专利名称：：雷竹种胚培养基及组培育苗方法雷竹种胚培养基及组培育苗方法
技术领域：
：本发明涉及一种生物组织的培养基和组织培养方法。
背景技术：
：雷竹(户力/〃M"cAj^/7raecor乂又名早竹、早园竹、雷公竹，禾本科竹亚科刚竹属竹种。雷竹是一种优良的,用竹种，年亩产竹笋高达2吨，年亩产值超2万元人民币。雷竹通过覆盖、施肥、增温措施，不但增产显著，而且能提前在春节前的冬季出夢，给春节市场提供人们渴求的鲜夢，成为抢手年货和赠送礼品。雷竹的适应性强，在低山緩坡地、房前屋后地、废耕地、河滩地均宜栽种，近年我国南方农村自发开劈雷竹林地的热情很高，发展很快，但都是依靠传统的移栽母竹或竹鞭来繁殖，速度慢、用地多、运输不便、成本高并受季节限制，而且长此以往，无法克服竹种品质劣化和成片同时开花死亡的灾难性后果的产生。雷竹，作为一种中径的散生竹，至今未见通过组织培养、快速育成种苗，解决竹农急需雷竹苗的问题的有关报道和实物问世。
发明内容本发明针对至今尚未成功地培育出雷竹组培苗的现实情况，存在着无法向急需雷竹种苗的竹农快速而充足提供的缺憾，本发明要解决的问题是提供一种雷竹种胚培养基和用该培养基培养雷竹种苗的整套方法。解决上述问题的技术方案是本雷竹种胚培养基，由下列成分及其份量组成MS盐类+MT维生素+或0.3或1或3mg/L的BA即节氨基腺嘌呤+0.05或0.1或lmg/L的NAA即oc-奈乙酸+0，05或0.1或0.5mg/L的氨氯吡咬酸+0.0001或0.001或0.01mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺噪呤+O.5g/L的麦芽抽提物，培养基的pH值为5.0—6.0。本雷竹种胚培养基组培育苗方法包括如下操作步骤(1)外植体的采集与选择取雷竹种子长度>0.6cm，种胚长度l-2mm，选择心形期胚与鱼雷形期胚；(2)种子的洗净、灭菌与取种胚将刚采集的种子去掉外箨，用蒸馏水冲洗干净，放入1%浓度的NaClO的溶液中真空抽滤灭菌10min，再用无菌水冲洗5次，在无菌操作台上用解剖镜和小镊子剥去种皮，并用小刀尖挑取种胚；(3)接种与培养将切得的雷竹种胚接种到如权利要求1所述的雷竹种胚培养基中，暗培养2d后再置于光照周期16h/d、光照强度2W0Lux的光下、环境温度25±2t:中继续培养26d,共28d,便出现新绿色的生有根的试管苗，发芽率达50%;(4)继代或移栽培养将该生根的试管苗进行继代培养，或置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周，先用清水洗去根部培养基，种植于体积比为蛭石珍珠岩泥炭-l:1:1的盆装基质中，逐个套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种。本发明的有益效果是首创了雷竹这一中径散生竹用种胚作外植体组培育苗的整套方法，提供了雷竹种胚育苗的优良培养介质，为进一步探索雷竹的基因工程、拓宽外植体材料等奠定了基础。另一方面，为具有极高经济价值、竹农渴望栽种的雷竹苗，提供了充足而快速的供苗途径，而且还具有省地、运输方便、成本低、不受季节限制等优点。具体实施方式本发明下面结合实施例作进一步说明培养基选用的原料及配比是除MS盐类、MT维生素外，还有BA(O、0.3、1、3mg/L)、NAA(0、0.05、0.1、lmg/L)、氨氯吡咬酸(0.05、0，1、0.5mg/L)、TDZ(0.0001、0.001、0.01mg/L)，再加入权利要求1中记栽的营养剂和凝固剂，这里MS、MT、营养剂、凝固剂为最佳的固定加入量以外(其中的MS、MT加入量按产品说明书执行)，BA和NAA除都有不加和加的两种情况。BA还有0.3、1、3mg/L三种不同的加入量，NAA有O.05、0.1、lmg/L三种不同加入量，氨氯吡啶酸有0.05、0.1、0.5三种不同加入量，TDZ有0.0001、0.001、0.Ol三种不同加入量，培养基的pH值也分别有5、5,2、5.7、6四种情况，所以共组合了多种配方，分别置于160支试管内，对雷竹种胚进行组培，其生根发芽与褐化与否的情况如表l:(表l)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从表中可看出，序号为7、3、6的生长竹苗的情况最好，所有八组试验，都没有褐化发生。由此选择序号7、6、3的配方组合成优选的pH值为5.7，优选的BA加入量度为0.3mg/L、NAA的加入量为0.lmg/L;其它原料的最佳加入量按权利要求确定值和MS、MT的说明书规定值办。上面给出的是一个点的数值的加入量，实际上从最低到最高的整个区间值的加入量也都是可行的。本雷竹种胚组培育苗方法包括如下操作步骤(1)外植体的采集与选择取雷竹种子长度>0.6cm，种胚长度l-2mm，选择心形期胚与鱼雷形期胚；(2)种子的洗净、灭菌与取种胚将刚采集的种子去掉外箨，用蒸馏水冲洗干净，放入1%浓度的NaClO的溶液中真空抽滤灭菌10min，再用无菌水冲洗5次，在无菌操作台上用解剖镜和小镊子剥去种皮，并用小刀尖挑取种胚；(3)接种与培养将切得的雷竹种胚接种到如权利要求1所述的雷竹种胚培养基中，暗培养2d后再置于光照周期16h/d、光照强度M00Lux的光下、环境温度25±2。C中继续培养26d,共28d，便出现新绿色的生有根的试管苗，发芽率达50%;(4)继代或移栽培养将该生根的试管苗进行继代培养，或置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周，先用清水洗去根部培养基，种植于体积比为蛭石珍珠岩泥炭-l:1:1的盆装基质中，逐个套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种。权利要求1、一种雷竹种胚培养基，其特征是由下列原料及其份量组成MS盐类+MT维生素+或0.3或1或3mg/L的BA即苄氨基腺嘌呤+0.05或0.1或1mg/L的NAA即α-奈乙酸+0.05或0.1或0.5mg/L的氨氯吡啶酸+0.0001或0.001或0.01mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺嘌呤+0.5g/L的麦芽抽提物，培养基的pH值为5.0-6.0。2、如权利要求1所述的雷竹种胚培养基组培育苗方法，包括如下操作步骤(1)外植体的釆集与选择取雷竹种子长度>0.6cm，种胚长度1-2mm，选择心形期胚与鱼雷形期胚；(2)种子的洗净、灭菌与取种胚将刚采集的种子去掉外箨，用蒸馏水冲洗干净，放入1%浓度的NaClO的溶液中真空抽滤灭菌10min，再用无菌水冲洗5次，在无菌操作台上用解剖镜和小镊子剥去种皮，并用小刀尖挑取种胚；(3)接种与培养将切得的雷竹种胚接种到如权利要求1所述的雷竹种胚培养基中，暗培养2d后再置于光照周期16h/d、光照强度2400Lux的光下、环境温度25±中继续培养26d，共28d，便出现新绿色的生有根的试管苗，发芽率达50%;(4)继代或移栽培养将该生根的试管苗进行继代培养，或置于驯化室，强光20000Lux下驯化2周，先用清水洗去根部培养基，种植于体积比为蛭石珍珠岩泥炭-l:1:l的盆装基质中，逐个套透明塑料袋，该袋每二天剪一小口，一周后弃袋移入温室栽种。全文摘要一种雷竹种胚培养基，由下列原料及其份量组成MS盐类+MT维生素+或0.3或1或3mg/L的BA即苄氨基腺嘌呤+0.1mg/L的NAA即α-奈乙酸+0.1mg/L的氨氯吡啶酸+0.001mg/L的TDZ即噻二唑苯基脲+20g/L的葡萄糖+100mg/L的肌醇+10mg/L的硫酸腺嘌呤+0.5g/L的麦芽抽提物，培养基的pH值为5.0-6.0。用本培养基组培育苗包括下列操作步骤外植体的采集与选择、种子的洗净灭菌与取种胚、接种与培养、继代或移栽培养。用本培养基与组培方法，首创了雷竹这一经济价值高的中径散生竹的优良培养基与种苗组培方法，为雷竹的进一步研究、探索新的生物工程打下基础，实现快速而充足提供雷竹种苗的希望在即。文档编号A01H4/00GK101336614SQ20081006338公开日2009年1月7日申请日期2008年8月12日优先权日2008年8月12日发明者伟方,朱圆圆,林新春,桂仁意,裴海燕,黄丽春申请人:浙江林学院