专利名称：蓝靛果忍冬组织培养方法
技术领域：
本发明涉及到东北地区的一种浆果的无性繁殖方法，即蓝靛果忍冬的组织培养法。本发明属于植物 组织培养技术和森林培育领域。
背景技术：
蓝靛果忍冬因其潜在的营养价值、药用价值和商用价值，是一种世界珍稀的、纯天然的、绿色的可食 用浆果，具有极为广阔的国内外市场，进一步扩大和开发蓝靛果产品，具有广阔的前景。然而由于无计划 掠夺式的采摘，致使蓝靛果忍冬遭到严重破坏，自然修复能力降低，蕴藏量和可采量锐减。其次，黑龙江 省东宁口岸收购蓝靛果忍冬已趋热势，供需矛盾日益加剧。
我国蓝靛果忍冬的育苗技术主要有实生种子繁殖、无性繁殖(即分株、压条、硬枝扦插、绿枝扦插) 等技术，利用组培技术繁育蓝靛果忍冬的资料极少，只有以冬眠枝条经水培后萌发的嫩枝为外植体，筛选 出蓝靛果忍冬组培快繁培养基的报道。但蓝靛果忍冬生根培养尚未有人研究，组织培养体系尚未建立，优 良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了蓝靛果深加工业的发展。
发明内容
本发明对优良的蓝靛果忍冬种质资源采用组织培养技术，以休眠枝条水培后萌发的嫩枝为外植体，经 外植体灭菌、嫩芽接种、分化增殖培养基筛选、生根培养基筛选等步骤，研究培养过程中试管苗的营养需 求、激素对苗木生长分化的调控，解决蓝靛果忍冬的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完 善的蓝靛果忍冬组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存 了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化 生产。
图l蓝靛果忍冬接种的嫩芽
图2 a不同处理增殖培养(35天)分化的试管苗数b不同处理增殖培养(35天)试管苗苗高 图3 a不同处理生根培养(40天)的根系
具体实施例方式
以蓝靛果忍冬休眠枝条经水培后萌发的嫩枝为外植体，具体由以下四个步骤组成(1)外植体灭菌 首先采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后用0. 1%升汞灭菌3分钟，以无菌水浸泡40分 钟；(2)接种在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 lmg/L 的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA) ， PH 5.8，培养温度为25土2。C,光照周期12h/ d，光强度为20001ux，待培养l个月后，即开始下一个阶段；(3)增殖将获得的苗木转移到增殖培养 基上进行增殖培养。以三种激素6-BA、 IBA、 GA3各两个水平采用正交试验设计进行筛选，培养温度为25 ±2°C,光照周期12h/d ，光强度为20001ux，培养35天。结果最佳增殖培养基是在MS常规培养基中添 加了 lmg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 0. 3rag/L的吲哚丁酸(IBA) 、 1. 5mg/L的赤霉素(GA3);培养35 天增殖达4. 88倍；(4)生根剪取增殖培养中长度为1. 5 2. Ocm的健壮的芽接种到四种生根培养基上， 采用单因素试验设计进行生根培养筛选。培养温度为25土2。C，光照周期12h/d,光强度为20001ux。结 果在1/2MS (大量元素减半)培养基中添加了 0.5rag/L的萘乙酸(NM)的培养基，在培养20天后新苗基 部出现幼嫩根系，再过20天平均根数达1. 8条，平均根长达6.4cm。
权利要求
蓝靛果忍冬(Lonicera Edulis)的组织培养方法，其特征在于由以下四个步骤组成1.外植体灭菌 首先采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后用0.1％升汞灭菌3分钟，以无菌水浸泡40分钟；2.接种 在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了1mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，待培养1个月后，即开始下一个阶段；3.增殖 将获得的试管苗转接到增殖培养基上进行增殖培养，该培养基是在MS常规培养基中添加了1mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.3mg/L的吲哚丁酸(IBA)、1.5mg/L的赤霉素(GA3)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，培养35天增殖达4.88倍；4.生根 剪取增殖培养中长度为1.5～2.0cm的健壮的芽接种到生根培养基，该培养基是在1/2MS(大量元素减半)培养基中添加了0.5mg/L的萘乙酸(NAA)，PH 5.8，培养温度为25±2℃，光照周期12h/d，光强度为2000lux，20天后苗木基部出现白色嫩根，再过20天平均根数达1.8条，平均根长达6.4cm。
1. 外植体灭菌首先采用常规法将水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗净，然后用0. 1%升汞灭菌3分钟， 以无菌水浸泡40分钟；
2. 接种在无菌的条件下将嫩芽接种在初代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 lmg/L的 6-苄基腺嘌呤(6-BA) 、 0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA) , ffl 5. 8，培养温度为25土2。C，光照周期12h/ d,光强度为20001ux，待培养l个月后，即开始下一个阶段；
3. 增殖将获得的试管苗转接到增殖培养基上进行增殖培养，该培养基是在MS常规培养基中添加了 lmg/L的6-节基腺嘌呤(6-BA) 、 0. 3mg/L的吲哚丁酸(IBA) 、 1. 5mg/L的赤霉素(GA3) , PH 5.8， 培养温度为25土2。C，光照周期12h/d，光强度为20001ux,培养35天增殖达4. 88倍；
4. 生根剪取增殖培养中长度为1.5 2.0cm的健壮的芽接种到生根培养基，该培养基是在1/2MS (大 量元素减半)培养基中添加了 0.5mg/L的萘乙酸(NAA) ， PH 5.8，培养温度为25士2。C，光照周期 12h/d，光强度为20001ux， 20天后苗木基部出现白色嫩根，再过20天平均根数达1. 8条，平均根 长达6. 4cra。
全文摘要
本发明属于植物组织培养技术和森林培育领域，涉及蓝靛果忍冬(Lonicera Edulis)的高效繁殖方法。该方法分为外植体灭菌、接种、增殖、生根四个阶段。该方法解决了蓝靛果忍冬的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
文档编号A01H4/00GK101574055SQ20081006446
公开日2009年11月11日 申请日期2008年5月8日 优先权日2008年5月8日
发明者卢慧颖, 田新华, 郭树平 申请人:黑龙江省林业科学研究所