专利名称：从实验室动物中收集精液的方法及其人工授精的方法
技术领域：
本发明涉及一种从实验室动物的附睾或睾丸中收集精液的方法及其人工授精的方法。
背景技术：
兔子是用作实验室动物的重要动物种类，主要用于各领域(如药理学、免疫学、血液学、病理学、内分泌学等)的研究或授权。在生殖毒理学方面，兔子作为有用的动物种类， 用于检测药物的致畸性。雌兔不会发生自然排卵，但通过雄兔的交配刺激或荷尔蒙或电刺激能够诱导雌兔排卵。因此根据需要，可控制交配时间和交配动物的数量。此外，由于雌兔胎儿的尺寸相对大于大鼠或小鼠的胎儿尺寸，雌兔具有对胎儿进行形态检测时，可进行更精确观察的优点(Gibson，JP，Maples，RE and Newberne, Jff (1966) :Use of rabbit in teratogenecitystudies. Toxicol and Appl Pharmacol,9 :398-408)。由于这些不同优点， 美国食品及药物管理局(FDA)、经济合作与发展组织(0E⑶)及国家安全研究所(National Institute of Safety Research)的毒性实验的指导原则也规定兔子必须用于使用非啮齿类动物的致畸性评定中。使用兔子的致畸性实验短期内需要大量的妊娠动物。目前有两种方法用于上述目的自然交配的方法，该方法中雌兔和雄兔直接交配；以及人工授精的方法，该方法中使用人工阴道收集雄兔在自然爬跨行为中射在外面的精液，并将收集的精液注入雌兔体内。然而，自然交配方法的缺点在于需要大量的时间和精力，并且需要大量的雄性动物。而使用人工阴道方法对兔子进行人工授精存在下面的问题精液收集时间由于雄兔的状态而非常不规则；精液射出和回收率很低；以及杂质(如尿液)导致失败概率很高。此外，由于人工授精方法需要大量多余的雄兔来诱发爬跨行为，因此在设备维修及养殖空间利用率方面效率很低。同时，给动物进行人工授精首先需要收集精液。通过人工刺激射精中枢引起射精从而进行精液收集，根据动物的种类可使用各种方法，例如按摩法、电刺激法、液压法、人工阴道法等。按摩法主要用于火鸡或公鸡，在使用公鸡的情况下，将公鸡的头部冲下，经在耻骨和龙骨状突起之间按摩后，推送退化的交配器底部，从而收集渗漏的精液。电刺激法用于猪、奶牛、绵羊、狗等，对骶骨部施加电刺激以刺激射精中心，从而收集精液。液压法主要用于猪，刺激猪的性欲，在阴茎出来时使之爬跨模型并用手施加压力， 从而使猪射精。人工阴道法主要用于奶牛、马、绵羊和兔子(有时用于猪)，通过使用人造阴道使在人工阴道内发生射精，该人造阴道具有与动物生殖器官类似的温度和压力条件。同时，由于输精管和附睾内的微小血管错综复杂，如果通过将导管直接插入上述输精管和附睾内收集精液，那么由此存在精液和血液混合而不能获得纯精液的问题。
相应地，本发明的发明人研究了一种新的人工授精方法和精液收集方法，该方法能够改善给实验室动物进行人工授精的传统方法所具有的问题，由此完成了与从实验室动物的附睾或睾丸中收集精液的方法及使用该精液进行人工授精方法有关的本发明，本发明在妊娠率和繁殖率方面效果极佳、具有时效性、并且由于防止了维持动物大量繁殖的成本所造成的巨大经济损失而在经济和工业方面表现优秀。
发明内容
技术问题本发明的目的在于提供一种从实验室动物的附睾或睾丸中收集精液的方法以及使用该精液进行人工授精的方法。本发明在妊娠率和繁殖率方面效果极佳、具有时效性、并且由于防止了用于维持动物大量繁殖的成本所造成的巨大经济损失而在经济和工业方面表现优秀。技术方案为了达到上述目的，本发明提供了一种去除实验室动物输精管上的外部血管并从已去除该血管的该输精管中收集精液的方法。此外，本发明提供了一种去除存在于实验室动物输精管外部的睾丸动脉和睾丸静脉并从已去除该睾丸动脉和睾丸静脉的该输精管中收集精液的方法。进一步地，本发明提供了一种将溶剂注入存在于输精管与睾丸动脉和睾丸静脉之间的膜内，然后从已去除该睾丸动脉和睾丸静脉的该输精管中收集精液的方法。该溶剂优选为生理盐水。更进一步地，本发明提供了一种去除实验室动物输精管外部血管内的血液，然后从已去除该血液的该输精管中收集精液的方法。此外，本发明提供了一种去除存在于实验室动物输精管外部的睾丸动脉和睾丸静脉内的血液，然后从已去除该血液的该睾丸动脉和睾丸静脉中收集精液的方法。进一步地，本发明提供了一种将溶剂注入存在于实验室动物输精管外部的睾丸动脉和睾丸静脉内，进行冲洗以去除血液，然后从已去除该血液的该睾丸动脉和睾丸静脉中收集精液的方法。该溶剂优选为生理盐水。此外，本发明提供了一种通过切割腹主动脉或腔静脉，去除实验室动物腹主动脉或腔静脉中的血液，然后从输精管中收集精液的方法。进一步地，本发明提供了一种去除实验室动物附睾上的外部血管，然后从已去除该血管的该附睾中收集精液的方法。此外，本发明提供了一种去除实验室动物附睾上的外部血管，然后切割已去除该血管的该附睾从而收集精液的方法。进一步地，根据本发明收集精液的方法，优选将温度维持在30 45°C时去除血液或血管，然后收集精液。去除该血液时，优选将温度维持在30 45°C。由于温度对存在于输精管和附睾内的精子活力具有很大影响，因此将用于去除血液的所有部件(如注射针、 生理盐水等)都加热到37 40°C的温度范围内，该温度与兔子的体温类似。此外，根据本发明收集精液的方法优选作为收集兔子、小鼠、大鼠、狗或豚鼠精液的方法。
进一步地，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括去除实验室动物输精管上的外部血管，然后从已去除该血管的该输精管中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。更具体地，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括将溶剂注入存在于输精管与睾丸动脉和睾丸静脉之间的膜内，使输精管与睾丸动脉和睾丸静脉分开以去除睾丸动脉和睾丸静脉，然后从已去除该睾丸动脉和睾丸静脉的该输精管中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。该溶剂优选为生理盐水。此外，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括从实验室动物输精管上的外部血管中去除血液，然后从已去除该血液的该输精管中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。该血管优选为睾丸动脉和睾丸静脉。更具体地，本发明提供了一种人工授精方法，该方法包括将溶剂注入存在于实验室动物输精管外部的睾丸动脉和睾丸静脉内， 然后从已去除该血液的该输精管中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。该溶剂优选为生理盐水。此外，优选对该收集的精液进行稀释，然后注入雌性动物体内。进一步地，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括通过切割腹主动脉或腔静脉，从实验室动物的腹主动脉或腔静脉中去除血液，然后从输精管中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。更进一步地，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括去除实验室动物附睾上的外部血管，然后从已去除该血管的该附睾中收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。该血管优选为睾丸动脉和睾丸静脉。更具体地，本发明提供了一种人工授精的方法，该方法包括去除实验室动物附睾上的外部血管，然后切割已去除该血管的该附睾以收集精液，并将该收集的精液注入雌性动物体内。该溶剂优选为生理盐水。此外，优选对该收集的精液进行稀释，然后注入雌性动物体内。此外，在本发明的人工授精方法中，优选将温度维持在30 45°C时去除血液或血管，然后收集精液。进一步地，本发明的人工授精方法优选作为兔子、小鼠、大鼠、狗或豚鼠的人工授精方法。有利效果本发明可提供一种从实验室动物的附睾或睾丸中直接收集精液的方法以及使用该精液进行人工授精的方法，本发明在妊娠率和繁殖率方面效果极佳、具有时效性、并且由于防止了用于维持动物大量繁殖的成本所造成的巨大经济损失而在经济和工业方面表现优秀。
图1中的㈧为去除外部血管之前的输精管，⑶为已去除外部血管的输精管；图2中的㈧为去除外部血管内的血液之前的附睾和输精管，⑶为已去除外部血管内的血液的附睾和输精管。
具体实施例方式以下，为理解本发明而对优选的工作实例进行描述。然而，提供下面的工作实例仅仅是使得本发明更容易理解，而本发明的保护范围不受下面工作实例的限制。
实例1 直接从兔子的输精管中收集精液(1)温度维持在30 45°C时，将注射针刺入存在于雄兔的输精管外壁与输精管动脉和输精管静脉之间的膜内，然后注入生理盐水以将输精管与输精管动脉和输精管静脉分开，从而去除血管。将导管插入其中已去除该血管的输精管内，通过灌注生理盐水来收集精液。(2)另一不同的方法中，温度维持在30 45°C时，将注射针刺入雄兔输精管外壁中的输精管动脉和输精管静脉内，然后通过灌注生理盐水来冲洗血液。将导管插入已去除该血液的输精管内，通过灌注生理盐水来收集精液。(3)另一不同的方法中，温度维持在30 45°C时，切割雄兔的腹主动脉或腔静脉， 然后去除血液。将导管插入已去除该血液的输精管内，通过灌注生理盐水来收集精液。实例2 直接从兔子的附睾中收集精液温度维持在30 45°C时，去除雄兔附睾的血管，切割已去除该血管的该附睾，从而收集精液。通过实例1或实例2的上述方法，每只雄兔收集了 20毫升精液。通过上述方法， 可获得高纯度的强活力精子，其中精子和生理盐水混合在一起。对比实例1 通过人工授精方法收集兔子的精液通过在人工阴道内部的橡胶管和外部的塑料管之间填充水来完成人工阴道的组装。之后，人工阴道完全地漂浮在50°C的恒温水箱内，直到人工阴道内的水温变为45 50 "C。将两只雄兔放入饲养箱，该饲养箱的上部是敞开的。当这两只兔子开始交配行为时，取出漂浮在恒温水箱内的人工阴道，在其底部固定精液收集管，然后将人工阴道放在进行交配行为的雄兔的后腿之间，收集精液。通过这种方法，收集到0.5毫升的精液。该精液量为上述实例1中收集到的精液量的1/40。实验实例1 对比按照不同精液收集方法收集到的精液性能使用精子分析仪(Hamilton-thron，美国)比较并分析实例1或实例2及对比实例 1中的精子，该精子分析仪用于比较精子活力、精子数量(浓度)及其他形态异常。结果显示在表1中。表 表1表
权利要求
1.一种收集精液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤a)去除实验室动物输精管上的外部血管；以及b)从已去除该血管的该输精管中收集精液。
2.根据权利要求1所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤a)包括去除包围所述输精管的睾丸动脉和睾丸静脉。
3.根据权利要求2所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤a)包括将溶剂注入存在于所述输精管与所述睾丸动脉和睾丸静脉之间的膜内。
4.根据权利要求3所述的收集精液的方法，其特征在于，所述溶剂为生理盐水。
5.一种收集精液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤a)去除实验室动物输精管上的外部血管内的血液；以及b)从已去除该血液的该输精管中收集精液。
6.根据权利要求5所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤a)包括去除包围输精管的输精管动脉和输精管静脉内的血液。
7.根据权利要求6所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤a)包括将溶剂注入睾丸动脉和睾丸静脉内。
8.根据权利要求7所述的收集精液的方法，其特征在于，所述溶剂为生理盐水。
9.一种收集精液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤a)通过切割腹主动脉或腔静脉，去除实验室动物腹主动脉或腔静脉内的血液；以及b)从输精管中收集精液。
10.一种收集精液的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤a)去除实验室动物附睾上的外部血管；以及b)从已去除该血管的该附睾中收集精液。
11.根据权利要求10所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤b)包括切割所述附睾并收集精液。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的收集精液的方法，其特征在于，所述步骤a)和所述步骤b)将温度维持在30 45°C。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的收集精液的方法，其特征在于，所述实验室动物为选自由兔子、小鼠、大鼠、狗和豚鼠所组成的组中的任一种。
14.一种人工授精的方法，其特征在于，该方法包括将通过权利要求1-11中任一项所述的方法收集的精液注入雌性动物体内。
15.根据权利要求14所述的人工授精的方法，其特征在于，对通过权利要求1-11中任一项所述的方法收集的所述精液进行稀释，然后注入雌性动物体内。
16.一种人工授精的方法，其特征在于，该方法包括将通过权利要求12中所述的方法收集的所述精液注入雌性动物体内。
17.根据权利要求14所述的人工授精的方法，其特征在于，对通过权利要求12中所述的方法收集的所述精液进行稀释，然后注入雌性动物体内。
18.—种人工授精的方法，其特征在于，该方法包括将通过权利要求13中所述的方法收集的所述精液注入雌性动物体内。
19.根据权利要求18所述的人工授精的方法，其特征在于，对通过权利要求12中所述的方法收集的所述精液进行稀释，然后注入雌性动物体内。
全文摘要
本发明涉及一种从实验室动物的附睾或睾丸中收集精液的方法及其人工授精的方法。本发明涉及一种在使用人工受精的动物繁殖领域的新的适用方法。因为本发明解决了实验室动物进行人工授精的传统方法所具有的问题，本发明在妊娠率和繁殖率方面效果极佳、具有时效性、并且由于防止了用于维持动物大量繁殖的成本所造成的巨大经济损失而在经济和工业方面表现优越。
文档编号A61D19/02GK102421389SQ200980159231
公开日2012年4月18日 申请日期2009年10月16日 优先权日2009年5月22日
发明者洪正燮 申请人:韩国化学融合试验研究院