专利名称：用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法
技术领域：
本发明属于微生物腐熟剂的制备，特别是指一种用于畜禽粪便发酵生产生物有机 肥的微生物腐熟剂的制备方法。
背景技术：
随着我国畜牧养殖业的迅速发展，大量畜禽废弃物也急剧增加，全国每年约有27 亿吨畜禽粪便产生，畜禽粪便富含作物所需的营养元素，但同时也含有大量的重金属、害虫 卵等多种有害物质，因而不能被直接利用，堆肥化处理是普遍采用的无害化处理方法，堆肥 的稳定性和腐熟度是评价堆肥质量和安全利用的重要依据，而目前尚无较为有效的专用堆 肥腐熟剂，导致在堆肥过程中腐熟速度较慢，影响了堆肥腐熟的质量和速度。
发明内容
本发明的目的在于公开了一种用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟 剂的制备方法。本发明的整体技术构思是用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法，包括如下工艺步 骤Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854、分别接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中进行发酵；将光 合菌_沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接种于含有营养物质的培 养基中进行发酵；B、将步骤A中制备的发酵液按啤酒酵母发酵液嗜酸乳杆菌发酵液沼泽红假 单胞菌发酵液的体积比为50 25 25的比例混合，用米糠和麸皮的混合物为载体，吸附 混合后的发酵液，制作成固体腐熟剂。本发明的具体技术构思还有载体优选的实施方式是，所述的步骤B中米糠与麸皮按照质量比为7 3的比例 进行混配。步骤A中的啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的发酵包括如下步 骤将啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414经过扩大培养后，将啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。所述步骤A中的嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的发酵包括如 下步骤将嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分别经过扩大培养后，将嗜 酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854种子液接种于培养液进行厌氧发酵。
所述步骤A中的光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustrisASl. 2349 的发酵包括如下步骤将光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用光照培 养法经过扩大培养后，按照体积比为种子液培养液=8% -10%的接种量接入发酵罐中 的培养液，进行微通风暗培养发酵。所述步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的扩大培养及发酵 包括如下工艺步骤I、由斜面菌种制备克氏瓶菌种将斜面菌种接种到克氏瓶培养基中制备克氏瓶菌种，30°C培养24小时，斜面培养 基及克氏瓶培养基包括如下质量份的组分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2_3琼脂1. 8-2. 3pH = 6. O ；II、将克氏瓶菌种接种到种子培养基中扩培制备成一级种子培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa，接种8小时后开启搅拌，搅拌转速180 转/分钟，按体积比的通风量0_6小时为1 0. 2，6小时后为1 0.4;培养20小时后，镜 检菌体处于对数期生长，含菌量达到要求，无杂菌，即可转种；III、将一级种子接种到种子培养基中经过扩大培养制备成二级种子培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa，接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为 960转/分钟，按体积比的通风量0-6小时为1 0.48，6-12小时为1 0. 6，12小时后为 1 0.7;培养20小时后，镜检菌体处于对数期生长，含菌量达到工艺要求，无杂菌，即可转 种；IV、将二级种子转接入发酵罐内的培养基中发酵培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa，接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为 730转/分钟，按体积比的通风量0-6小时为1 0.48，6-12小时为1 0. 6，12小时后为 1 0.7;培养24-30小时，镜检菌体生长结束，含菌量达到1亿/毫升以上，无杂菌，PH = 5. O 士，即可放罐；所述的步骤II、III、IV中的种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组 分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸镁0. 1-0. 15 乙酸钠 0. 2-0. 25 硫酸铵 0. 4-0. 6三氯化铁0. 0002-0. 0005 磷酸二氢钾 0. 15-0. 2硫酸锌0. 0005-0. 0007 消泡剂 0. 1-0. 3 自然 pH种子罐、发酵罐的培养基采用按体积比为55%装量。所述步骤A中嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的扩大培养及发 酵包括如下工艺步骤I、由斜面菌种制备摇瓶种子将斜面菌种接种到摇瓶培养基中制备摇瓶种子，其中斜面菌种的培养条件为温 度37-40°C，培养周期1-2天；摇瓶种子的培养条件为采用IOOOml三角瓶中装300ml培养 基进行摇床培养，摇床转速为160-180rpm，温度为37_40°C，培养周期为24小时；
II、将摇瓶种子接种到种子培养基中扩培制备成种子液培养条件为采用体积比为70%装量，温度37-40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6. 0，压力为0. 05Mpa，搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量 达到10亿/毫升以上，无杂菌，即可转罐进入下一级培养；III、将种子液接种到发酵培养基中发酵采用体积比为70%装量，温度37-40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6.0，压力为 0. 05Mpa，搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量达到10亿/ 毫升以上，无杂菌，即终止培养；所述的步骤I、II、III、IV中的斜面培养基、摇瓶培养基及发酵培养基包括如下单 位质量份的组分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7葡萄糖或蔗糖0. 5-0. 8 吐温-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3Na 3HAC200. 5-0. 6 柠檬酸三钠 0. 2-0. 25 MgS047H20 0. 02-0. 03MnSO4 · 4H20 0. 003-0· 005 琼脂 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。所述步骤A中光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349 的扩大及发酵培养包括如下工艺步骤I、由斜面菌种扩大培养制备种子液将斜面菌种接种到种子培养基中制备种子液，培养条件为采用1000毫升三角瓶 中装200ml培养基光照培养，光照强度3000-4000勒克斯，静止培养7天；II、将种子液接种到发酵培养基中发酵采用体积比为80%装量，按照体积比为8-10%的接种量接种，按体积比为1 0.2 的比例进行微通风暗培养发酵，发酵过程中定期搅拌，搅拌转速为960转/分钟，培养温度 28-36 0C，培养周期10-15天。所述的步骤I、II中的斜面培养基、种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量 份的组分乙酸钠0. 2-2. 5 硫酸胺 0. 1-0. 15 磷酸二氢钾 0. 03-0. 05磷酸氢二钾0. 04-0. 06 硫酸镁 0. 02-0. 03 氯化钠 0. 008-0· 01。利用本发明所制备的产品是这样使用的腐熟剂稍经脱水后与畜禽粪便等有机肥原料均勻混合，即可进行堆肥腐熟发酵。 固体腐熟剂在有机原料中的接种剂量为原料的0. 5% (质量比)。在堆肥过程中使用利用本发明所制备的产品的实验结果畜禽粪便经收集、脱水处理后，调整C/N，调节水分至55%，加入微生物腐熟剂，堆 积成1. 5米宽、1米高、根据需要确定长度的梯形长条堆，进行堆积发酵。从第二天开始每天 定时测量料温，3-5天后料温达到55-60°C以上，以后每隔三天翻堆一次，至14天，再堆积一 周后，翻堆，测量相关数据，判定发酵结果。堆肥过程中腐熟度评价的指标很多，堆肥原料不同指标也不一样，且不能根据单 一指标来衡量，因此，堆肥腐熟度评价方法是以堆肥现场实用为基础，对堆肥效果、施用安 全性进行综合评价并与生物方法有效地结合，这样可适用于一般小型常规化验室操作。在本发明中，主要采用了比较直观的物理参数如温度、颜色、气味以及腐熟度生物评价指标种子发芽指数几个重要指标来判定，同时用定性和定量的理化分析做验证。在加入定量微生物腐熟剂的堆肥发酵过程中，和传统堆肥相比，前期堆肥温度达 到最高值的时间平均提前1. 5-2天，高温维持时间平均长4-5. 5天，种子发芽指数GI14天 全部达到0.5以上，20天时最高可以达到0. 87。本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于选择了啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae ASl. 2414)、嗜酸乳杆菌 (Saccharomyces cerevisiae ASL 1854)、光合菌-沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349)三种具有不同功效和多种生物学功能的微生物菌株作为微生物腐熟 剂，通过生物工程发酵生产出高活菌含量及有效代谢产物含量均比较丰富的腐熟剂供堆肥 腐熟使用。经实验证明，在堆肥过程中使用微生物腐熟剂可以达到减少堆肥时间，提高堆肥 腐熟度和生产效率的目的。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保 护范围以权利要求限定的内容为准。实施例1用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法，包括如下工艺步 骤Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cere visiae ASl. 1854、分别接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中进行发酵；将光 合菌_沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接种于含有营养物质的培 养基中进行发酵；B、将步骤A中制备的发酵液按啤酒酵母发酵液嗜酸乳杆菌发酵液沼泽红假 单胞菌的发酵液的体积比为50 25 25的比例混合，用米糠和麸皮的混合物为载体，吸 附混合后的发酵液，制作成固体腐熟剂。所述的步骤B中米糠与麸皮按照质量比为7 3的比例进行混配。所述步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414发酵包括如下步 骤将啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414经过扩大培养后，将啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。步骤A中的嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854发酵包括如下步 骤将嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分别经过扩大培养后，将嗜 酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854种子液接种于培养液进行厌氧发酵。步骤A中的光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的 发酵包括如下步骤将光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用暗培养 法经过扩大培养后，按照体积比为8% -10%的接种量接入发酵罐中的培养液，进行微通风 暗培养发酵。
步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的扩大培养及发酵包括 如下工艺步骤I、由斜面菌种制备克氏瓶菌种将斜面菌种接种到克氏瓶培养基中制备克氏瓶菌种，30°C培养24小时。斜面培养 基及克氏瓶培养基包括如下质量份的组分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2_3琼脂1. 8-2. 3 pH = 6. 0 ；II、将克氏瓶菌种接种到种子培养基中扩培制备成一级种子培养条件为温度30_31°C，压力0. 05Mpa。接种8小时后开启搅拌，搅拌转速180 转/分钟，按体积比的通风量0_6小时为1 0. 2，6小时后为1 0.4 ；培养20小时后，镜 检菌体处于对数期生长，含菌量达到要求，无杂菌，即可转种；III、将一级种子接种到种子培养基中经过扩大培养制备成二级种子培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa。接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为 960转/分钟，按体积比的通风量0-6小时为1 0.48，6-12小时为1 0. 6，12小时后为 1 0.7;培养20小时后，镜检菌体处于对数期生长，含菌量达到工艺要求，无杂菌，即可转 种；IV、将二级种子转接入发酵罐内的培养基中发酵培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa。接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为 730转/分钟，按体积比的通风量0-6小时为1 0.48，6-12小时为1 0. 6，12小时后为 1 0.7;培养24-30小时，镜检菌体生长结束，含菌量达到1亿/毫升以上，无杂菌，PH = 5.0士，即可放罐；上述的步骤II、III、IV中的种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组 分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸镁0. 1-0. 15 乙酸钠 0. 2-0. 25 硫酸铵 0. 4-0. 6三氯化铁0. 0002-0. 0005 磷酸二氢钾 0. 15-0. 2硫酸锌0. 0005-0. 0007 消泡剂 0. 1-0. 3 自然 pH种子罐、发酵罐的培养基采用按体积比为55%装量。步骤A中嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的扩大培养及发酵包 括如下工艺步骤I、由斜面菌种制备摇瓶种子将斜面菌种接种到摇瓶培养基中制备摇瓶种子，其中斜面菌种的培养条件为温 度37-40°C，培养周期1-2天；摇瓶种子的培养条件为采用IOOOml三角瓶中装300ml培养 基进行摇床培养，摇床转速为160-180rpm，温度为37_40°C，培养周期为24小时；II、将摇瓶种子接种到种子培养基中扩培制备成种子液培养条件为采用体积比为70%装量，温度37_40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6. 0，压力为0. 05Mpa，搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量 达到10亿/毫升以上，无杂菌，即可转罐进入下一级培养；III、将种子液接种到发酵培养基中发酵
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采用体积比为70%装量，温度37_40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6.0，压力为 0. 05Mpa，搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量达到10亿/ 毫升以上，无杂菌，即终止培养；所述的步骤I、II、III、IV中的斜面培养基、摇瓶培养基及发酵培养基包括如下单 位质量份的组分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7葡萄糖或蔗糖0. 5-0. 8 吐温-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3Na 3HAC20 0. 5-0. 6 柠檬酸三钠 0. 2-0. 25 MgS047H20 0. 02-0. 03MnSO4 · 4H 20 0. 003-0· 005 琼月旨 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。步骤A中光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的扩 大及发酵培养包括如下工艺步骤I、由斜面菌种扩大培养制备种子液将斜面菌种接种到种子培养基中制备种子液，培养条件为采用1000毫升三角瓶 中装200ml培养基光照培养，光照强度3000-4000勒克斯，静止培养7天；II、将种子液接种到发酵培养基中发酵采用体积比为80%装量，按照体积比为8-10%的接种量接种，按体积比为1 0.2 的比例进行微通风暗培养发酵，发酵过程中定期搅拌，搅拌转速为960转/分钟，培养温度 28-36 0C，培养周期10-15天。所述的步骤I、II中的斜面培养基、种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量 份的组分乙酸钠0. 2-2. 5 硫酸胺 0. 1-0. 15 磷酸二氢钾 0. 03-0. 05磷酸氢二钾0. 04-0. 06 硫酸镁 0. 02-0. 03 氯化钠 0. 008-0· 01。实施例2用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法，包括如下工艺步 骤Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 Jf^Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854、分别接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中进行发酵；将光 合菌_沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349接种于含有营养物质的培 养基中进行发酵；B、将步骤A中制备的发酵液按啤酒酵母发酵液嗜酸乳杆菌发酵液沼泽红假 单胞菌的发酵液的体积比为50 25 25的比例混合，用米糠和麸皮的混合物为载体，吸 附混合后的发酵液，制作成固体腐熟剂。所述的步骤B中米糠与麸皮按照质量比为7 3的比例进行混配。所述步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414发酵包括如下步 骤将啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414经过扩大培养后，将啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。步骤A中的嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854发酵包括如下步 骤
将嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分别经过扩大培养后，将嗜 酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854种子液接种于培养液进行厌氧发酵。步骤A中的光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的 发酵包括如下步骤将光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349采用光照培 养法经过扩大培养后，按照体积比为8-10 %的接种量接入发酵罐中的培养液，进行微通风 暗培养发酵。步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414的扩大培养及发酵中斜 面培养基及克氏瓶培养基包括如下质量份的组分酵母膏或酵母粉1. 2蛋白胨2. 5葡萄糖或蔗糖3琼脂2. 3 pH = 6.0;种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组分葡萄糖或蔗糖3蛋白胨2. 5酵母膏或酵母粉1. 2硫酸镁0. 15乙酸钠0. 25硫酸铵0. 6三氯化铁0. 0005磷酸二氢钾0. 2硫酸锌-0.0007消泡剂0.3自然pH。步骤A中嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854的扩大培养及发酵中 的斜面培养基、摇瓶培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组分蛋白胨1.2牛肉膏1.2酵母膏或酵母粉0.7葡萄糖或蔗糖0. 8 吐温-800. 15 K2HPO4O. 3Na3HAC2O 0. 6 柠檬酸三钠 0. 25 MgS047H20 0. 03MnSO4 · 4Η200· 005 琼脂 2.2 pH = 7. O。步骤A中光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的扩 大及发酵培养的斜面培养基、种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组分乙酸钠2. 5硫酸胺0. 15磷酸二氢钾0. 05磷酸氢二钾0. 06硫酸镁0. 03氯化钠0. 01。本实施例中其余反应条件同实施例1。
权利要求
用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下工艺步骤A、将啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae AS1.2414、嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus AS1.1854、分别接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中进行发酵；将光合菌 沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris AS1.2349接种于含有营养物质的培养基中进行发酵；B、将步骤A中制备的发酵液按啤酒酵母发酵液∶嗜酸乳杆菌发酵液∶沼泽红假单胞菌发酵液的体积比为50∶25∶25的比例混合，用米糠和麸皮的混合物为载体，吸附混合后的发酵液，制作成固体腐熟剂。
2.根据权利要求1所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述的步骤B中米糠与麸皮按照质量比为7 3的比例进行混配。
3.根据权利要求1所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中的啤酒酵母Saccharomyces cerev Isiae ASl. 2414的发酵 包括如下步骤将啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414经过扩大培养后，将啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae ASl. 2414 禾中〒 禾中i!H#。
4.根据权利要求1所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中的嗜酸乳杆菌Saccharomycescerevisiae ASl. 1854的发酵 包括如下步骤将嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854分别经过扩大培养后，将嗜酸乳 杆菌Saccharomyces cerevisiae ASl. 1854种子液接种于培养液进行厌氧发酵。
5.根据权利要求1所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中的光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的发酵包括如下步骤将光合菌_沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonaspalustris ASl. 2349采用光照培养法 经过扩大培养后，按照体积比为种子液培养液=8% -10%的接种量接入发酵罐中的培 养液，进行微通风暗培养发酵。
6.根据权利要求3所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中啤酒酵母Saccharomyces cerev Isiae ASl. 2414的扩大培 养及发酵包括如下工艺步骤I、由斜面菌种制备克氏瓶菌种将斜面菌种接种到克氏瓶培养基中制备克氏瓶菌种，30°C培养24小时，斜面培养基及 克氏瓶培养基包括如下质量份的组分酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2蛋白胨2-2. 5葡萄糖或蔗糖2-3琼脂 1. 8-2. 3 pH = 6. O ；II、将克氏瓶菌种接种到种子培养基中扩培制备成一级种子培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa，接种8小时后开启搅拌，搅拌转速180转/ 分钟，按体积比的通风量0_6小时为1 0. 2，6小时后为1 0. 4 ；培养20小时后，镜检菌 体处于对数期生长，含菌量达到要求，无杂菌，即可转种；III、将一级种子接种到种子培养基中经过扩大培养制备成二级种子培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa,接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为960转/ 分钟，按体积比的通风量0_6小时为1 0.48，6-12小时为1 0.6，12小时后为1 0. 7 ； 培养20小时后，镜检菌体处于对数期生长，含菌量达到工艺要求，无杂菌，即可转种；IV、将二级种子转接入发酵罐内的培养基中发酵培养条件为温度30-31°C，压力0. 05Mpa,接种8小时后开启搅拌，搅拌转速为730转/ 分钟，按体积比的通风量0_6小时为1 0.48，6-12小时为1 0.6，12小时后为1 0. 7 ； 培养24-30小时，镜检菌体生长结束，含菌量达到1亿/毫升以上，无杂菌，PH = 5. 0士，即 可放罐；所述的步骤II、III、IV中的种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的组分葡萄糖或蔗糖2-3蛋白胨2-2. 5酵母膏或酵母粉0. 8-1. 2硫酸镁0. 1-0. 15乙酸钠0. 2-0. 25硫酸铵0. 4-0. 6三氯化铁0. 0002-0. 0005磷酸二氢钾0. 15-0. 2硫酸锌0. 0005-0. 0007消泡剂0. 1-0. 3自然pH种子罐、发酵罐的培养基采用按体积比为55%装量。
7.根据权利要求4所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus ASl. 1854的扩大 培养及发酵包括如下工艺步骤I、由斜面菌种制备摇瓶种子将斜面菌种接种到摇瓶培养基中制备摇瓶种子，其中斜面菌种的培养条件为温度 37-40°C，培养周期1-2天；摇瓶种子的培养条件为采用IOOOml三角瓶中装300ml培养基 进行摇床培养，摇床转速为160-180rpm，温度为37_40°C，培养周期为24小时；II、将摇瓶种子接种到种子培养基中扩培制备成种子液培养条件为采用体积比为70%装量，温度37-40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6. 0，压 力为0. 05Mpa,搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量达到10 亿/毫升以上，无杂菌，即可转罐进入下一级培养；III、将种子液接种到发酵培养基中发酵采用体积比为70%装量，温度37-40°C，采用压风厌氧发酵，pH = 6. 0，压力为0. 05Mpa, 搅拌转速为960转/分，发酵24小时取样镜检菌体形态良好，含菌量达到10亿/毫升以上， 无杂菌，即终止培养；所述的步骤I、II、III、IV中的斜面培养基、摇瓶培养基及发酵培养基包括如下单位质 量份的组分蛋白胨0. 8-1. 2牛肉膏0. 8-1. 2酵母膏或酵母粉0. 5-0. 7 葡萄糖或蔗糖 0. 5-0. 8 吐温-800. 1-0. 15 K2HPO4O. 2-0. 3 Na3HAC 20 0. 5-0. 6 柠檬酸三钠 0. 2-0. 25 MgS047H 20 0. 02-0. 03 MnSO4 · 4H20 0. 003-0. 005 琼月旨 1. 8-2. 2 pH = 6. 5-7. 0。
8.根据权利要求5所述的用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备 方法，其特征在于所述步骤A中光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris ASl. 2349的扩大及发酵培养包括如下工艺步骤I、由斜面菌种扩大培养制备种子液将斜面菌种接种到种子培养基中制备种子液，培养条件为采用1000毫升三角瓶中装 200ml培养基光照培养，光照强度3000-4000勒克斯，静止培养7天；II、将种子液接种到发酵培养基中发酵采用体积比为80%装量，按照体积比为8-10%的接种量接种，按体积比为1 0.2的 比例进行微通风暗培养发酵，发酵过程中定期搅拌，搅拌转速为960转/分钟，培养温度 28-36 °C，培养周期 10-15。所述的步骤I、II中的斜面培养基、种子培养基及发酵培养基包括如下单位质量份的 组分乙酸钠0. 2-2. 5硫酸胺0. 1-0. 15磷酸二氢钾0. 03-0. 05 磷酸氢二钾0. 04-0. 06硫酸镁0. 02-0. 03氯化钠0. 008-0. 01。
全文摘要
本发明属于微生物腐熟剂的制备，特别是指一种用于畜禽粪便发酵生产生物有机肥的微生物腐熟剂的制备方法。包括将啤酒酵母Sccharomycescerevisiae AS1.2414、嗜酸乳杆菌Saccharomyces cerevisiae AS1.1854、分别接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中进行发酵；将光合菌-沼泽红假单胞菌Rhodopseudomonas palustris AS1.2349接种于含有营养物质的培养基中进行发酵；按啤酒酵母发酵液∶沼泽红假单胞菌发酵液∶沼泽红假单胞菌发酵液的体积比为50∶25∶25的比例混合，用米糠和麸皮的混合物为载体，吸附混合后的发酵液，制作成固体腐熟剂。本发明解决了现有技术存在的堆肥过程中腐熟速度较慢，影响了堆肥腐熟的质量和速度的问题。具有可以有效减少堆肥时间，提高堆肥腐熟度和生产效率等优点。
文档编号C05F17/00GK101905985SQ20101024723
公开日2010年12月8日 申请日期2010年7月30日 优先权日2010年7月30日
发明者唐兆宏, 李军, 李宾, 章淑艳, 赵从波, 陈文杰, 马清河, 魏亚新 申请人:河北省微生物研究所