttcgag 300
gagtacgtgg agcctctcaa ggtttatctg cataagtata gggagctgga aggggagaaa 360
actgctatga tgggaaggcc acatgagagg gatgagggtt atggtcatgc aactcctatg 420
atgatcatga tggggcatca gcagcagcag catcagggac acgtgtatgg atctggaact 480
actactggat cagcatcttc tgcaagaact agataa516
<210>49
<211>522
<212>DNA
<213>大豆
<400>49
atgtcggatg cgccaccgag cccgactcat gagagtgggg gcgagcagag cccgcgcggt 60
tcgtcgtccg gcgcgaggga gcaggaccgg tacctcccga ttgccaacat cagccgcatt 120
atgaagaagg ctctgcctcc caacggcaag attgcaaagg atgccaaaga caccatgcag 180
gaatgcgttt ctgagttcat cagcttcatt accagcgagg cgagtgagaa atgccagaag 240
gagaagagaa agacaatcaa tggagacgat ttgctatggg ccatggccac tttaggattt 300
gaagactaca tagagccgct taaggtgtac ctggctaggt acagagaggc ggagggtgac 360
actaaaggat ctgctagaag tggtgatgga tctgctacac cagatcaagt tggccttgca 420
ggtcaaaatt ctcagcttgt tcatcagggt tcgctgaact atattggttt gcaggtgcaa 480
ccacaacatc tggttatgcc ttcaatgcaa agccatgaat ag522
<210>50
<211>489
<212>DNA
<213>大豆
<400>50
atgtccgatg ctccggcgag tccatgcggc ggcggcggcg gaggcagcca cgagagcggc 60
gagcacagtc cccgctccaa tttccgcgag caggaccgct tcctccccat cgccaacatc 120
agccgcatca tgaagaaagc gcttcctccc aacgggaaaa tcgccaagga cgccaaggaa 180
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tgtcagagag agaagaggaa gaccatcaac ggcgacgatt tgctttgggc tatgaccact 300
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gagggtgatt caaagggttc ggccaagggt ggagatgcat ctgctaagag agatgtttat 420
cagagtccta atggccaggt tgctcatcaa ggttctttct cacaaggtgt taattatacg 480
aattcttag 489
<210>51
<211>525
<212>DNA
<213>大豆
<400>51
atgtcggatg caccggcgag tccgagtcac gagagtggtg gcgagcagag ccctcgcggc 60
tcgttgtccg gcgcggctag agagcaggac cggtaccttc ccattgccaa catcagccgc 120
atcatgaaga aggctctgcc tcccaatggc aagattgcga aggatgcaaa agacacaatg 180
caagaatgcg tttctgaatt catcagcttc attaccagcg aggcgagtga gaaatgccag 240
aaggagaaga gaaagacaat caatggagac gatttactat gggccatggc aactttaggg 300
tttgaagact acattgagcc gcttaaggtg tacctggcta ggtacagaga ggcggagggt 360
gacactaaag gatctgctag aagtggtgat ggatctgcta gaccagatca agttggcctt 420
gcaggtcaaa atgctcagct tgttcatcag ggttcgctga actatattgg tttgcaggtg 480
caaccacaac atctggttat gccttcaatg caaggccatg aatag 525
<210>52
<211>690
<212>DNA
<213>大豆
<400>52
atggagacca acaaccagca acaacaacaa caaggagctc aagcccaatc gggaccctac 60
cccgtcgccg gcgccggcgg cagtgcaggt gcaggtgcag gcgctcctcc ccctttccag 120
caccttctcc agcagcagca gcagcagctc cagatgttct ggtcttacca gcgtcaagaa 180
atcgagcacg tgaacgactt taagaatcac cagctccctc ttgcccgcat caagaagatc 240
atgaaggccg acgaggatgt ccgcatgatc tccgccgagg cccccatcct cttcgccaag 300
gcctgcgagc tcttcatcct cgagctcacc atccgctcct ggctccacgc cgaggagaac 360
aagcgccgca ccctccagaa gaacgacatc gccgccgcca tcacccgcac cgacattttc 420
gacttcctcg ttgatattgt cccccgcgac gagatcaagg acgacgctgc tcttgtgggg 480
gccaccgcca gtggggtgcc ttactactac ccgcccattg gacagcctgc cgggatgatg 540
attggccgcc ccgccgtcga tcccgccacc ggggtttatg tccagccgcc ctcccaggca 600
tggcagtccg tctggcagtc cgctgccgag gacgcttcct atggcaccgg cggggccggt 660
gcccagcgga gccttgatgg ccagagctag 690
<210>53
<211>426
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>53
atggcggata cgccttcgag cccagctgga gatggcggag aaagcggcgg ttccgttagg 60
gagcaggatc gataccttcc tatagctaat atcagcagga tcatgaagaa agcgttgcct 120
cctaatggta agattggaaa agatgctaag gatacagttc aggaatgcgt ctctgagttc 180
atcagcttca tcactagcga ggccagtgat aagtgtcaaa aagagaaaag gaaaactgtg 240
aatggtgatg atttgttgtg ggcaatggca acattaggat ttgaggatta cctggaacct 300
ctaaagatat acctagcgag gtacagggag ttggagggtg ataataaggg atcaggaaag 360
agtggagatg gatcaaatag agatgctggt ggcggtgttt ctggtgaaga aatgccgagc 420
tggtag 426
<210>54
<211>522
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>54
atggcggagt cgcaggccaa gagtcccgga ggctgtggaa gccatgagag tggtggagat 60
caaagtccca ggtcgttaca tgttcgtgag caagataggt ttcttccgat tgctaacata 120
agccgtatca tgaaaagagg tcttcctgct aatgggaaaa tcgctaaaga tgctaaggag 180
attgtgcagg aatgtgtctc tgaattcatc agtttcgtca ccagcgaagc gagtgataaa 240
tgtcaaagag agaaaaggaa gactattaat ggagatgatt tgctttgggc aatggctact 300
ttaggatttg aagactacat ggaacctctc aaggtttacc tgatgagata tagagagatg 360
gagggtgaca caaagggatc agcaaaaggt ggggatccaa atgcaaagaa agatgggcaa 420
tcaagccaaa atggccagtt ctcgcagctt gctcaccaag gtccttatgg gaactctcaa 480
gctcagcagc atatgatggt tccaatgccg ggaacagact ag522
<210>55
<211>486
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>55
atggcggatt cggacaacga ttcaggagga cacaaagacg gtggaaatgc ttcgacacgt 60
gagcaagata ggtttctacc gatcgctaac gttagcagga tcatgaagaa agcacttcct 120
gcgaacgcaa aaatctctaa ggatgctaaa gaaacggttc aagagtgtgt atcggaattc 180
ataagtttca tcaccggtga ggcttctgac aagtgtcaga gagagaagag gaagacaatc 240
aacggtgacg atcttctttg ggcgatgact acgctagggt ttgaggacta cgtggagcct 300
ctcaaggttt atctgcaaaa gtatagggag gtggaaggag agaagactac tacggcaggg 360
agacaaggcg ataaggaagg tggaggagga ggcggtggag ctggaagtgg aagtggagga 420
gctccgatgt acggtggtgg catggtgact acgatgggac atcaattttc ccatcatttt 480
tcttaa 486
<210>56
<211>528
<212>DNA
<213>陆地棉(Gossypium hirsutum)
<400>56
atgggaggag ggccaactag tccggcagga gggagccatg agagcggagg agagcacagc 60
agtcctcagt caactgtgag ggaacaagat cgttacctcc caattgctaa tataagtaga 120
atcatgaaga aagccttgcc ttctaatggg aaaattgcta aggatgctaa agatactgtt 180
caagaatgtg tttccgagtt catcagcttc atcactagcg aggcaagtga taaatgtcaa 240
aaagagaaaa ggaagacaat taatggagat gacttgttgt gggcaatggc aacattagga 300
ttcgaagact atatcgagcc acttaaaata tatcttgcca gatacaggga gttggagggt 360
gacaccaagg gatcagcccg tggtggtgat ggatctttta aaagagacgc agctggagct 420
cttcctgccc aaaatccaca gttttcaatc caggggtcat tgaactatat taattcccaa 480
gcacaaggac agcatatgat cattccctcc atgcaaggca atgagggc 528
<210>57
<211>534
<212>DNA
<213>陆地棉
<400>57
atggcggatg gtatggcaag ggggccaacg agtccagcag gagggagtca tgagagtgga 60
gagcagtgca gttctcactc aactgtgagg gaacaagacc gttaccttcc aattgccaat 120
ataagcagaa tcatgaagag agcattgcct actaatggca aaattgctaa ggatgctaaa 180
gaaactgttc aagaatgtgt ttctgagttc atcagcttca tcactagcga ggctagcgat 240
aaatgccaga aagagaagag gaagacaatt aatggagatg atttgttgtg ggcaatggca 300
acattaggct ttgaagacta tattgagcca cttaaaatat atctggccag gtacagagag 360
ttggagggtg atgctaaggg atcaatcagg ggtgaagtgc ctcttaaaag agatgcagtt 420
cgagttcttg ctgtccccaa cccacagttt cctatcgaag gatcattgaa ctatattaat 480
tcccaggcac aaggacatca tatgatcgtc ccctccatgc aaggcaacga gtag 534
<210>58
<211>516
<212>DNA
<213>大豆
<400>58
atggccgacg gtccggcgag tccaggcggc ggtagccacg agagcggcga gcacagccct 60
cgctctaacg tgcgcgagca ggacaggtac ctccccatcg ctaacataag ccgcatcatg 120
aagaaggcac tacctgcgaa cggtaaaatc gccaaggacg ccaaagagac cgttcaggaa 180
tgcgtatccg agttcatcag tttcatcacc agcgaggcct ctgataagtg tcagagggaa 240
aagagaaaga ctattaacgg tgatgatttg ctctgggcca tggccactct tggttttgag 300
gattatatcg atcctcttaa aatttacctc actagataca gagagatgga gggtgatacg 360
aagggttcag ccaagggcgg agactcatct tctaagaaag atgttcagcc aagtcctaat 420
gctcagcttg ctcatcaagg ttctttctca caaggtgtta gttacacaat ttctcagggt 480
caacatatga tggttccaat gcaaggcccg gagtag 516
<210>59
<211>558
<212>DNA
<213>稻
<400>59
atggcggatg ggccggggag cccgggggga ggagggggga gccacgagag cgggagcccg 60
agggggggag ggggaggagg gggaggtggg ggtgggggtg gcccacgcgt ccggcaggac 120
aggttcctcc ccatcgccaa catcagccgc atcatgaaga aggccatccc ggccaacggg 180
aagatcgcca aggacgccaa ggagaccgtg caggagtgcg tctccgagtt catctccttc 240
atcaccagcg aggcgagcga taaatgccag agggagaagc gcaagaccat caacggcgac 300
gacttgctgt gggcgatggc cacgctgggc ttcgaggact acatcgagcc cctcaaggtc 360
tacctgcaga agtacagaga gatggagggt gatagtaaat taactgcaaa ggctggtgat 420
ggctctgtga aaaaggatgt acttggttct catggaggaa gcagttcaag tgcccaaggg 480
atgggccaac aagcagcata caatcaagga atgggttata tgcaacctca gtaccataat 540
ggggatgtct caaactga 558
<210>60
<211>1148
<212>DNA
<213>拟南芥
<400>60
ggaagtttct ctcttgaggg aggttgctcg tggaatggga cacatatggt tgttataata 60
aaccatttcc attgtcatga gattttgagg ttaatatata ctttacttgt tcattatttt 120
atttggtgtt tgaataaatg atataaatgg ctcttgataa tctgcattca ttgagatatc 180
aaatatttac tctagagaag agtgtcatat agattgatgg tccacaatca atgaaatttt 240
tgggagacga acatgtataa ccatttgctt gaataacctt aattaaaagg tgtgattaaa 300
tgatgtttgt aacatgtagt actaaacatt cataaaacac aaccaaccca agaggtattg 360
agtattcacg gctaaacagg ggcataatgg taatttaaag aatgatatta ttttatgtta 420
aaccctaaca ttggtttcgg attcaacgct ataaataaaa ccactctcgt tgctgattcc 480
atttatcgtt cttattgacc ctagccgcta cacacttttc tgcgatatct ctgaggtaag 540
cgttaacgta cccttagatc gttctttttc tttttcgtct gctgatcgtt gctcatatta 600
tttcgatgat tgttggattc gatgctcttt gttgattgat cgttctgaaa attctgatct 660
gttgtttaga ttttatcgat tgttaatatc aacgtttcac tgcttctaaa cgataattta 720
ttcatgaaac tattttccca ttctgatcga tcttgttttg agattttaat ttgttcgatt 780
gattgttggt tggtggatct atatacgagt gaacttgttg atttgcgtat ttaagatgta 840
tgtcgatttg aattgtgatt gggtaattct ggagtagcat aacaaatcca gtgttccctt 900
tttctaaggg taattctcgg attgtttgct ttatatctct tgaaattgcc gatttgattg 960
aatttagctc gcttagctca gatgatagag caccacaatt tttgtggtag aaatcggttt 1020
gactccgata gcggcttttt actatgattg ttttgtgtta aagatgattt tcataatggt 1080
tatatatgtc tactgttttt attgattcaa tatttgattg ttcttttttt tgcagatttg 1140
ttgaccag 1148
<210>61
<211>828
<212>DNA
<213>大豆
<400>61
ggcaaaaaca tttaatacgt attatttaag aaaaaaatat gtaataatat atttatattt 60
taatatctat tcttatgtat tttttaaaaa tctattatat attgatcaac taaaatattt 120
ttatatctac acttattttg catttttatc aattttcttg cgttttttgg catatttaat 180
aatgactatt ctttaataat caatcattat tcttacatgg tacatattgt tggaaccata 240
tgaagtgtcc attgcatttg actatgtgga tagtgttttg atccaggcct ccatttgccg 300
cttattaatt aatttggtaa cagtccgtac taatcagtta cttatccttc ctccatcata 360
attaatcttg gtagtctcga atgccacaac actgactagt ctcttggatc ataagaaaaa 420
gccaaggaac aaaagaagac aaaacacaat gagagtatcc tttgcatagc aatgtctaag 480
ttcataaaat tcaaacaaaa acgcaatcac acacagtgga catcacttat ccactagctg 540
atcaggatcg ccgcgtcaag aaaaaaaaac tggaccccaa aagccatgca caacaacacg 600
tactcacaaa ggtgtcaatc gagcagccca aaacattcac caactcaacc catcatgagc 660
ccacacattt gttgtttcta acccaacctc aaactcgtat tctcttccgc cacctcattt 720
ttgtttattt caacacccgt caaactgcat gccaccccgt ggccaaatgt ccatgcatgt 780
taacaagacc tatgactata aatatctgca atctcggccc aggttttc 828
权利要求
1.包含侧翼于天然植物DNA的重组多核苷酸的植物染色体DNA片段，其中所述多核苷酸提供至少NF-YB蛋白和标记蛋白的表达，并且其中以达到40皮克每微克所述植物叶组织细胞中的总蛋白的水平在所述植物的叶细胞中产生所述NF-YB蛋白。
2.包含侧翼于天然植物DNA的重组多核苷酸的植物染色体DNA片段，其中所述多核苷酸提供单个蛋白的表达，其中所述蛋白是NF-YB蛋白，并且其中以达到40皮克每微克所述植物叶组织细胞中的总蛋白的水平在所述植物的叶细胞中产生所述NF-YB蛋白。
3.包含用于表达含有来自SEQ ID NO28的连续氨基酸的NF-YB蛋白的重组DNA构建体的植物染色体DNA片段，其中所述氨基酸包括
(a)SEQ ID NO28的第49至122位上的氨基酸，其中在第49，73，76，83，89，102，103，109，115，118或122位上的一个或多个氨基酸是不同的；或
(b)SEQ ID NO28的第49至122位上的氨基酸，其中在第49，73，76，83，89，102，103，109，115，118或122位上的一个或多个氨基酸是不同的，且缺失第55至61位上的一个或多个氨基酸；
(c)SEQ ID NO28的第29至134位上的氨基酸，且缺失第2至28位上的一个或多个氨基酸；或
(d)SEQ ID NO28的第68至134位上的氨基酸，且缺失第2至67位上的一个或多个氨基酸。
4.权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段，其中所述重组多核苷酸包含选自稻α微管蛋白启动子、稻肌动蛋白启动子、PPDK叶肉组织增强型启动子和Rubisco活化酶维管束鞘增强型启动子的启动子。
5.权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段，其中以0.1至11皮克每微克所述植物叶组织细胞中的总蛋白的水平在所述植物的叶细胞中产生NF-YB蛋白。
6.包含权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段的转基因植物细胞。
7.包含权利要求6的细胞的耐受水分亏缺胁迫的植物的转基因农作物，其中当在水分充足的条件下栽培所述农作物时，所述农作物的收获的产量与不具有所述植物染色体DNA片段的对照植物的农作物的产量相当或与之相比得到增加。
8.权利要求7的转基因农作物，其中所述耐受水分亏缺胁迫的植物是玉米、棉花、大豆、甘蔗、柳枝稷、稻、小麦、苜蓿或芸苔植物。
9.包含权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段的转基因玉米植物种子，其中所述NF-YB蛋白是天然玉米蛋白。
10.提高农作物植物品系的水胁迫耐受性和产量的方法，该方法包括在所述农作物植物品系的基因组中提供权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段。
11.包含含有权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段的植物细胞的单倍体衍生物的转基因花粉粒。
12.用于产生非天然的、转基因种子的方法，所述转基因种子可用于产生具有由于从权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段表达NF-YB蛋白而导致的增加的水分亏缺胁迫耐受性的转基因植物的农作物，其中所述方法包括
(a)就当在亏缺胁迫的条件下栽培时与对照植物的产量相比所述增加的产量或当在水分充足的条件下栽培时与对照植物的产量相比增加的或相当的产量筛选具有所述植物染色体DNA片段的植物群体和对照植物，
(b)从所述群体选择一株或多株在水分亏缺胁迫条件下显示与对照植物的产量相比增加的产量或当在水分充足的条件下栽培时显示与对照植物的产量相比增加的或相当的产量的植物，
(c)验证所述植物染色体DNA片段稳定地整合入所述选择的植物中，
(d)分析所选择的植物的叶组织以确定转基因NF-YB蛋白以达到40皮克NF-YB蛋白每微克所述叶组织中的总蛋白的水平产生；和
(e)从所选择的植物收集种子或再生性繁殖体。
13.权利要求12的方法，其中所述种子是玉米、棉花、大豆、甘蔗、柳枝稷、稻、小麦、苜蓿或芸苔种子。
14.产生近交玉米种子的方法，该方法包括
(a)从也具有稳定整合的权利要求1至3中任一项的染色体DNA片段的耐受除草剂的玉米植物获得杂交玉米种子；
(b)通过允许包含具有所述染色体DNA片段的单倍体衍生物的花粉粒对第二玉米品系传粉以产生杂交种子，而将来自所述获得的杂交玉米种子的染色体DNA片段渗入所述第二玉米品系，
(c)产生来自杂交种子的植物群体，其中一部分通过所述传粉产生的种子对于所述染色体DNA片段是纯合的，一部分通过所述杂交玉米种子产生的植物对于所述染色体DNA片段是半合子的，并且一部分通过所述杂交玉米种子产生的植物不具有所述染色体DNA片段；
(d)通过用除草剂处理，选择其对于所述染色体DNA片段是纯合的和半合子的的玉米植物；
(e)收集来自除草剂处理后存活的玉米植物的种子，并种植所述种子以进一步产生后代玉米植物；
(f)将从所述后代种子栽培的植物与所述第二玉米品系回交，从而产生近交玉米品系。
15.权利要求14的方法，其还包括将所述近交玉米品系与第三玉米品系杂交以产生杂交种子。
16.具有拥有权利要求1至3中任一项的所述染色体DNA片段的植物细胞作为来源标志的防伪研磨种子。
17.在无灌溉水的情况下栽培玉米、棉花、大豆、甘蔗、柳枝稷、稻、小麦、苜蓿或芸苔农作物的方法，该方法包括种植就增加的水分亏缺耐受性而选择的、具有含权利要求1至3中任一项的植物染色体DNA片段的植物细胞的种子。
全文摘要
本文公开了用于产生具有增加的产量和/或增加的水分亏缺胁迫耐受性的转基因植物的NF-YB蛋白和用于表达NF-YB蛋白的重组DNA的新型组合物。
文档编号A01G1/00GK101528027SQ200780030537
公开日2009年9月9日 申请日期2007年6月23日 优先权日2006年6月23日
发明者D·尼尔森, J·赫德 申请人:孟山都技术有限责任公司