专利名称：南天竹火焰的组培方法
技术领域：
本发明涉及一种植株的组织培养方法，尤其是涉及南天竹‘火焰’的组织培养方法。
背景技术：
南天竹火焰为常绿小灌木，喜温暖多湿及通风良好的半阴环境。耐寒，耐旱，能耐微碱性土壤，适宜含腐殖质的沙壤土生长。南天竹火焰株型紧凑，叶较普通南天竹较宽，强光下叶鲜红色，尤其是隆冬季节，叶色十分鲜艳。园林中多丛植或孤植于花境、庭院，又可做疏林地被植物，是良好的花镜与庭院材料，市场需求量大。但是，该植物为国外引进的品种引种，组培报道尚未见，因此数量较少，其扦插、分株较慢，扦插成活率低，导致种苗供应受限制。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种移栽成活率可高达95%、保持母体现状的南天竹‘火焰’的组织培养方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现南天竹火焰的组培方法，其特征在于，该方法通过对摘取的南天竹火焰新萌发的小芽进行无菌处理后，再依次接种于小芽诱导培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基及生根培养基中进行培养并置于温室中炼苗后，即可移栽室外，得到南天竹‘火焰’植株。该方法具体包括以下步骤(1)无菌材料的获得摘取南天竹火焰新萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用75wt%的乙醇浸泡20-40s及lwt%。升汞溶液浸泡10-20min后，利用无菌水冲洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接种于pH值为5. 5-6. 0的小芽诱导培养基上，控制培养温度为 24-260C，光照为70-90 μ mol/ms，进行芽诱导培养；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，继续培养培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于PH值为5. 5-6. 0的不定芽增殖培养基上，控制培养温度为M_26°C，光照为70-90ymol/mS，进行增殖培养；C3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于pH 值为5. 5-6. 0的壮苗培养基中，控制培养温度为24- °C，光照为70-90μ mol/ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，将其接种于pH值为5. 5-6. 0的生根培养基中，控制培养温度为24- °C，光照为70-90 μ mol/ms，进行生根培养，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养30-50天，根系长至l_2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，即可获得产品植株。所述的小芽诱导培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为 MS+6-BA 1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+IBAl. 0 5. Omg/L。所述小芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L。所述的不定芽增殖培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为 1/2MS+6-BA1. 3. Omg/L+NAAO. 1 0. 3mg/L+IBA0. 1 0. 5mg/L。所述不定芽增殖培养基的营养成分优选1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+IBA 0. 3mg/L。所述的壮苗培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为 MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 0. 2mg/L+IBA0. 3 0. 5mg/L。所述壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBA0. 3mg/L0所述的生根培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为1/2MS+NAA 0. 1 1. 0mg/L+IBA3. 0 8. 0mg/L。所述生根培养基的营养成分优选1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L。与现有技术相比，本发明的移栽成活率可高达95 %，大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1南天竹‘火焰’的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得摘取南天竹火焰新萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用75wt%的乙醇浸泡20s及lwt%。升汞溶液浸泡IOmin后，利用无菌水冲洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接种于小芽诱导培养基，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L+IBAl. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好，继续培养培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，该不定芽增殖培养基的成分为1/2MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L+IBAO. lmg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗培养基中，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2cm，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+IBA 0. 3mg/L ；(4)生根培养取高度为2cm的小植株，将其接种于生根培养基中，该生根培养基的成分为 1/2MS+NAA0. lmg/L+IBA3. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养30天，根系长至Icm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，即可获得产品植株。上述的所有培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 24°C，光照为 70ymol/ms, pH 值为 5. 5。实施例2南天竹‘火焰’的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得摘取南天竹火焰新萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用75wt%的乙醇浸泡40s及Iwt%。升汞溶液浸泡20min后，利用无菌水冲洗6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接种于小芽诱导培养基，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L+IBA3. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好，继续培养培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，该不定芽增殖培养基的成分为1/2MS+6-BA 3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L+IBA0. 5mg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗培养基中，不定芽迅速伸长，30天后可以长到3cm，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L+IBA0. 5mg/L ；(4)生根培养取高度为3cm的小植株，将其接种于生根培养基中，该生根培养基的成分为 1/2MS+NAA1. 0mg/L+IBA8. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至6cm ；(5)炼苗与移栽 继续生根培养50天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，即可获得产品植株。上述的所有培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 26°C，光照为 90ymol/ms, pH 值为 6. O。实施例3
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南天竹‘火焰’的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得摘取南天竹火焰新萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用75wt%的乙醇浸泡30s及Iwt%。升汞溶液浸泡15min后，利用无菌水冲洗5次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接种于小芽诱导培养基，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L+IBA5. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，继基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好，继续培养培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上，该不定芽增殖培养基的成分为1/2MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L+IBA 0. 3mg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗培养基中，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBAO. 3mg/L,不定芽迅速伸长，30天后可以长到3cm;(4)生根培养取高度为3cm的小植株，将其接种于生根培养基中，该生根培养基的成分为 1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至6cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养40天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，即可获得产品植株。上述的所有培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 25°C，光照为 80ymol/ms, pH 值为 5. 8。
权利要求
1.南天竹火焰的组培方法，其特征在于，该方法通过对摘取的南天竹火焰新萌发的小芽进行无菌处理后，再依次接种于小芽诱导培养基、不定芽增殖培养基、壮苗培养基及生根培养基中进行培养并置于温室中炼苗后，即可移栽室外，得到南天竹‘火焰’植株。
2.根据权利要求1所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤(1)无菌材料的获得摘取南天竹火焰新萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用75wt%的乙醇浸泡20-40s及lwt%。升汞溶液浸泡10-20min后，利用无菌水冲洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接种于pH值为5. 5-6. 0的小芽诱导培养基上，控制培养温度为 24-260C，光照为70-90 μ mol/ms，进行芽诱导培养；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，继续培养培养1个月，切下带芽愈伤组织接种于PH值为5. 5-6. 0的不定芽增殖培养基上，控制培养温度为M_26°C，光照为70-90ymol/mS，进行增殖培养；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽分成小丛或单芽并接种于PH值为 5. 5-6.0的壮苗培养基中，控制培养温度为M-26°C，光照为70-90ymol/mS，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，将其接种于pH值为5. 5-6. 0的生根培养基中，控制培养温度为24- °C，光照为70-90 μ mol/ms，进行生根培养，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至4-6cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养30-50天，根系长至l_2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗7天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，即可获得产品植株。
3.根据权利要求1所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为MS+6-BA1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+IBAl. 0 5. Omg/L。
4.根据权利要求3所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述小芽诱导培养基的营养成分优选 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L。
5.根据权利要求1所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为1/2MS+6-BA1. 0 3. Omg/ L+NAA0. 1 0. 3mg/L+IBA0. 1 0. 5mg/L。
6.根据权利要求5所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述不定芽增殖培养基的营养成分优选 1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+IBA0. 3mg/L。
7.根据权利要求1所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 0. 2mg/ L+1ΒΑ0. 3 0. 5mg/L。
8.根据权利要求7所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述壮苗培养基的营养成分优选 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBAO. 3mg/L。
9.根据权利要求1所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述的生根培养基的基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，营养成分为1/2MS+NAA0. 1 1. 0mg/L+IBA3. 0 8. 0mg/Lo
10.根据权利要求9所述的南天竹火焰的组培方法，其特征在于，所述生根培养基的营养成分优选 1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L。
全文摘要
本发明涉及南天竹火焰的组培方法，该方法以南天竹火焰新萌发的小芽为基础，步骤包括无菌材料的获得、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养及炼苗与移栽，最终得到性状完好的南天竹火焰植株。与现有技术相比，本发明的移栽成活率可高达95％，大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状。
文档编号A01H4/00GK102273403SQ201010195249
公开日2011年12月14日 申请日期2010年6月8日 优先权日2010年6月8日
发明者沈勤, 陈建华, 黄建荣 申请人:上海上房园艺有限公司