专利名称：：杀虫真菌可乳粉剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种杀虫真菌农药，特别涉及一种杀虫真菌可乳粉剂。
背景技术：
：由于化学农药长期大量的使用，已严重破坏生态、污染环境，导致害虫再猖獗。采用不污染环境、对人畜无毒的生物农药替代化学农药成为害虫综合控制的重要手段之一。真菌是最重要的杀虫微生物类群，杀虫真菌是唯一同时具有触杀特性和流行性的病原微生物，其致病机制复杂，昆虫不易产生抗性，对解决害虫的抗药性问题极具潜力。这使得应用真菌杀虫剂防治害虫受到国内外的广泛关注。杀虫真菌农药现有的剂型有粉剂、可湿粉、油悬浮剂等。粉剂是杀虫真菌最早开发与使用的剂型，它是将真菌菌丝或孢子与填充剂(如硅藻土、滑石粉、轻质碳酸钙、高岭土等)、抗紫外线辐射剂等添加物混合加工而成。粉剂有效克服杀虫真菌不耐贮存的缺点，但粉剂直接喷粉后，孢子或菌丝段需要依靠从环境中吸收水分而萌发或重新生长，而真菌孢子萌发或重新生长要求高湿度条件，受环境中湿度变化的影响大，田间应用的稳定性较差。因此，杀虫真菌粉剂难以在干燥条件下使用；另外还容易随风飘散，产生粉尘，污染环境。可湿性粉剂具有使用方便，防治范围广，对环境安全和能促进疏水的真菌孢子在水中迅速分散的优点，一度成为杀虫真菌制剂研究的热点。目前登记注册的杀虫真菌可湿性粉剂占注册真菌农药的40%左右。但可湿粉剂中孢子容易吸水受潮，导致耐储性低；而且添加的高浓度表面活性剂受潮后与真菌孢子长时间接触，必然影响真菌孢子萌发力，导致田间防效不稳定。近年来采用的油悬浮剂虽然成功地克服了真菌孢子难以在干燥环境中使用、杀虫效果受环境中湿度影响的缺陷，但使用时需用油或专用稀释液稀释后喷药，受制剂粘度限制只能采用超低容量喷雾机进行喷雾施药，仅适用于防治集中发生的少数重大害虫，而不适合常年性分散发生的大多数农业害虫防治，不适宜农村农林害虫群众防治的基本植保方式，这极大的制约了杀虫真菌制剂的推广使用。因此，研制使用方便、稳定耐储、受环境影响小的杀虫真菌油基性新剂型成为杀虫真菌制剂研究的热点。Batta(2004)尝试把孢子加入水中与乳化剂混合加工成油包水的水乳剂，虽然能增加防治效果，但由于制剂中含有水，不能长期保存，IO周后孢子萌发率降低至80%以下。
发明内容本发明的目的是提供一种高活性、稳定耐储、使用方便的杀虫真菌可乳粉剂。该杀虫真菌可乳粉剂是由下述重量配比的组分组成杀虫真菌孢子粉或菌丝体4060，表面活性剂占510，植物油占515，稳定剂510，分散剂0.11;其中所述杀虫真菌是绿僵菌、白僵菌、拟青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性剂是非离子型表面活性剂；所述植物油是棕榈油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一种或多种按任意比例的混合物；所述稳定剂是黄原胶、羧甲基纤维素、明胶中的一种或多种按任意比例的混合物；所述分散剂是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。所述非离子型表面活性剂可以选自司盘Span、吐温Tween、曲拉通(Tritone)，最好是司盘、吐温、曲拉通的一种或多种按任意比例的混合物。该杀虫真菌可乳粉剂中还可以加入重量份0.21.0的抗氧化剂，抗氧化剂是BHA、BHT、维生素E中的一种或多种按任意比例的混合物。为增强该该杀虫真菌可乳粉剂的渗透性，还可以加入重量份是0.51.0的渗透剂，氮酮、801、804中的一种或多种按任意比例的混合物。该杀虫真菌可乳粉剂中还可以加入重量份是(0.010.05)的化学农药作为增效剂，如天然除虫菊酯、氰戊菊酯、三氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯等。以上助剂的选取是以相容增效为原则。本发明适用于真菌通过液体一固体发酵获得的孢子、菌丝体或其混合物的加工制作。真菌可乳粉剂加工方法流程1)按比例配制含表面活性剂、渗透剂、抗氧化剂的植物油；2)采用高速喷雾搅拌技术，按所述重量份数将步骤l)所述植物油均匀地包裹在干燥的真菌孢子表面上，形成一薄层保护性油膜；3)按所述比例把步骤2)所得真菌油孢子粉与稳定剂、分散剂在搅拌器中混合均匀即可得到本发明。本发明针对目前真菌制剂中干粉制剂田间防效不稳定和贮存期短，而油悬浮剂不便常规喷雾、真菌生物农药常量喷雾剂型缺乏的现状，依据真菌生物农药的生物学特性，依据微生物农药相容增效的配伍原理，按照优化配方将表面活性剂、稳定剂、分散剂等助剂成分混合配制而成稳定的可乳粉剂，使用时按比例直接加水稀释后采用常量喷雾器进行常规喷雾即可。本发明的杀虫真菌可乳粉剂具有以下优点1、稳定耐储。选用的表面活性剂等助剂与真菌相容，以真菌可乳粉剂的形式贮存和运输，储运方便，能有效延长真菌孢子贮存时间，便于制剂长期贮存。2、高活性。本发明真菌孢子表面的油膜起到保护膜的作用，并维持孢子低的干燥减量，减少真菌孢子与环境中氧气和水分的接触，油膜中抗氧化剂进一步降低孢子与氧的作用，使真菌孢子在储存期代谢处于低的水平而保持高活性。杀虫真菌可乳粉剂直接加水稀释后形成水包油、油包孢子的水乳剂(c/o/w)，受环境影响小，防效稳定。施用后，油能有效吸收紫外线，降低紫外线对真菌孢子的损伤，提高了活性，有效提高田间防效稳定性。3、施药方便。可直接加水后采用手动喷雾器进行常量喷雾，简化了真菌制剂的施用方法；因为与真菌菌丝体或孢子相容的表面活性剂一方面稳定分散剂，另一方面使分散剂易与油孢子混匀，兑水后孢子能均匀稳定地分散在水中，便于常规喷雾器施药，特别适合农民一家一户小面积使用。同时也可以与相容增效的多种化学农药混合使用。4、加工生产工艺简单，容易与其他相容增效的农药复配使用。5、使用成本低。在田间可用水代替油或专用稀释液稀释分散有效成分。本发明既保存油悬浮剂的货架期长的优点，又克服传统粉剂不耐贮存以及油悬浮剂的使用不便等缺陷，适合我国广大农户使用，为农林果树、蔬菜害虫的生物防治提供一种真菌农药的新剂型。为了证明本发明在储存时间、耐紫外线特性、耐干燥、热稳定性等方面的优越性，做了以下实验实验一、真菌可乳粉剂的储存稳定性分别取实施例1所配制的真菌可乳粉剂和干孢子粉5g，装入2个50ml的烧杯中分别在温度为26土rC，湿度为95%、75%、55%、35%的环境放置10天，每个样品分别混匀，取出0.lg分别放入1.5ml的离心管，在高温(55°C)恒温水浴锅处理4小时后用0.05%吐温一80灭菌水配成3X107spores/ml浓度的孢子悬浮液，用移液器取lOOul均匀涂布在放有直径为9mm玻璃纸圆片的1/4SDA平板上，26土1。C恒温培养，设置未处理对照，24小时后取玻璃纸圆片用棉蓝染色后镜检，计数200_300个孢子，记录萌发的孢子数，计算萌发率，每一处理三个重复。表1真菌可乳粉剂与干孢子粉的热稳定性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>从表1可以看出未加热处理的真菌可乳粉剂与干孢子粉热稳定性无明显差异，而真菌可乳粉剂在相对湿度》75%环境中贮存一段时间后，其耐热性明显高于干孢子粉。如在75%、95%的环境湿度常温贮存10天后，经过55"C恒温处理4小时，真菌可乳粉剂的萌发率分别为80.6%、67.1%，显著高于干孢子粉65.5%、42.4%的萌发率水平，孢子的热稳定性与孢子的贮存时间正相关，说明真菌可乳粉剂耐贮性优于干孢子粉。实验二、本发明的耐紫外线特性取实施例6所配制的绿僵菌真菌可乳粉剂7g与100ml分散剂混合后，加水稀释300倍，用移液器取100ul均匀涂抹在放有直径为9mm玻璃纸圆片的1/4SDAY平板上，在干燥器中晾干(无水膜)后置于距30w的紫外灯35cm的地方垂直照射60S后，取出放入26"C恒温箱内进行培养，以孢子浓度为3X107SpOreS/ml的绿僵菌油悬浮剂、水分散剂和干孢子粉为对照。不同时间取出玻璃纸圆片棉蓝染色后镜检，计数200—300个孢子，记录萌发的孢子数，计算萌发率，第一次6h检测，以后每隔3h检査一次各自的萌发率。从图l看出可乳粉耐紫外线能力接近绿僵菌油悬浮剂，经紫外线处理60s后，它们的36h的萌发率分别为82.0%和93.3%，显著高于绿僵菌水分散剂和干孢子粉，紫外线处理绿僵菌水分散剂和干孢子粉60s，培养36h后的萌发率分别为为42.1%与28.3%。实验三、本发明的耐干燥特性取实施例6所配制的的绿僵菌可乳粉剂加水100ml稀释300倍后喷雾于东亚飞蝗膜翅上，分别放在温度为26'C、相对湿度为100%、90%、80%、70%的容器中，设干孢子粉与孢子浓度为3X107spores/ml水分散剂作对照，36h后用棉蓝染色后镜检，计数200—300个孢子，记录萌发的孢子数，计算萌发率。重复3次。表2不同剂型绿僵菌孢子在不同湿度条件下的萌发率(％)剂型相对湿度100%90%80%70%可乳粉剂91.8±3.556.2±5.119.5±2.10.7干孢子粉92.3±1.819.4±1.80-水分散剂93.9±2.223.7±2.00-从表2以看出在饱和湿度下，几种制剂的萌发率没有显著差异；环境湿度为90%时可乳粉萌发率为56.2%，显著高于绿僵菌干孢子粉和水分散剂在相同湿度环境中的的萌发率(19.4%、23.7%),在环境湿度70%时，干孢子粉不萌发，说明的耐旱能力高于绿僵菌水分散剂及其干孢子粉。实验四不同杀虫真菌孢子的热稳定性按表3分别配制绿僵菌、白僵菌和拟青霉的含不同表面活性剂的杀虫真菌可乳粉剂，各取0.2g杀虫真菌可乳粉剂装入1.5ml的离心管中，在高温(55°C)恒温水浴锅处理1小时，用接种环挑取少许接种在1/4SDA平板中的直径为9mm玻璃纸圆片上，均匀涂布，26土rC恒温培养，设不加表面活性剂处理对照，24小时取玻璃纸圆片用棉蓝染色后镜检，计数200—300个孢子，记录萌发的孢子数，计算萌发率，每一处理三个重复。表3不同真菌孢子可乳粉剂的耐热性测试结果(55°C，l小时)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从表3可以看出三种不同的杀虫真菌孢子在不同表面活性剂的可乳粉剂中经高温处理后孢子萌发率无明显差异，说明可乳粉适用于不同类型真菌。实验五、绿僵菌不同配方可乳粉剂防效测定以杀蝗绿僵菌为试验菌株，按表4用植物油配制含不同表面活性剂的20%绿僵菌(含100亿孢子/克)可乳粉剂。从室内词养的东亚飞蝗种群中，挑选34龄体重基本相同的若虫，放入种有麦苗的直径为35cmX50cm网笼中，每处理50头。不同绿僵菌可乳粉剂用水300倍稀释后按5000ul/笼的用量常量喷雾。设20%绿僵菌油悬浮剂以色拉油3倍稀释后按50ul/笼的用量超低容量喷雾为对照。重复3次。调节养虫室室温至28'C，相对湿度30-60%，三天后更换新鲜麦苗。每天定时观察，记载各处理的死虫数，用DPS软件计算LT9()。表4不同配方的绿僵菌可乳粉剂的毒力测定制剂表面活性剂分散剂~~渗透剂抗氧化剂~~LT90(d)~~注Span:司盘；T:Tween;Tr:TritoneX100。从表4可以看出上述①⑤不同20%绿僵菌可乳粉剂用300倍水稀释后超常量容量喷雾防治东亚飞蝗的LT9。与对照绿僵菌悬浮剂没有显著差异(p二0.05)，说明绿僵菌可乳粉剂在高温、低湿的环境条件下杀虫效果稳定，防效与绿僵菌油悬浮剂一致。实验六、绿僵菌可乳粉剂对菜青虫的防效用植物油和含200亿孢子/克绿僵菌孢子粉配制含20%绿僵菌、15%表面活性剂(包括5XSpan和5XTween和曲拉通5X)、0.8%紫外光保护剂和0.5%丁基烃基甲苯的绿僵菌可乳粉剂。用0.5%的吐温水溶液配置含量为1.6xl07包子/ml的孢子悬浮液。选取2-3龄菜青虫幼虫作为供试昆虫，绿僵菌可乳粉剂用水稀释不同倍数后采用不同方式喷雾。设1.0><107孢子/ml绿僵菌孢子水悬浮液(CK)和不施药(CKO)对照。调节养虫室室温至25士3。C，相对湿度30-60%，以清洁甘蓝叶饲喂幼虫。每天定时观察，记载各处理的死虫数，并计算施药后10天的校正死亡率。S(25%)7%119.4±1.7aT(2~5%)7%0.70.88.7±1.5aS(3%)+T(4%)3%0.50.76.5±1.labS(2%)+T(3%)+Tr(1%)5%0.30.67.7±1.3aS(2.5%)+T(2.5%)+Tr(5%)3%0.10.57.9±0.9a03%0010.5±1.7a①②③④⑤g<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>从表5可以看出绿僵菌可乳粉剂用水稀释不同倍数后采用常量喷雾施药方式防治蔬菜害虫,在施药后第8天的校正死亡率分别为92.4%、86.9%、82.6%，都明显高于1.0Xl(^孢子/ml绿僵菌孢子水悬浮液69.1%校正死亡率，说明绿僵菌可乳粉剂在高温、低湿的条件采用常量喷雾方法能有效防治菜青虫、小菜蛾、斜纹夜蛾等蔬菜害虫，防效优于绿僵菌水悬浮剂。说明书附图图1紫外线对不同剂型绿僵菌孢子萌发的影响具体实施例实施例1~12，如下表6取各种含量的组分，先配制含表面活性剂、渗透剂、抗氧化剂的植物油，再采用高速喷雾搅拌技术，将上述植物油均匀地包裹在干燥的真菌孢子表面上，形成一薄层保护性油膜；最后将真菌油孢子粉与稳定剂、分散剂在搅拌器中混合均匀即可。实施例13，在上表所述共12个实施例的基础上，各例分别增加抗氧化剂(BHA、BHT、维生素E中的一种或多种按任意比例的混合物)，重量(千克)分别是0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、0.85、0.45、0.65。表6配制可乳粉剂所用的组分及其含量(重量千克)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例14，在上表所述共12个实施例的基础上，各例分别增加渗透剂(氮酮、801、804中的一种或多种按任意比例的混合物)，重量(千克)分别是O.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、0.85、0.45、0.65、0.55、0.75、0.95。实施例15，在上表所述共15个实施例的基础上，各例分别增加重量份是(0.10.5)的化学农药增效剂(天然除虫菊酯、三氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯中的一种或多种按任意比例的混合物)，重量(千克)分别是0.1、0.2、0.3、0.4、0.5。实施例16，在上表所述共12个实施例的基础上，各例按所述重量份数同时增加抗氧化剂、渗透剂、化学农药增效剂的两种或三种。权利要求1、一种杀虫真菌可乳粉剂，其特征是由下述重量配比的组分组成杀虫真菌孢子粉或菌丝体占40～60，表面活性剂占5～10，植物油占5～15，稳定剂5～10，分散剂0.1～1；其中所述杀虫真菌是绿僵菌、白僵菌、拟青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性剂是非离子型表面活性剂；所述植物油是棕榈油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一种或多种按任意比例的混合物；所述稳定剂是黄原胶、羧甲基纤维素、明胶中的一种或多种按任意比例的混合物；所述分散剂是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。2、如权利要求1所述的杀虫真菌可乳粉剂，其特征是加入重量份O.2l.O的抗氧化剂。3、如权利要求2所述的杀虫真菌可乳粉剂，其特征是所述抗氧化剂是BHA、BHT、维生素E中的一种或多种按任意比例的混合物。4、如权利要求1所述的杀虫真菌可乳粉剂，其特征是加入重量份是0.51.0的渗透剂。5、如权利要求4所述的杀虫真菌可乳粉剂，其中所述渗透剂是氮酮、801、804中的一种或多种按任意比例的混合物。6、如权利要求1所述的杀虫真菌可乳粉剂，其中所述非离子型表面活性剂是SPAN、TWEEN、曲拉通的一种或多种按任意比例的混合物。全文摘要本发明提供了一种杀虫真菌可乳粉剂，由下述重量配比的组分组成杀虫真菌孢子粉或菌丝体40～60，植物油占5～15，表面活性剂占5～10，稳定剂5～10，分散剂0.1～1；其中所述杀虫真菌是绿僵菌、白僵菌、拟青霉、被毛孢或其混合菌；所述表面活性剂是非离子型表面活性剂；所述植物油是棕榈油、玉米油、大豆油、棉子油和菜籽油中的一种或多种按任意比例的混合物；所述稳定剂是黄原胶、羧甲基纤维素、明胶中的一种或多种按任意比例的混合物；所述分散剂是DW1003，葡萄糖脂肪酸酯或其混合物。本发明储运方便，能有效延长真菌孢子贮存时间，便于制剂长期贮存；制剂活性较高；施用后，油能有效吸收紫外线，降低紫外线对真菌孢子的损伤，有效提高田间防效稳定性；加工生产工艺简单，容易与其他相容增效的农药复配使用。文档编号A01P7/00GK101564047SQ20091010397公开日2009年10月28日申请日期2009年5月27日优先权日2009年5月27日发明者彭国雄,殷幼平,王中康,宁谢申请人:重庆大学