专利名称：一种瑞香狼毒提取物制剂及其新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物提取物，特别是涉及一种瑞香狼毒提取物制剂及 其新用途。
背景技术：
植物源农药因其低毒、低残留、与环境和谐、符合现代环保和人们 健康的要求而越来越引起世界各国高度重视，近几年掀起了一个研究开 发植物源农药的高潮。植物是生物活性化合物的天然宝库，其产生的次
生代谢产物超过40万种，其中的许多化学物质具有杀虫或抗菌活性，如 萜烯类、生物碱、类黄酮、甾体、酚类、独特的氨基酸和多糖等；从植 物中提取这些活性物质对植物病菌不但起直接的抑制作用，同时还可能 含有一些活性物质和营养成分，剌激植物自身产生抗病菌活性物质和机 能，又可以提高和改进植物营养生长条件而提高抗病能力。
瑞香狼毒fiSte/Zerac/wmae^wwe,又名断肠草、打碗花、山丹花、' 闷头花、 一把香，为我国瑞香科狼毒属植物。它是多年生草本植物，再 生能力强，产种量多，生物量大，耐干旱，耐寒冷，广泛分布于地势高 峻、气候恶劣、自然条件复杂的高山和亚高山草地。由于其具有极显著 的生理活性， 一直为国内外药学和化学工作者们所关注，现已被列入《世 界药学文摘》数据库中。吕全，贾秀贞等对狼毒根提取物的进行了生物 活性测定，认为狼毒根水浸液与乙醇提取物对舞毒蛾幼虫和油松毛虫有 拒食作用。何静对包括狼毒在内的七种植物粗提物抑制常见植物病菌进 行了研究，认为狼毒对辣椒丝核病菌有抑制作用。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种瑞香狼毒提取物制剂及其制备方法； 本发明的另一个目的在于公开瑞香狼毒提取物制剂防治桃褐腐病的新用 途。
本发明瑞香狼毒根提取物制剂及其制备方法为-称取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000体积份，摇 床上浸提，静置2-4h，摇动2-4h;提取液过滤，温度30-40°C、压强 0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥，将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为 0. 0005-0. 0015g/ml或0. 01-0. 03g/ml的制剂。
本发明瑞香狼毒根提取物制剂及其制备方法为
称取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900体积份，摇床上浸提， 静置3h，摇动3h;提取液过滤，温度30-40°C、压强0.04-0. 15MPA条件下 真空干燥，将溶剂全部挥发;用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml 的制剂。
上述方法中的溶媒石油醚还可以氯仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、替 换分别得到氯仿提取物制剂、乙酸乙酯提取物制剂、甲醇提取物制剂或水 提取物制剂、乙醇提取物制剂。
上述发明所述的重量份和体积份的关系是g/ml。
本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。
图1瑞香狼毒对采后桃褐腐病的抑制效果 图2瑞香狼毒不同溶剂提取物对采后桃PAL酶的影响 下面实验例或实施例用于进一步说明但不限于本发明。 实验例1瑞香狼毒提取物制剂对桃褐腐病原菌离体试验
采用生长速率法测定瑞香狼毒提取物制剂对桃褐腐病原菌的抑制作用； 在无菌条件下，取制备的浓度为1 mg/ml瑞香狼毒提取浓縮液1. 5ml倒入灭 菌培养皿中(d=9cm)，再加入融化冷却至4(TC左右的13. 5 mLPDA培养基中摇 匀，凝固后分别用打空器(d=0.4cm)接入供试菌株，每个菌种设3个重复， 以相应量的丙酮溶剂加入到培养基中作为对照。每个菌落按十字交叉法测量 2次，以其平均值代表菌落的大小，抑菌率的计算公式如下 纯生长量二菌落平均直径-菌饼直径，
抑菌率=[(对照纯生长量-处理纯生长量)X100/对照纯生长量]X100%; 瑞香狼毒提取物制剂对桃褐腐病原菌的抑制效果如表1所示表1瑞香狼毒不同溶剂提取物对桃褐腐病原菌的抑制效果
溶剂 水 甲醇 乙醇 乙酸乙酯 氯仿
处理 1. 13 0.80 0.67 0.40 2.03
对照 3.48 2.02 1.27 3.30 3.38
抑菌率(％) 76.30 75.31 68.97 100.0 45.30
结果显示瑞香狼毒六种溶剂提取物对桃褐腐病原菌的抑制效果不同； 其中瑞香狼毒乙酸乙脂提取物的抑制作用最强，达到了 100%;石油醚、甲醇 和水提取物对桃褐腐病原菌的作用效果也很明显，抑菌率分别为87.65%、
76. 30%和75. 31%;乙醇提取物也具有生物活性，抑菌率达到了 68. 97%;水、甲 醇、乙醇、乙酸乙脂、石油醚五种提取物都对桃褐腐病原菌有明显的抑制作 用。
实验例2桃活体试验
选择外观整齐、无病虫害和机械损伤的桃果实，用2%氯酸钠溶液消毒2 min后，自来水冲洗约5 min，晾干备用；用接种针在果实背部、脸部刺3 mm(宽) X 4mm(深)的伤口，将伤口表面晾干，接浓度为20 mg/ml瑞香狼毒提取物制 剂处理液60 u I，把果实静置2 h,使溶剂丙酮完全挥发；接种病菌悬浮 液20ul;伤口晾干后将果实放在300 mm X200腿X 100 mm的塑料包装盒 中，外套塑料袋以保持相对湿度在95%左右，存放于室温(25。C左右)；每隔 24h统计果实病斑直径；每次处理21个果实，3次重复，结果见图l;
从图l可以看出，桃在接种桃褐腐病原菌开头24小时内不发病；当在 48小时后测量时，乙酸乙脂提取物处理的桃不发病，其他处理的桃不同程度 地出现了病班，但经瑞香狼毒提取物制剂处理的桃病斑都小于对照，发病情 况由轻到重排列为石油醚、甲醇、氯仿、乙醇、水；当第三天测量时，经 乙酸乙脂提取物处理的桃才开始出现病班，其他处理桃的病班有所扩大，但 情况要好于对照；第四天时，对照病班直径已达到3.83cm，经水提取物、甲 醇提取物、乙醇提取物、乙酸乙脂提取物、氯仿提取物、石油醚提取物桃的 病班直径依次为3. 09cm、 3. 08cm、 2. 75cm、 2. 33cm、 2. 58cm、 2.84cm;第 五天时，对照病斑已达到6.08cm，经水提取物、甲醇提取物、乙醇提取物、 乙酸乙脂提取物、氯仿提取物、石油醚提取物处理的桃病斑直径依次为 4. 22cm、 3. 88cm、 3. 17cm、 2. 62cm、 3. 76cm、 3. 66cm，分别为对照病斑直径 的69%、 64%、 52%、 43%、 62°/。、 60%。结果表明，瑞香狼毒六种溶剂提取物对桃的保鲜有一定作用，能够起到 防治桃褐腐病原菌引起的腐烂作用。经六种提取物处理的桃病斑都要小于没 经处理的桃，再次说明瑞香狼毒含有丰富的活物质能够控制桃褐腐的蔓延， 尤其是乙酸乙脂提取物的生物活性非常明显。
实验例3酶的测试
1、 酶活性的诱导果实按照实验例2的接种方法处理；果实处理后贮
藏于常温下，每处理50果实，于Od、 ld、 2 d、 3 d、 4d取样测定酶活性，
每次测定样品取10个果实(病健交界处的果肉)，整个实验重复2次；
2、 苯丙氨酸解氨酶(PAL)液制备与活性测定取3g果肉，再加入浓 度为0. 1 mol/L的硼酸缓冲液6ml ( Ph= 8. 7，内含1腸1/L的EDTA， 20mmol/L 巯基乙醇)，冰浴匀浆，然后离心(12,000 rpm离心30 min， 4°C)，取上清 液用于酶活性测定；苯丙氨酸解氨酶活性测定参照薛应龙的方法加以改进， 以每小时AOD290变化0.01为1个酶活性单位；结果见图2;
3、 实验结果图2显示，瑞香狼毒不同溶剂提取物对采后桃苯丙氨酸 解氨酶的影响，总体酶的变化呈现高-低-高-低的特点，但不同溶剂提取物 对酶的影响效果不同；瑞香狼毒水提取物处理后的桃苯丙氨酸解氨酶的高峰 出现在第三天，相对于其他处理的桃，苯丙氨酸解氨酶的高峰推后一天；甲 醇提取物、石油醚提取物处理的桃苯丙氨酸解氨酶变化与其他处理桃的苯丙 氨酸解氨酶变化波动情况相同；乙醇提取物、氯仿提取物处理的桃苯丙氨酸 解氨酶高峰出现在第二天，酶活值为7.16A0D209/FW 4i、10. 7A0D209/FW 4i; 乙酸乙酯提取物处理的桃酶活性在第二天出现高峰值，并且都高于其他处理 桃的酶值，达到了 17. 8A0D209/FW h;
4、 结论氯仿提取物处理桃的酶活性在48h时，比其他提取物处理桃的 酶值高,可见氯仿提取物处理的桃抗病性要强与其他提取物处理的桃；在第 三天，氯仿提取物处理的桃酶活性10. 65A0D209/FW h，仅次于乙酸乙脂提 取物处理的酶活性；在第四天时，氯仿提取物处理的桃酶活性为3.14A 0D209/FW *h，也仅低于乙酸乙脂提取物处理的酶活性值4. 50AOD209/FW 'h。 乙酸乙脂提取物处理桃的酶活值在第二天和第四天都比其它处理桃的酶活 值高。
下述实施例均能实现上述实验例的效果具体实施方式
实施例1:
称取瑞香狼毒根粉末800kg，加入石油醚800L，摇床上浸提，静置2-4h， 摇动2-4h;提取液过滤，温度30-40°C、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干 燥，将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 0005-0. 0015g/ml或 0.01-0. 03g/ml的制剂。 实施例2:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入石油醚900L，摇床上浸提，静置3h， 摇动3h;提取液过滤，温度30-4(TC、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥， 将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml的制剂。 实施例3:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入氯仿900L,摇床上浸提，静置3h，摇 动3h;提取液过滤，温度30-4CTC、压强0.04-0. 15MPA条件下真空干燥， 将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml的制剂。 实施例4:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入水900L，摇床上浸提，静置3h，摇动 3h;提取液过滤，温度30-40。C、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥，将溶 剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0.001g/ml或0.02g/ml的制剂。 实施例5:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入甲醇900L，摇床上浸提，静置3h，摇 动3h;提取液过滤，温度30-40°C、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥， 将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml的制剂。 实施例6:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入乙醇900L，摇床上浸提，静置3h，摇 动3h;提取液过滤，温度30-40°C、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥， 将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml的制剂。 实施例7:
称取瑞香狼毒根粉末90 kg，加入乙酸乙酯900L，摇床上浸提，静置3h， 摇动3h;提取液过滤，温度30-40。C、压强0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥， 将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml的制剂。
权利要求
1、瑞香狼毒根提取物制剂，其特征在于该制剂由如下方法制成称取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000体积份，摇床上浸提，静置2-4h，摇动2-4h；提取液过滤，温度30-40℃、压强0.04-0.15MPA条件下真空干燥，将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0.0005-0.0015g/ml或0.01-0.03g/ml的制剂。
2、 如权利要求l所述的瑞香狼毒根提取物制剂，其特征在于该制剂由 如下方法制成称取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900体积份，摇床上浸提， 静置3h，摇动3h;提取液过滤，温度30-4(TC、压强0.04-0. 15MPA条件下 真空干燥，将溶剂全部挥发;用丙酮溶解，配成浓度为0. 001g/ml或0. 02g/ml 的制剂。
3、 如权利要求1或2所述的瑞香狼毒根提取物制剂，其特征在于制成 该瑞香狼毒根提取物制剂方法中的石油醚用上述方法中的溶媒石油醚以氯 仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯替换分别得到氯仿提取物制剂、乙酸乙酯提 取物制剂、甲醇提取物制剂或水提取物制剂、乙醇提取物制剂。
4、 如权利要求1或2所述的瑞香狼毒根提取物制剂在抑制桃褐腐病原 菌的灭菌剂或桃的保鲜剂中的应用。
5、 如权利要求3所述的瑞香狼毒根提取物制剂在抑制桃褐腐病原菌的 灭菌剂或桃的保鲜剂中的应用中的应用。
6、 瑞香狼毒根提取物制剂的制备方法，其特征在于该方法为 称取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000体积份，摇床上浸提，静置2-4h，摇动2-4h;提取液过滤，温度30-40°C、压强...0. 04-0. 15MPA条件下真空干燥，将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为 0. 0005-0. 0015g/ml或0. 01-0. 03g/ml的制剂。
7、 如权利要求6所述的瑞香狼毒根提取物制剂的制备方法，其特征在 于该方法为称取瑞香狼毒根粉末90重量份，加入石油醚900体积份，摇床上浸提， 静置3h，摇动3h;提取液过滤，温度30-40。C、压强0. 04-0. 15MPA条件下 真空干燥，将溶剂全部挥发;用丙酮溶解，配成浓度为0. OOlg/ml或0. 02g/ml 的制剂。
8、 如权利要求6或7所述的瑞香狼毒根提取物制剂的制备方法，其特 征在于该方法中的石油醚以氯仿、水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯替换分别得到 氯仿提取物制剂、乙酸乙酯提取物制剂、甲醇提取物制剂或水提取物制剂、 乙醇提取物制剂。
全文摘要
本发明公开一种瑞香狼毒提取物制剂及其制备方法和新用途。称取瑞香狼毒根粉末80-100重量份，加入石油醚800-1000体积份，摇床上浸提，静置2-4h，摇动2-4h；提取液过滤，温度30-40℃、压强0.04-0.15MPa条件下真空干燥，将溶剂全部挥发；用丙酮溶解，配成浓度为0.0005-0.0015g/ml或0.01-0.03g/ml的制剂。本发明瑞香狼毒提取物制剂对防治桃褐腐病有明显的抑制作用。
文档编号A01P3/00GK101416643SQ20081005651
公开日2009年4月29日 申请日期2008年1月21日 优先权日2008年1月21日
发明者师光禄, 温哲屹, 王有年 申请人:北京农学院