专利名称：一种鱼用免疫增强剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼用免疫增强剂的制备方法，属于水产配合饲料技术领域。
背景技术：
近些年来，随着我国水产养殖业的迅速发展，水产养殖的病害问题却日趋严重，常 见疾病依旧十分普遍，新的疾病不断发生，诊断和监控技术缺乏，养殖水域生态环境恶化严 重，滥用药物问题突出，水产品质量安全隐患凸现，据统计水产养殖品种的病害频繁发生， 全国每年水产养殖病害发生率达50%以上，损失率20%左右，每年因水产养殖病害问题而 造成的直接经济损失就达百亿元之巨。为了防治病原，环境改良剂、消毒剂、杀虫驱虫药、抗 生素等等药物的滥用、错用，可能对养殖动物造成毒性损伤，长期滥用药物还可能会诱发基 因突变或转移，使部分病原生物产生抗药性，对人体产生致残、致畸、致突变等，影响我国水 产养殖业的健康和可持续发展。 随着抗生素、抗菌药物的逐渐禁用，一些绿色、安全、高效饲料添加剂的开发与应 用应运而生。植物提取物具有天然、高效、毒副作用少、资源丰富等优点，含有与动物的免疫 功能密切相关的生物碱、茶多酚、皂甙、低聚糖、黄酮类、挥发油类等，能促进机体健康，减少 抗生素在动物生产中的使用，是我国传统的防病治病药物。 在水产上研究，天然植物可促进水产动物机体代谢和蛋白质及酶的合成，促进机
体的生长发育，并通过影响非特异性免疫系统，激活和诱生多种细胞因子等途径提高水产
动物机体免疫力，如传统中草药大黄、黄芪、甘草、陈皮、鱼腥草、黄芩、当归等能提高中国
对虾、南美白对虾、尼罗罗非鱼、异育银鲫等免疫能力，抵抗病原菌感染。 地锦草为大戟科植物地锦(Euphorbia humifusa willd)或班地锦
(Euphorbiamacilata L.)干燥的全草，主要成分为黄酮类化合物、没食子酸、内消旋肌醇
等，具有抗氧化、抗菌、治疗肠炎、清热解毒等功能。 仙鹤草(Agrimonia pilosa ledeb.)为蔷薇科多年生草本植物龙牙草的全草，主 要成分含有仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、甾醇、有机酸、皂苷等，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗 肿瘤等功能。 辣蓼(Polygonum hydropipre L )属蓼禾斗(Polygonaceae)蓼属(Polygonum L )
的一年生草本植物，含有水寥二醛、异水寥二醛、水寥素、槲皮素、槲皮黄甙、金丝桃甙等，具 有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能。 谷氨酰胺是L-谷氨酸的Y _羧基酰胺化物，是体液中最丰富的氨基酸之一，可增 强鱼体免疫功能、维持酸碱平衡、增加细胞的吞噬作用和淋巴细胞的增殖、增加细胞体积、 增强肌肉细胞内蛋白质的合成等，是一种极有发展前景的新型药物和动物营养性饲料添加 剂。目前已有一些关于地锦草、仙鹤草、辣寥的在水产养殖的使用，但是有关与大黄蒽醌提 取物、谷氨酰胺的配伍使用，还未见报道。因此研制一种鱼用免疫增强剂，提高鱼体抗病能 力，抗应激能力，对水产养殖的健康发展和可持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服上述的一些不足之处，从而提供一种鱼用免疫增强剂的制
备方法，其能耗低、工艺简单、生产成本低，能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密
度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长的免疫增强剂。 按照本发明提供的技术方案，一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步
骤，其组分配比以重量份数计 取谷氨酰胺二肽为0.25 0.75份、大黄提取物为0.3 0.9份、地锦草为 30. 0 40. 0份、仙鹤草为25. 0 33. 0份、辣蓼为13. 0 17. 0份、磷酸二氢钾1. 0-3. 0 份、载体为8. 45-27. 35份; 将上述各组份充分混合后粉碎，制成160 200目干粉的免疫增强剂。粉碎转速 为:400-500转/分。 所述载体选自玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉等。所述大黄提取 物，主要成分为45%大黄素，由巨邦植物原料有限公司提供。所述谷氨酰胺二肽，由浙江安 木化工有限公司提供。上述免疫增强剂在鱼饲料中的添加量为1%_5%。免疫增强剂的添 加量与使用的周期有关，当使用周期在30d以上，在饲料中添加量为1%_2% ;当使用周期 在7d以内，在饲料中添加量为3 % -5 % 。 此免疫增强剂可用于鲤鱼、鲫鱼、青鱼、草鱼、鳊鱼、翘嘴红舶等常规淡水鱼类养殖 中，直接地清除机体内的自由基，消除自由基对机体组织器官正常功能的负面影响，加快修 复被破坏的免疫系统，减缓机体对应激条件的反应，能提高鱼体的免疫与抗氧化能力、抗高 密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，改善饲料适口性，促进鱼体生长。
本发明与已有技术相比具有以下优点 1、使用本添加剂后，大黄提取物、地锦草、仙鹤草、辣寥等含有丰富黄酮类化合物、 没食子酸、仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、水蓼二醛、水蓼素、槲皮素、大黄素、大黄酸等，具有 抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，提高鱼体饲料利用率，促进鱼体生长。
2、本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉。 3、本发明从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰 胺二肽；从中西结合药物对鱼体的应激调理，并适当补充应激造成的Na+、 K+流失来防治鱼 体应激。 4、本发明免疫增强剂通过动物试验，表明免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能 力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，促进鱼体生长。
具体实施例方式
下面本发明将结合实施例作进一步描述 实施例一本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组份配 比以重量份数计 取谷氨酰胺二肽为0.75份、大黄提取物为0.9份、地锦草为30.0份、仙鹤草 为25. 0份、辣寥为13. 0份、磷酸二氢钾3. 0份、载体选玉米为27. 35份；将上述各组分
充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小 型超微粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过160目的筛网制成免疫增强
4剂；超微粉碎机粉碎速度400转/分；混合机投料转速18转/分； 生长实验鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。鲫鱼驯化30d后投喂0、1. 0%等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。 应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C ，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每6h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。 攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌_嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理盐水稀释，使终浓度约为lX107cellS/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0ml，后放养于同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cmX100cmX100cm)，并保证充足的氧气，每天观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。 结果表明与对照组相比，1. 0%免疫增强剂增重率显著(P < 0. 05)分别提高了7. 36X;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为95. 0%， 1. 0%免疫增强剂鱼死亡率为32. 0%;高密度应激ld试验后，与对照组相比，1.0X免疫增强剂显著(P < 0.05)降低血液皮质醇浓度8. 11 % ，血糖水平4. 56 %及丙二醛浓度9. 22 % ，增加了血液过氧化氢酶11. 34 % 、超氧化物歧化酶活性8. 78%以及应激蛋白HSP70浓度4. 77%，因此，该免疫增强剂能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。 实施例二本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组分配比以重量份数计 取谷氨酰胺二肽为0. 5份、大黄提取物为0. 6份、地锦草为35. 0份、仙鹤草为
28.0份、辣寥为15.0份、磷酸二氢钾2.0份、载体选麸皮为20.9份；将上述各组分充分在混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小型超微
粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过180目的筛网制成免疫增强剂；超微粉碎机粉碎速度450转/分；混合机投料转速19转/分； 生长实验鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规
格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。鲫鱼驯化30d后投喂0、2. 0%等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。 应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度(100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C ，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少人为干扰，保持安静，防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血液、肝脏样品等。 攻毒实验饲养试验结束后，每 剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。病原菌采用淡水鱼类细菌_嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理 盐水稀释，使终浓度约为lX107cellS/ml。按每lOOg鱼重腹腔注射菌液l.Oml，后放养于 同样规格容积的水泥池网箱中(规格为lOOcmXIOOcmX 100cm)，并保证充足的氧气，每天 观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。 结果表明与对照组相比，2. 0%免疫增强剂增重率显著(P < 0. 05)分别提高了 9. 76X;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为96. 0%，2. 0%免疫增强剂鱼死亡率为28. 0%; 高密度应激ld试验后，与对照组相比，2.0X免疫增强剂显著(P < 0.05)降低血液皮质醇 浓度9. 34%，血糖水平5. 67%及丙二醛浓度9. 87%，增加了血液过氧化氢酶9. 78%、超氧 化物歧化酶活性7. 65%以及应激蛋白HSP70浓度5. 76 % ，因此，该免疫增强剂能提高鱼体 免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提高鱼体抗应 激能力，促进鱼体生长。 实施例三本发明一种鱼用免疫增强剂的制备方法采用以下工艺步骤，其组分配 比以重量份数计 取谷氨酰胺二肽为0. 25、大黄提取物为0. 3份、地锦草为40. 0份、仙鹤草为 33.0份、辣寥为17.0份、磷酸二氢钾1.0份、载体选米糠为8. 45份；将上述各组分充分在
混合机(V型混合机，溧阳市汇达机械有限公司)内混匀；后超微粉碎机(ZNC-300小型超微
粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司)粉碎，并通过200目的筛网制成免疫增强剂；超 微粉碎机粉碎速度500转/分；混合机投料转速20转/分； 生长实验鲫鱼由中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场提供。试验选择健康、规
格、重量基本一致的鲫鱼，个体初均重约50g。随机分组，设有对照组与对照组，每组设3个 平行试验，每平行组50尾试验鱼，共6个网箱(规格为250cmX 150cmX 100cm)。鲫鱼驯化 30d后投喂0、3. 0%等不同剂量免疫增强剂56d，测定其生长的影响。 应激试验饲养试验结束后，选取个体基本一致的鱼进行应激试验。采用高密度 (100g/L)应激，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为20尾左右，放养于同样规格容 积为40L塑料桶中。采用流水系统，水温25± 1°C ，流速为2L/min，并保证充足的氧气，减少 人为干扰，保持安静，防止额外应激。每2h观察鱼体死亡情况，观察2d，统计死亡率，采集血 液、肝脏样品等。 攻毒实验饲养试验结束后，每个剂量组分三个平行组，每个平行组均为10尾鱼。 病原菌采用淡水鱼类细菌_嗜水性气单胞菌，将两次活化后的嗜水性气单胞菌用无菌生理 盐水稀释，使终浓度约为lX107cellS/ml。按每100g鱼重腹腔注射菌液l.Oml，后放养于 同样规格容积的水泥池网箱中(规格为100cmX100cmX100cm)，并保证充足的氧气，每天 观察鱼体死亡情况，观察7d，统计死亡率。 结果表明与对照组相比，3.0%免疫增强剂增重率显著(P<0.05)分别提高 了 10.43% ;病原菌感染鱼体7d，对照组死亡率为96.0%， 3.0%免疫增强剂鱼死亡率为 25.0% ;高密度应激ld试验后，与对照组相比，3.0X免疫增强剂显著(P<0.05)降低血 液皮质醇浓度10. 31 %，血糖水平6. 43%及丙二醛浓度9. 24%，增加了血液过氧化氢酶 9. 56% 、超氧化物歧化酶活性8. 45%以及应激蛋白HSP70浓度6. 23% ，因此，该免疫增强剂 能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，提 高鱼体抗应激能力，促进鱼体生长。
权利要求
一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征是采用以下工艺步骤，其组份配比以重量份数计取谷氨酰胺二肽为0.25～0.75份、大黄提取物为0.3～0.9份、地锦草为30.0～40.0份、仙鹤草为25.0％～33.0份、辣蓼为13.0％～17.0份、磷酸二氢钾1.0-3.0份、载体为8.45％-27.35份；将上述各组份充分混合后粉碎，制成160～200目干粉，粉碎转速为400-500转/分。
2. 根据权利要求1所述的一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述载体选用 玉米粉或麸皮或小麦粉或大豆粉或米糠或沸石粉。
3. 根据权利要求1述一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述免疫增强剂在 鱼饲料中的添加量为1% _5%。
4. 根据权利要求1述一种鱼用免疫增强剂的制备方法，其特征在于所述免疫增强剂用 于鲤鱼、鲫鱼、青鱼、草鱼或鳊鱼鱼饲料中。
全文摘要
本发明涉及一种鱼用免疫增强剂的制备方法，属于水产配合饲料技术领域。特征是取大黄提取物、地锦草、仙鹤草、辣蓼、谷氨酰胺、磷酸二氢钾等及载体；将上述各组份充分混合后粉碎，制成干粉。本发明原料来源稳定，制备简单，取材广泛，成本低廉；从鱼体免疫的机理出来，免疫增强剂既补充中草药，又补充西药谷氨酰胺二肽；从中西结合药物对鱼体的应激调理，并适当补充应激造成的Na+、K+流失来防治鱼体应激。使用时能提高鱼体免疫与抗氧化能力，提高鱼体抗高密度以及抵抗嗜水性气单胞菌感染能力，且可促进鱼体生长。
文档编号A23K1/16GK101720869SQ20091023236
公开日2010年6月9日 申请日期2009年12月7日 优先权日2009年12月7日
发明者何义进, 刘波, 周群兰, 徐跑, 戈贤平, 王庆, 王爱民, 谢骏, 高启平, 鲍倩 申请人:中国水产科学研究院淡水渔业研究中心;盐城工学院;通威股份有限公司;无锡弘康生化技术有限公司