专利名称：铁皮石斛自然光快繁育苗方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种珍稀濒危中药材铁皮石斛自然光快繁育 苗的方法。
背景技术：
铁皮石斛是《中国药典》收载的主要品种之一，药用价值高、保健功能强，主要成分 为多糖、石斛碱、氨基酸和微量元素等，具有滋阴清热、益胃生津、清嗓明目、增强人体免疫 力、抗衰老、抗肿瘤等功效。多年来，由于产区药农毁灭性采挖，使野生铁皮石斛资源濒临灭 绝，国家已将铁皮石斛列为重点保护的珍稀濒危物种，并鼓励人工大面积栽培铁皮石斛，变 野生为家种，以保障铁皮石斛资源的可持续性利用和发展。本发明运用现代生物组培繁育技术，大胆突破传统利用日光灯管提供光照培养 苗的方法，在国内首家采用自然光快繁育苗，通过合理配置遮阳系统，提供更为适宜的光 照度来培养苗，取得了良好成效。一颗铁皮石斛蒴果通过5 6月的组培培养可快繁培 育出12万株以上石斛组培苗，炼苗移栽成活率达到98%以上。而目前国内很多科研单 位和公司均采用日光灯管提供光照来培育苗，比如“一种铁皮石斛快繁的组培方法”(申 请号2008101108704. 5)、“一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法”(申请号 200710066480. 1)、“一种应用铁皮石斛激素自养型茎尖培养生产药材的方法”(申请号 02136925. 9)、“一种铁皮石斛的培育方法”(申请号200410017380. 6)等，不但浪费消耗了 能源，增加了组培生产成本，而且培养出的苗，明显光照不够，植株较弱。本发明的目的在于利用现代生物技术，充分利用自然光来培养苗，提高了铁皮石 斛种苗的扩繁速度和生产量，节约了能源，降低了组培生产成本，提高了组培苗的炼苗移栽 成活率，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。
发明内容
为了实现这一目的，发明人经过试验，成功完成了可用于铁皮石斛种苗组培生产 中不同阶段的自然光照度和培养基配方的控制使用，对自然光遮荫度和培养基配方进行了 试验和完善，特别是对不同阶段组培苗的适宜光照控制进行了多次研究和试验，获得了独 创的培养方法，取得了良好效果，解决了铁皮石斛组培苗生产过程中能耗高、苗嫩弱的问 题，完成了铁皮石斛自然光快繁育苗生产技术的发明研究。铁皮石斛自然光快繁育苗方法分为三个阶段1、将成熟的铁皮蒴果或储存的种子经过消毒处理程序，播入1/2MS基本培养基+ 土豆汁15% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22 25°C。通过 双层遮阳控制系统，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小时，约15 20天种 胚膨大、萌发形成绿色的原球茎；2、将原球茎转入MS基本培养基+BA (6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培
3养。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小时，约1 1. 5月可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，小苗高度1 2cm。将小苗转入同样的培养基和同样的光照条件，继续培养1.5月，将小苗培养成中苗，苗 高3 4cm左右；3、将中苗转入MS基本培养基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+琼脂6g/L的壮苗培养基。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小时，约1.5个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶炼苗、移栽。上述的铁皮石斛自然光快繁育苗方法中，所提到的对于铁皮石斛各生长过程光照 度控制和培养基的配方是⑴种胚诱导提供800 15001X的弱光和1/2MS基本培养基 + 土豆汁15% (V/V) +琼脂5g/L的培养基(2)原球茎增殖与分化提供1500 25001x的 较强光和MS基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA(a -萘乙酸)0. 01
0.5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L的培养基(3)壮苗生根提供2000 40001x的强 光和MS基本培养基+NAA(a-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/V) +土豆汁10% (V/V)+琼脂6g/L的培养基。采用本发明所提供的铁皮石斛自然光快繁育苗方法，可有效解决铁皮石斛种苗组 培生产中高能耗、高成本和苗弱的问题。通过自然光培养的阳光苗，植株强壮、细胞质密度 高，叶片厚实，植株移栽后不脱水、不黄叶，极大提高了组培苗的移栽成活率；另外由于光照 加强，极大刺激了植株酶的活性和光合作用，组培苗生长速度也较传统的日光灯管培养法 有所提高。采用本发明方法，从铁皮石斛种子到培养成大苗，只需5 6个月，大大缩短了 种苗组培时间和成本，与传统种苗扩繁相比，种苗的扩繁速度和生产量都有了较大的提高。本发明研究结果对解决铁皮石斛种苗组培生产中存在的高能耗、高成本、种苗嫩 弱等问题，起到了关键性的作用，对推动铁皮石斛产业化、规模化发展，提供了科学依据和 有力保证。本发明具有良好的社会效益、经济效益和生态效益。
具体实施例方式实施例1 铁皮石斛自然光快繁育苗方法将收集的铁皮石斛种源在每年4 5月开花时进行异花授粉，在当年的10月底蒴 果成熟后进行采收，放在干净的培养皿里，放于冰箱内保存。a、将成熟的铁皮蒴果或储存的种子经过消毒处理程序，播入1/2MS基本培养基+ 土豆汁15% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22 25°C。通过 双层遮阳控制系统，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小时，约25 30天种 胚膨大、萌发形成绿色的原球茎；b、将原球茎转入MS基本培养基+BA (6-苄基腺嘌呤)0. 01 0. 5mg/L+NAA ( α -萘 乙酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培 养。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小时，约1
1.5月可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，小苗高度1 2cm。将小苗转入同样的培养基和同样的光照条件，继续培养1.5月，将小苗培养成中苗，苗 高3 4cm左右；
C、将中苗转入MS基本培养基+ΝΑΑ(α-萘乙酸)0.01 0. 5mg/L+香蕉汁15% (V/ V) +土豆汁10% (V/V)+琼脂6g/L的壮苗培养基。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小时，约1.5个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶炼苗、移栽。
权利要求
1. 一种铁皮石斛自然光快繁育苗方法，其特征在于该方法降低能耗、降低组培成本，可 大量快速培育出合格的铁皮石斛试管苗，包括下列步骤完成(1)将成熟的铁皮蒴果或储存的种子经过消毒处理程序，播入1/2MS基本培养基+土豆 汁15% (V/V) +琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22 25°C。通过双层 遮阳控制系统，光照度控制在800 15001x，每日光照10 12小时，约15 20天种胚膨 大、萌发形成绿色的原球茎；(2)将原球茎转入MS基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.01 0. 5mg/L+NAA( α -萘乙 酸)0. 01 0. 5mg/L+ 土豆汁20% (V/V)+琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培 养。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在1500 25001x，每日光照10 12小时，约1 1. 5月可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，小苗高度1 2cm。将小苗转入同样的培养基和同样的光照条件，继续培养1.5月，将小苗培养成中苗，苗 高3 4cm左右；(3)将中苗转入MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01 0.5mg/L+香蕉汁15%(V/ V) +土豆汁10% (V/V)+琼脂6g/L的壮苗培养基。通过双层遮阳控制系统，光照度控制在 2000 40001x，每日光照10 12小时，约1.5个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出 瓶炼苗、移栽。
全文摘要
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种珍稀濒危中药材铁皮石斛自然光快繁育苗方法。本发明的目的在于利用现代生物技术，大胆突破传统利用日光灯管提供光照培养苗的方法，在国内首家采用自然光快繁育苗，通过合理配置遮阳系统，提供更为适宜的光照度来培养苗，取得了良好成效，一颗铁皮石斛蒴果通过5～6月的组培培养可快繁培育出12万株以上石斛组培苗。本发明方法提高了铁皮石斛种苗的扩繁速度和生产量，节约了能源，降低了组培生产成本，提高了组培苗的炼苗移栽成活率，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。
文档编号A01H4/00GK102119655SQ20101024233
公开日2011年7月13日 申请日期2010年7月29日 优先权日2010年7月29日
发明者张世定, 边云哲 申请人:云南红土生源药用生物科技开发有限公司