专利名称：：一种铁皮石斛快繁的组培方法
技术领域：
：本发明涉及一种生物的繁殖方法，属于生物
技术领域：
，尤其涉及一种铁皮石斛快繁的组培方法。二
背景技术：
：铁皮石斛是现阶段石斛属植物中经济价值最高的种类，其用途主要为药用及保健品使用，生产的产品有"铁皮枫斗"，国际市场价格为每公斤.1300—3600美元("龙头凤尾型"铁皮枫斗)，铁皮枫斗晶(保健饮品)，铁皮枫斗胶囊、养阴益气胶囊。通过中医临床研究以及现代药理研究证明，铁皮石斛在药用上具有生津、止渴、镇痛、消除水肿之功效，具有提高免疫功能、抗衰老、防治肿瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白内障等疾患的功能。但是，铁皮石斛因其自然繁殖能力极低，采集量远大于其生长量，目前，自然资源日趋枯竭；而所以用现代生物技术对铁皮石斛进行组培快繁、人工栽培等具有特殊的意义和应用前景。近年来，我国的一些科研机构和企业单位对铁皮石斛的组培和人工栽培技术进行了不断的探索和试验，取得了一定的成绩，但尚存在铁皮石斛种源来源单一，多用种子进行培养，但其自然繁殖率低，且受到季节的限制。扩繁速度慢、生产成本高等主要问题，影响了铁皮石斛的产业化生产。三、
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种由茎芽直接产生原球茎，体系简单的直接成苗的铁皮石斛快繁技术，更易于实现工厂化育苗。。本发明所述的铁皮石斛快繁的组培方法，其步骤是(1)原球茎的诱导选取铁皮石斛的茎芽，经过常规灭菌后接种到诱导培养基上培养，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下培养，培养2个月后经过脱分化可形成原球茎。所述诱导培养基是N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)g/L的土豆汁。其中N6基本培养基是本行业常用的一种培养基，其组成成分如下表表l:Ne培养基的组成和配方<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>(2)分化小苗将巳形成的原球茎接种到分化培养基上培养，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成高约lcm的小苗。所述分化培养基N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.01^几+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)g/L的土豆汁。(3)—步成苗将分化的小苗接种到成苗培养基上培养,置于温度为22—25。C,光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下培养，培养3个月左右，观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致，每棵苗至少有2—3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。本过程同时完成壮苗和生根，因此植株整齐度一致。每棵苗至少有2—3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm，从而保证了组培苗移栽到大田种植具有很高的成活率。所述成苗培养基2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)%的土豆汁。上述MS培养基，其组成见表2，本发明采用2/3浓度的MS基本培养基。上述的茎芽可以是野生铁皮石斛或者大田栽培铁皮石斛采集，也可以用人工培养的铁皮石斛茎芽。表2:MS培养基的组成和配方<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本发明相对现有技术具有如下效果1.解决了铁皮石斛培养时种源多用种子进行培养，但其自然繁殖率低，且受到季节的限制的问题。可随时采取茎芽培养。2.大大縮短了快繁的时间，这个周期控制在7个月左右。3.用卡拉胶代替了琼脂，节约了生产成本，且培养植株根系更发达健壮。可以提高大苗的移栽存活率。四图l是本发明的流程图。五具体实施方式以下结合具体实施例对本发明进一步说明。实施例h如图1所示，首先选取野生铁皮石斛或者大田栽培铁皮石斛采集茎芽，经过常规消毒程序后，放入由N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶7g/L+绵白糖40g/L+50g/L的土豆汁配置的诱导培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行原球茎诱导培养，2个月后可观察到形成了原球茎。将己形成的原球茎放入由N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.Omg/L+卡拉胶7g/L+绵白糖20g/L+50g/L的土豆汁配置的分化培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约lcm的小苗。将分化的小苗接放入由2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶7g/L+绵白糖20g/L+50g/L的土豆汁配置的成苗培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根，培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致，每棵苗至少有2—3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。实施例2:如图l所示，首先选取人工培养的铁皮石斛采集茎芽，经过常规消毒程序后，放入由N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶8g/L+绵白糖30g/L+100g/L的土豆汁配置的诱导培养基里，置于温度为22—25'C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行原球茎诱导培养。2个月后可观察到形成了原球茎。将已形成的原球茎放入N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.Omg/L+卡拉胶8g/L+绵白糖30g/L+100g/L的土豆汁配置的分化培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约lcm的小苗。将分化的小苗接放入由2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶8g/L+绵白糖30g/L+100g/L的土豆汁配置的成苗培养基里，置于温度为22—25'C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根。培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致。每棵苗至少有2_3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。实施例3:如图1所示，首先选取野生铁皮石斛或者大田栽培铁皮石斛采集茎芽，经过常规消毒程序后，放入由N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶8.5§几+绵白糖308几+150g/L的土豆汁配置的诱导培养基里，置于温度为22—25。C，光照2000—30001x，每日光照10_12h的环境下进行原球茎诱导培养，2个月后可观察到形成了原球茎。将已形成的原球茎放入由N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.0mg/L+卡拉胶8.5g/L+绵白糖40g/L+150g/L的土豆汁配置的分化培养基里，置于温度为22—25'C，光照2000~30001x，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约lcm的小苗。将分化的小苗接放入由2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶8.5g/L+绵白糖40g/L+150g/L的土豆汁配置的成苗培养基里，置于温度为22—25X:，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根。培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致。每棵苗至少有2_3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。实施例4:如图l所示，首先选取野生铁皮石斛或者大田栽培铁皮石斛采集茎芽，经过常规消毒程序后，放入由N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶8g/L+绵白糖30g/L+100g/L的土豆汁配置的诱导培养基里，置于温度为22—25。C，光照2000—30001x，每日光照10_12h的环境下进行原球茎诱导培养。2个月后可观察到形成了原球茎。将已形成的原球茎放入由N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.0mg/L+卡拉胶7.5g/L+绵白糖30g/L+100g/L的土豆汁配置的分化培养基里，置于温度为22—25。C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约lcm的小苗。将分化的小苗接放入由2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶7.5g/L+绵白糖20g/L+150g/L的土豆汁配置的成苗培养基里，置于温度为22—25'C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根。培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致。每棵苗至少有2_3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。实施例5:如图1所示，首先选取人工培养的铁皮石斛采集茎芽，经过常规消毒程序后，放入由N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶8.5g/L+绵白糖30g/L+80g/L的土豆汁配置的诱导培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行原球茎诱导培养，2个月后可观察到形成了原球茎。将己形成的原球茎放入由N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.0mg/L+卡拉胶8g/L+绵白糖20g/L+120g/L的土豆汁配置的分化培养基里，置于温度为22—25°C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约lcm的小苗。将分化的小苗接放入由2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖25g/L+100g/L的土豆汁配置的成苗培养基里，置于温度为22—25。C，光照2000—30001x，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根。培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致。每棵苗至少有2_3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。权利要求1.一种铁皮石斛快繁的组培方法，其特征在于该方法包括下列步骤1)选取铁皮石斛的茎芽，经过常规消毒程序后，放入原球茎诱导培养基里，置于温度为22-25℃，光照2000-3000lx，每日光照10-12h的环境下进行原球茎诱导培养，2个月后经过脱分化形成原球茎；2)将已形成的原球茎放入分化培养基里，置于温度为22-25℃，光照2000-3000lx，每日光照10-12h的环境下进行分化培养，培养2个月后再分化形成约1cm的小苗；3)将分化的小苗接放入成苗培养基里，置于温度为22-25℃，光照2000-3000lx，每日光照10-12h的环境下进行一步成苗培养即同时壮苗并生根，培养3个月左右形成完整铁皮石斛大苗。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛快繁的组培方法，其特征在于所述步骤1)所述的铁皮石斛茎芽采集的是野生铁皮石斛或者大田栽培石斛或人工培养的铁皮石斛。3.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛快繁的组培方法，其特征在于步骤l)所述的诱导培养基是N6基本培养基+吲哚丁酸1.5mg/L+6-苄基腺嘌呤0.5mg/L+卡拉胶(7_8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)g/L的土豆汁。4.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛快繁的组培方法，其特征在于步骤2)所述的分化培养基是N6基本培养基+6-苄基腺嘌呤2.0mg/L+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)g/L的土豆汁。5.根据权利要求1或2所述的铁皮石斛快繁的组培方法，其特征在于步骤3)所述的成苗培养基是2/3MS基本培养基+奈乙酸0.5mg/L+卡拉胶(7—8.5)g/L+绵白糖(20-40)g/L+(50-150)g/L的土豆汁。全文摘要本发明公开了一种铁皮石斛快繁的组培方法，涉及生物
技术领域：
。首先选取铁皮石斛的茎芽，在原球茎诱导培养基里诱导培养，2个月后可观察到形成了原球茎；之后再放入分化培养基里进行分化培养，培养2个月后可观察到瓶内的原球茎经过再分化形成小苗，高约1cm的小苗；将分化的小苗接放入成苗培养基里进行成苗培养，培养3个月左右观察到瓶内铁皮石斛大苗整齐度一致，每棵苗至少有2-3条发达健壮的根系，株高达到3-6cm且叶片较绿。本发明可以缩短铁皮石斛的培育时间，不仅有效解决了铁皮石斛种源的来源问题，且不受时间地点的限制，与传统种苗扩繁相比，速度提高时间缩短到7个月，且用卡拉胶代替了琼脂，节约了成本。文档编号A01H4/00GK101273709SQ20081010870公开日2008年10月1日申请日期2008年5月14日优先权日2008年5月14日发明者王小霞,胡春宏,钟玉梅申请人:南京养颐堂生物科技实业有限公司;马鞍山养颐堂稀特植物生态园有限公司