专利名称：坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法
技术领域：
本发明涉及一种坛紫菜，尤其是涉及一种坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法。
技术背景坛紫菜(,o"AKra力w't朋e/^is)是我国特有的暖温带性品种，是福建、浙江和广东沿海 人工养殖的重要经济红藻，其产量约占全国紫菜总产量的80%。近几年，随着坛紫菜栽培面 积的不断扩大，养殖海区过于密集，采壳孢子苗无限制地提早，加上大多养殖海区一般都采 用一次引入野生种菜，长期自留自养的生产模式，不仅导致坛紫菜种质退化、幼苗大量脱落， 而且使叶片逐渐失去原有的光泽和弹性，生长周期縮短，原藻的产量和质量下降。同时由于 紫菜的自交、近交机率较高，养殖种质的遗传多样性逐渐丧失，种质资源同质化，劣质基因 纯合化，因此在保护坛紫菜自然种群种质资源的同时，对现有的坛紫菜优良种质按遗传性状 规律加以选择分类并加以保存保护，避免良种性状的衰退，以及在培养室内对已保存的良种 进行扩增和应用丝状体细胞工程技术开展工厂化育苗，己经引起藻类学者的高度重视。坛紫菜一生中具有叶状体和丝状体两个异型世代，叶状体保存可以采用阴干后进行低温 冷藏的方法，但难以长久保存。由于丝状体的核相是双倍体，在保存培养中只发生有丝分裂 进行生长，同时它成熟后又能放散壳孢子再长成叶状体，因此可以将丝状体作为种质进行保 存。丝状体的保存目前有液体保存和超低温液氮保存两种方法。液体保存法比较适合于二级 保存和藻丝的扩增培养，但需要经常更换培养液，工作量大且容易污染。超低温液氮保存虽 然容易保持种质遗传稳定性，便于长期保存、省时省力，但需要使用抗冻保护剂，且成活率 低，因此应用受到一定的影响。20世纪90年代，胶囊化脱水法开始用于植物材料的冰冻保存，该方法不仅操作简单，不 需复杂设备，而且不用抗冻保护剂，是对超低温冰冻保存技术的一个重大改进。但在海藻种 质的低温保存中，尚未见到相关报道。发明内容本发明的目的是提供一种坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法。 本发明的技术方案是通过对坛紫菜丝状体种质进行胶囊化包埋，形成胶球，然后再将脱 水后的胶球直接置于-2(TC的冰箱中保存的方法。本发明包括以下步骤1) 坛紫菜丝状体培养；2) 过滤去除丝状体培养液，并吸干水分；3) 将丝状体投入褐藻酸钠溶液中，进行悬浮，并混匀得悬浮藻液；4) 制备胶球；5) 对胶球进行脱水处理；6) 胶球冷冻保存。 使用时，将胶球复苏。坛紫菜丝状体培养的条件为培养液最好为消毒海水，培养温度最好为20irc，光照强 度最好为1000 1500 lx，光周期最好为12h(光)12h(暗)。所述的过滤可采用筛绢网过滤，所述的吸干可采用吸水纸吸干。按质量百分比，所述的褐藻酸钠溶液的浓度最好为3%，采用丝状体培养液配制。所述的制备胶球的方法是用带针头的注射器将悬浮藻液滴入含0.1mol/L的CaCl2的浓度为 (按质量百分比)3。/。的NaCl溶液中，摇动，即可使藻液下沉变硬，形成胶球。所述的对胶球进行脱水处理的方法是将完成固定化的胶球过滤除去CaCl2溶液，吸十胶球 表面残液后放入培养皿中，再将培养皿放入底部放有己烘干的硅胶的大培养皿中，盖上培养 皿盖子，用胶带将周边密封后进行脱水。大培养皿的直径可选为15cm，盖上培养皿盖子，用 胶带将周边密封后进行脱水可放入25'C的恒温箱中进行脱水。胶球经脱水后，即可从培养皿中取出，放入冻干管中，冰冻保存。胶球经脱水最好10h 后，即可从培养皿中取出，放入冻干管中，直接投入-2(TC冰箱中冰冻保存。将冷冻保存的胶球取出，放入丝状体培养液中，使胶球化解，离心收获材料，并用新鲜 培养液再悬浮，进行恢复培养。丝状体培养液可为20mL含0. 05mol/L柠檬酸钠的丝状体培养 液。胶囊化低温长期保存的坛紫菜丝状体，存活率可达70%以上，随保存时间延长，其存活 率不会有明显变化。与现有的方法相比，本发明具有以下突出优点(1)对坛紫菜丝状体进行胶囊化包埋后， 可以置于普通冰箱中对坛紫菜丝状体种质进行长期保存，长期保存的丝状体存活率不会发生 显著变化；(2)无需复杂的超低温设备，只需普通冰箱即可；(3)操作简单，无需复杂的操 作程序；(4)可以最大程度地减少丝状体种质的污染。
具体实施方式
(1) 培养坛紫菜丝状体，培养条件为培养温度20土rC，光照强度1000 1500 lx，光周期为12h(光)12h(暗)。(2) 用筛絹网过滤除去丝状体培养液，并用吸水纸吸千。(3) 将吸干的丝状体投入3%褐藻酸钠溶液中，进行再悬浮、混匀后，用带8号针头的注 射器将藻液滴入含O. lmol/L的CaCl2的3。/。NaCl溶液中，轻轻摇动，使藻液缓慢下沉变硬，形成 胶球。(4) 将完成固定化的胶球用筛绢网过滤除去CaCl2溶液，吸水纸吸干表面残液后放入直 径6cm的小培养皿中，再将3个小培养皿放入直径15cm，底部放有一层已烘干的硅胶的大培养 皿中，盖上培养皿盖子，用胶带将周边密封后放入25'C的恒温箱中进行脱水。(5) 胶球经脱水处理10h后，即可从培养皿中取出，放入冻干管中，直接投入-2(TC冰箱 中冰冻保存。(6) 当要对丝状体进行复苏培养时，将冷冻保存的胶球取出，放入20mL含0.05mol/L的 柠檬酸钠丝状体培养液中，使胶球化解，离心收获材料，并用新鲜培养液再悬浮，进行恢复 培养。
权利要求
1.坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于包括以下步骤1)坛紫菜丝状体培养；2)过滤去除丝状体培养液，并吸干水分；3)将丝状体投入褐藻酸钠溶液中，进行悬浮，并混匀得悬浮藻液；4)制备胶球；5)对胶球进行脱水处理；6)胶球冷冻保存。
2. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于坛紫菜丝 状体培养的条件为培养液为消毒海水，培养温度为20irC，光照强度为1000 1500 lx， 光周期为12h(光)12h(暗)。
3. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于所述的过 滤为筛绢网过滤。
4. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于所述的吸 干为吸水纸吸干。
5. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于按质量百 分比，所述的褐藻酸钠溶液的浓度为3%，采用丝状体培养液配制。
6. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于所述的制 备胶球的方法是用带针头的注射器将悬浮藻液滴入按质量百分比含0.1mol/L的CaCl2的浓度为 3。/。的NaCl溶液中，摇动，即可使藻液下沉变硬，形成胶球。
7. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于所述的对 胶球进行脱水处理的方法是将完成固定化的胶球过滤除去CaCl2溶液，吸干胶球表面残液后放 入培养皿中，再将培养皿放入底部放有已烘干的硅胶的大培养皿中，盖上培养皿盖子，用胶 带将周边密封后进行脱水。
8. 如权利要求7所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于大培养皿 的直径选为15cm，盖上培养皿盖子，用胶带将周边密封后进行脱水放入25"C的恒温箱中进行 脱水。
9. 如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于胶球经脱 水后，即从培养皿中取出，放入冻干管中，冰冻保存。
10.如权利要求l所述的坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，其特征在于将冷冻保 存的胶球取出，放入丝状体培养液中，使胶球化解，离心收获材料，并用新鲜培养液再悬浮， 进行恢复培养。
全文摘要
坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法，涉及一种坛紫菜，尤其是涉及一种坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法。提供一种坛紫菜丝状体种质的胶囊化低温保存方法。坛紫菜丝状体培养；过滤去除丝状体培养液，并吸干水分；将丝状体投入褐藻酸钠溶液中，进行悬浮，并混匀得悬浮藻液；制备胶球；对胶球进行脱水处理；胶球冷冻保存。其突出优点对坛紫菜丝状体进行胶囊化包埋后，可以置于普通冰箱中对坛紫菜丝状体种质进行长期保存，长期保存的丝状体存活率不会发生显著变化；无需复杂的超低温设备，只需普通冰箱即可；操作简单，无需复杂的操作程序；可以最大程度地减少丝状体种质的污染。
文档编号A01C1/00GK101326906SQ20081007152
公开日2008年12月24日 申请日期2008年8月1日 优先权日2008年8月1日
发明者燕 徐, 纪德华, 谢潮添, 陈昌生 申请人:集美大学