专利名称：一种诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法
技术领域：
本发明属于珍珠养殖技术领域，特别是涉及到一种诱导培育三倍体三角帆蛘，并 利用培育出的三倍体三角帆蛘培育淡水珍珠的方法。
背景技术：
淡水珍珠养殖在我国已有多年的历史和养殖经验并形成规模，在淡水养殖中有重 要的地位。但是，随着珍珠养殖业的发展，人工繁殖技术的不断成熟，长期的多代近亲繁殖 所造成的育珠蛘种质资源退化和病害时有发生给养殖业带来了一定的危害，蛘种的退化集 中表现在性成熟过早，以及由此所造成的生长缓慢、抗病能力低等方面。在养殖过程中所表 现出来的育珠周期长、病害严重、珍珠品质低下，经济效益不高是目前珍珠养殖面临的主要 问题，广种薄收仍是育珠生产的主要方式，严重影响了该产业可持续的发展。优质育珠蛘是生产优质珍珠的基础，培育出优质的种苗是解决上述问题的前提。 由于三角帆蛘在繁殖季节(每年的4 9月份)，需要消耗大量的营养用于繁殖，蛘的生长缓 慢，抗病能力弱，容易感染病害，因此培育出的珍珠质量也不高。利用三倍体三角帆蛘培育 珍珠是解决上述问题经济且有效的途径，三倍体三角帆蛘是在正常二倍体三角帆蛘的基础 上，通过改变染色体的倍性，诱导产生的具有不育性的育珠蛘种。由于三倍体对蛘的性成熟 能够起到抑制的作用。因此，三倍体三角帆蛘在繁殖季节避免了用于繁殖所消耗的营养，具 有生长速度快、代谢旺盛、抗病性强等特点。这对于加速珍珠的育成，提高珍珠的品质、缩短 育珠周期、减少病害的威胁，将起到很好的作用，是提高珍珠养殖经济效益的直接有效的途 径。借于三倍体的不育性和生长优势，为淡水珍珠的养殖提供优良的蛘种，提高珍珠的品 质和养殖的经济效益，不仅具有重要的理论意义和实际应用的前景，同时还会带来高的经 济效益，为促进我国淡水珍珠养殖业的健康、稳定和可持续发展做出贡献。利用细胞染色体组工程技术培育水产养殖新品种，是近年来的研究热点，尤其是 通过染色体的操作技术培育多倍体的研究，是最活跃和最具应用潜力的研究领域。多倍体 倍育具有投入相对少、目的性强、见效快、效益高等特点，多倍体的研究主要是为生产不育 的三倍体。由于三倍体的不育性，能够有效的抑制低等水生生物的性成熟，从而提高其生长 速度和抗病能力，达到促进养殖业的发展，提高养殖的经济效益的目的。目前国内外海洋贝类的三倍体诱导方面已有较多的应用，例如三倍体鲍鱼、牡蛎 和珠母贝等。但是，我国的特有蛘种，也是目前用于淡水珍珠养殖的主要蛘种三角帆蛘三倍 体的诱导，相关报道很少见，只有CN1957686A，其采用的是体外受精与胚胎发育的类型，而 且其体外受精采用的是三倍体三角帆蛘产生的卵子和二倍体三角帆蛘的精子，本身就需要 三倍体三角帆蛘作为亲本。虽然，三角帆蛘与其它海洋贝类在生物分类和进化上是处于同一水平，有很多相 似之处，但是三角帆蛘与海洋贝类在生殖生物学上特别是受精与胚胎发育方面存在有很大 的差异。目前成功诱导培育出三倍体的海洋贝类均属于体外受精和胚胎发育的类型，然而 三角帆蛘的受精与胚胎发育是在外鳃腔中完成的，属于不完全的体内受精与胚胎发育的类型，这种特殊的繁殖方式决定了三角帆蛘三倍体诱导技术路线的特殊性和技术难度。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是
一种诱导三倍体三角帆蛘培育珍珠的方法，所述的方法包括诱导培育三倍体三角帆蛘 和利用培育出的三倍体三角帆蛘培育珍珠的方法，其特征在于所述诱导培育三倍体三角帆 蛘的方法为选取年龄为3龄 6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，生长正常的二倍体三 角帆蛘作为亲蛘，待雌蛘的鳃发育丰满厚实，所述的亲蛘中雄蛘和雌蛘的数量比为1 广3， 将所选的亲蛘隔离，分别进行培育，跟踪观察雌蛘卵子的发育情况，待雌蛘的卵子发育成熟 后，将雌蛘移入培育雄蛘的池塘里，使雌蛘自然受精，跟踪观察雌蛘受精卵的发育情况，待 80 %以上的受精卵出现第一极体后，将雌蛘放入300 450 μ mol/ L的6-二甲基氨基嘌呤 水溶液中，进行诱导处理10 30分钟，取出诱导后的雌蛘；诱导后的雌蛘经培育后孵化育 苗，得到三倍体仔蛘，三倍体仔蛘培育至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三 角帆蛘。本发明所述的选取年龄为3龄 6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，生长正常的 二倍体三角帆蛘作为亲蛘，包括壳长为15cm，壳厚5cm的生长正常的3龄 6龄的二倍体三 角帆蛘。因为二倍体三角帆蛘的生长的大小会受自身和自然条件限制，不可能无限长大，所 以对生长正常的二倍体三角帆蛘的大小的上限没必要做特别的限定，凡是壳长15cm以上， 壳厚5cm以上，生长正常的3龄 6龄的二倍体三角帆蛘都可选做亲蛘。更具体的，所述诱导培育三倍体三角帆蛘的方法包括以下步骤
(1)选取年龄为3龄 6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮， 腹部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤的三角帆蛘作为亲蛘，所述的亲蛘中雄蛘和雌蛘的数 量比为1 广3，于11月 次年2月将雄蛘和雌蛘隔离，分别置于池塘中吊养，3月初将雄蛘 和雌蛘按每一只分开培育。(2)从雄蛘和雌蛘按每一只分开培育开始观察雌蛘卵子的发育情况，待雌蛘的卵 子发育成熟后，将雌蛘转移至步骤(1)的培育雄蛘的池塘中，雌蛘与雄蛘一一配对培育， 使雌蛘自然受精，继续跟踪观察雌蛘的怀卵情况，雌蛘怀卵后，用探针深入孕育鳃瓣中，取 少量的卵于显微镜下观察，待80 %以上的受精卵出现第一极体后，取出雌蛘，将雌蛘放入 300 450 μ mol/ L的6- 二甲基氨基嘌呤水溶液中，进行诱导处理10 30分钟，取出诱导 后的雌蛘；在诱导处理时雌蛘不要求要一个个分开培育，可与其它雌蛘一起进行诱导处理。(3)诱导后的雌蛘进行培育，待雌蛘中80%以上胚胎发育至成熟钩介幼虫后，用寄 主鱼静水采苗并辅助孵化育苗，得到三倍体仔蛘，流水培育三倍体仔蛘至壳长0. 8^1. 2cm, 移入露天大池培育至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角帆蛘。本发明所述步骤(1)中，雌蛘和雄蛘的鉴别方法为雌蛘的外鳃鳃丝细密，有 100 120条左右，且外鳃瓣肥厚，成熟雌蛘的外鳃呈淡黄色或桔红色，在繁殖季节，雌蛘腮 内有卵。雄蛘的鳃丝稀疏，一般只有60条左右，外鳃瓣也较瘦薄，在繁殖季节腮内没有卵， 经过外形鉴别后仍不能保证它是雄蛘，需进一步镜检，确定雌雄。这是本领域技术人员公 知的鉴别方法。所述亲蛘置于池塘中吊养，宜吊在微流水中，水深约为1.5m左右，要求水质清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右，在繁殖季节(通常为3月初)将 雌蛘和雄蛘分池培育，每一个严格单独隔离。本发明所述步骤(3)的诱导后的雌蛘的培育、采苗及辅助孵化育苗技术，为本领域 人员公知技术，可按浙江省地方标准DB33/T402. 1—2003，河蛘育珠技术规范第1部分三 角帆蛘苗种繁育技术规范进行操作。更具体的，所述步骤(3)可按照以下方法操作诱导后的雌蛘培育6 10天后， 选取80%以上胚胎发育至成熟钩介幼虫的成熟雌蛘，在装水的容器中采集钩介幼虫，然后 按每个成熟雌蛘加入0. 5^2公斤的寄主鱼进行采苗，使钩介幼虫寄生在寄主鱼上，得到附 虫寄主鱼，通常采苗时间为1(Γ15分钟，然后将附虫寄主鱼倒进育苗池中，投注充足饲料 进行孵化，所述育苗池为流水培育，所述寄主鱼为鳙鱼、鲶鱼或黄颡鱼，在预计脱苗日前两 天，将附虫寄主鱼按每平方米5 10尾投入蛘苗池，并停止喂饵，使蛘苗池中保持水流 畅通，脱苗完毕后捞出寄主鱼，蛘苗池中得到三倍体仔蛘，流水培育至三倍体仔蛘的壳长 0. 8 1. 2cm，移入露天大池培育至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角帆 蛘，再以三倍体三角帆蛘培育珍珠。所述寄主鱼通常要求体质健壮、无病无伤、大小为100 150g/尾。三角帆蛘对水流和底质要求比较严格，为使溶氧充足，饵料生物丰富，育苗池要采 用流水培育。为充分利用水源和节约能源，最好使进水池高于育苗池，育苗池高于出水囤积 池，形成自然落差。为保证仔蛘的成活率，进水水源一定要采用天然地表水，无污染，无敌害 生物，水质不能太肥。预计脱苗日通常按照以下之一的方法预计18 19°C寄生时间1Γ16天；2(T21°C 寄生时间12 13天；22 24°C寄生时间10 12天；26 28°C寄生时间6 7天；30 35°C寄生 时间5飞天；根据预计不同温度下的寄生时间即可预计脱苗日。(浙江省地方标准DB33/ T402. 1一2003，河蛘育珠技术规范第1部分三角帆蛘苗种繁育技术规范)
脱苗时要定时检查鱼鳃和鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱 苗，若白点已消失.说明苗已脱尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用。所述脱 苗期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死亡的鱼，应 及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。所述采集钩介幼虫的方法可采用自然静水采集方法或人工辅助静水采集方法，所 述自然静水采集方法为将选出80%以上胚胎发育至成熟钩介幼虫的成熟雌蛘洗净，在阳 光下晒10 20min，然后移进孵化室内平放20 40min，再放入容器中，加水刚好淹没所述 的成熟雌蛘，3 5min后，可见雌蛘在水中排出棉絮状物(钩介幼虫)，30 40min后，容器 内的水中有大量棉絮状物，将成熟雌蛘移出，搅动水体使棉絮状物分布均勻，即得到钩介幼 虫。所述人工辅助静水采集方法为将选出80%以上胚胎发育至成熟钩介幼虫的成熟 雌蛘用开壳器撑开，加塞固定，用探针深入孕育鳃瓣中，当挑出的钩介幼虫能互相粘结连成 一条丝时，放入加水的容器中，成熟雌蛘排出棉絮状物，然后将成熟雌蛘移出，搅动水体使 棉絮状物分布均勻，即得到钩介幼虫。所述三倍体仔蛘的流水培育的初期，由于仔蛘个体小，水流不宜过大，可前期慢后 期快，保持水质清新，溶氧充足。在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物，防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直 径为0. 15cm圆形木片组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻 轻拍动一遍，污物泛起，随水流出。一般每7 IOd进行1次。三倍体仔蛘的流水培育的中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其三倍体 仔蛘生长需要。在每次抄池后，可用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆 1 2小碗，有条件的还可在泥浆中添加一些微量元素，如铁、锌等，泼洒后约10 20 min, 可开启喷水管。三倍体仔蛘在育苗池的时间长达1 2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察 仔蛘生长情况，发现问题及时处理。特别是近几年，育苗池仔蛘常常受到水生红虫的侵袭， 一经发现，应及时采取措施，以防大面积流行，造成损失。三倍体仔蛘至壳长0. 8^1. 2cm，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘 从育苗池捞出，移入露天大池培育至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角 帆蛘。本发明所述利用培育出的三倍体三角帆蛘培育珍珠的方法，是本领域技术人员公 知的技术，可按照浙江省地方标准DB33/T402. 2—2003，河蛘育珠技术规范第2部分珍珠 接种技术规范以及DB33/T402. 3—2003，河蛘育珠技术规范第3部分育珠蛘养殖与采珠技 术规范进行操作。更具体的，所述利用培育出的三倍体三角帆蛘培育珍珠的方法可按照以下步骤进 行
1、每年的3月飞月或9月 11月，选取蛘体厚实，外壳色泽鲜艳、光亮，呈深绿至青蓝 色或黄褐色，蛘体完整无损伤，腹缘整齐，外套膜肥厚细嫩，呈白色，斧足肥硕，体质健壮，受 惊后两壳迅速闭合，喷水有力的三角帆蛘为手术蛘。2、制片选取制片蛘一剖蛘一洗污一开膜一取下外表皮一洗去粘液污物一切去色 线一修边一切片
3、插片用送片针挑在细胞小片的正中，快速插入插片蛘的内外表皮之间的结缔组织， 然后退出送片针，同时用创口针将小片整圆，挑片、创口、插片、整圆应一次成功，达到横插、 竖钩、纵包、同位一致。4、插好片立即在创口滴加消毒液消毒，尽快吊养于育珠水域。以蛘为主的池塘吊 养珠蛘15000只/公顷 18000只/公顷，先期密，后期逐步减少，吊养深度30cnT40Cm。5、手术后7天 15天，要求水质较淡，然后逐渐培肥水质，春、夏季以有机肥和无 机肥混合施用，夏季无机肥与有机肥酌情施放，冬季酌施有机肥，有机肥料以发酵腐熟过的 鸡粪、鸭粪为主，化肥主要用尿素和过磷酸钙，使水质呈现黄绿色或褐绿色，透明度保持为 30cnT40cm，每月换水在30cnT50cm，保持水体溶氧5mg/L以上，保持水体PH7 8之间，同时做 好蛘病防治。6、养殖周期一般为3至5年，每年的12月至翌年2月份为珍珠的采收季节。7、将已育成珍珠的蛘，用剖蛘刀切断前后闭壳肌，打开双壳，取出珍珠，取出后的 珍珠放入清水盆中洗去污物，进一步洗涤干净。本专利根据三角帆蛘繁殖发育生物学的特点，制定出了适合三角帆蛘三倍体诱导 的技术路线，三角帆蛘雌雄异体，在繁殖季节当性腺发育成熟后，雌雄个体分别排出精子和
6卵子，卵子排入到雌性的外鳃腔中，雄性排出的精子顺水流进入雌性的外鳃腔中与卵子受 精并发育成钩介幼虫，属于不完全的体外受精的类型，这种受精与胚胎发育的类型决定了 三角帆蛘三倍体诱导应采取的技术路线的特点。虽然三角帆蛘雌雄个体在受精的过程中 不发生性交行为即可分别排出卵子和精子，但发明人发现三角帆蛘的雌雄之间存在有性行 为，主要表现在单独饲养的雌雄个体，即使性腺发育成熟也不能够排出精子和卵子，只有当 雌雄个体混养在一起时才有精子和卵子的排出，说明三角帆蛘在繁殖时期雌雄个体之间存 在有物质信号的传导和交流，这种现象对确定三倍体诱导的技术路线具有十分重要的作 用，在自然条件下三角帆蛘的卵子是分批排放的即成熟一批排放一批，难以获得同步受精 发育的卵子，这种情况下要获得较高的三倍体诱导率是十分困难的，由于三角帆蛘具有性 行为，通过这一特点，我们就可以人为地控制三角帆蛘卵子的同步受精，获得同步的发育， 极大地提高了三倍体的诱导率。在此基础上确定了三角帆蛘三倍体诱导的技术路线，通过 6 - DMAP的诱导成功的获得了三倍体的三角帆蛘，诱导率达到70%以上。与CN1957686A相比，本发明的有益效果体现在
UCN1957686A中是采取完全人工培育，分别取出精子和卵子，然后受精，由于雌蛘的卵 子要在雄蛘的刺激下发育成熟，分别取出不利于控制精子、卵子的成熟度，如成熟度不高会 直接导致受精卵形成率不高，而本发明的精子和卵子为雄蛘和雌蛘分别自然排出，在雌蛘 体内自然受精，精子、卵子的成熟度都较高，受精卵形成率高。2、CN1957686A的卵子取自三倍体三角帆蛘，需要三倍体三角帆蛘为亲本，而本发 明雄蛘和雌蛘都使用的正常的二倍体三角帆蛘，来源容易，更方便取材，适宜推广。3、本发明的诱导成功率大幅提高，达70%以上。而且经初步试验的结果表明利用本方法培育的三倍体三角帆蛘养殖育珠，在同 一养殖周期中，三倍体比正常二倍体三角帆蛘的生长速度快，能够缩短养殖育珠的周期，育 珠的质量有明显的提高。
具体实施例方式下面以具体实施例来对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。实施例1
1亲蛘的选择与性别鉴定
挑选3龄三角帆蛘，要求壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮，腹 部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤，然后确定雌雄。亲蛘按雌雄=1 :1进行选留。 2亲蛘的培育
于11月 次年2月将亲蛘中的雄蛘和雌蛘隔离，分别吊养在池塘的微流水中，水深 约为1.5m左右，要求水质清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右， 在繁殖季节(3月初)将雌蛘和雄蛘按每一只分开单独培育，严格隔离。3三倍体诱导
从雌蛘和雄蛘按每一只分开单独培育开始，观察选留的雌蛘，若发现雌蛘的鳃发育饱 满，卵子成熟，此时雄蛘也成熟了，将其转移到雄蛘池，使雌蛘自然受精，并观察雌蛘的怀卵 情况，发现怀卵后，用细竹片深入孕育鳃瓣中，取少量的卵于显微镜下观察受精卵的发育情 况，发现80 %以上的受精卵出现第一极体后，将雌蛘取出放入450μπκ)1/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine，6-DMAP)水溶液中，处理持续时间10分钟，处理后放入池
塘进行饲养。4亲蛘成熟度的检查
一个星期后，观察雌蛘勾介幼虫的成熟情况，如果胚胎发育基本完成，成熟度在 80%以上，可作为繁殖用蛘，否则，则需加紧培育。5寄主鱼的培育及准备
挑选体质健壮、无病无伤、大小为120g左右/尾的黄颡鱼，每个育苗池准备黄颡鱼
约 5kg。6人工繁殖
6. 1钩介幼虫的采集
自然静水采苗将选出成熟雌蛘洗净，在阳光下晒15min左右，然后移进孵化室内平放 30min,然后将雌蛘放入塑料盆中(直径0. 6m左右)，每盆放12只，加水刚好淹没雌蛘即可， 待盆内水中有大量棉絮状物时，将亲蛘移去，然后用玻璃棒搅动水体，使棉絮状物分布均 勻，将准备好的黄颡鱼按每个成熟雌蛘加入1公斤的寄主鱼倒进盆中，5min后，检查鱼鳃 和鳍条，若发现有许多小白点，即说明钩介幼虫已寄生在鱼体上，估计每尾寄生1000个苗 时，即可将鱼和水一同倒进育苗池中孵化。6. 2寄主鱼的暂养
钩介幼虫寄生在鱼体上，吸收鱼体的营养生长发育，在水温23 28°C下生长7d，将附 虫鱼按每平方米8尾再次分散到各个蛘苗池去，并停止喂饵进行脱苗，并定时检查鱼鳃和 鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱苗，若白点已消失.说明苗已脱 尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用.
在这期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死亡的 鱼，应及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保证进水水源为天然地表水，无污染，无敌害生物，水质不能太肥。7. 1仔蛘的管理
钩介幼虫寄生生活结束后，发育变成仔蛘，从鱼体上脱落，掉入水底，营底栖生活。 等钩介幼虫脱落完毕后，及时捞出寄主鱼，开始漫长的流水培育。在培育初期，由于仔蛘个 体小，水流不宜过大，可前期慢后期快，保持水质清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物， 防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直径为0. 15cm圆形木片 组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻轻拍动一遍，污物泛起， 随水流出。每8d进行1次。7. 3加营养泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其生长需要。在每次抄 池后，可用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆2小碗，泼洒后约15 min, 可开启喷水管。7. 4勤观察，发现问题及时处理仔蛘在育苗池的时间长达1 2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察仔蛘生 长情况，发现问题及时处理。特别是近几年，育苗池仔蛘常常受到水生红虫的侵袭，一经发 现，应及时采取措施，以防大面积流行，造成损失。7. 5仔蛘出池、培育
当仔蛘长到Icm左右时，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘从育苗池捞 出，移入露天大池培育2个月左右，至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
制片选取制片蛘一剖蛘一洗污一开膜一取下外表皮一洗去粘液污物一切去色线一修 边一切片
然后用送片针挑在细胞小片的正中，快速插入插片蛘的内外表皮之间的结缔组织，然 后退出送片针，同时用创口针将小片整圆，挑片、创口、插片、整圆应一次成功，达到横插、竖 钩、纵包、同位一致，。插好片立即在创口滴加消毒液消毒，尽快吊养于育珠水域。以蛘为主的池塘吊养 珠蛘15000只/公顷，先期密，后期逐步减少，吊养深度35cm。手术后的前10天培育，要求水质较淡，然后逐渐培肥水质，春、夏季以有机肥和无 机肥混合施用，夏季无机肥与有机肥酌情施放，冬季酌施有机肥，有机肥料以发酵腐熟过的 鸡粪、鸭粪为主，化肥主要用尿素和过磷酸钙，使水质呈现黄绿色或褐绿色，透明度保持为 30cnT40cm，每月换水在30cnT50cm，保持水体溶氧5mg/L以上，保持水体PH7 8之间，同时做 好蛘病防治。插片手术1年后，随机抽取三角帆蛘400个，分别测量壳长、壳高及育珠生长情况， 结果见表1。 比较例1
1亲蛘的选择与性别鉴定
挑选3龄的二倍体三角帆蛘，要求壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘 体健壮，腹部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤，然后确定雌雄。亲蛘按雌雄=1 :1进行选
&3 甶ο2亲蛘的培育
于11月 次年2月将亲蛘中的雄蛘和雌蛘隔离，分别吊养在池塘的微流水中，水深 约为1.5m左右，要求水质清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右， 在繁殖季节(3月初)将雌蛘和雄蛘按每一只分开单独培育，严格隔离。3、挑选性腺成熟饱满的个体，剖取精卵分别存放于盛有过滤水的容器中，经筛绢 过滤。除去杂质和组织碎片，迅速将卵加入盛有0. 005%氨水的容器中，停留5分钟，调节卵 的数量为0. 1万粒/ml，水温20°C，然后加入适量的精子，并混合让其受精。4、诱导处理当有80%左右的受精卵出现第一极体时，加入浓度为50ppm的 6-DMAP抑制剂进行诱导处理30分钟，然后用水洗受精卵数次，除去残留抑制剂药物及精 子。5、受精卵的收集及培育把受精卵置于较大的容器中，加满水让其发育，待孵化出的钩介幼虫并大量上浮后，将上浮的钩介幼虫收集，转移至另一装水的塑料盆中，将准备好 的黄颡鱼倒进盆中，5min后，检查鱼鳃和鳍条，若发现有许多小白点，即说明钩介幼虫已寄 生在鱼体上，估计每尾寄生1000个苗时，即可将鱼和水一同倒进育苗池中孵化。6、寄主鱼的暂养
钩介幼虫寄生在鱼体上，吸收鱼体的营养生长发育，在水温23 28°C下生长7d，将附 虫鱼按每平方米8尾再次分散到各个蛘苗池去，并停止喂饵进行脱苗，并定时检查鱼鳃和 鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱苗，若白点已消失.说明苗已脱 尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用.
在这期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死亡的 鱼，应及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保证进水水源为天然地表水，无污染，无敌害生物，水质不能太肥。7. 1仔蛘的管理
钩介幼虫寄生生活结束后，发育变成仔蛘，从鱼体上脱落，掉入水底，营底栖生活。 等钩介幼虫脱落完毕后，及时捞出寄主鱼，开始漫长的流水培育。在培育初期，由于仔蛘个 体小，水流不宜过大，可前期慢后期快，保持水质清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物， 防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直径为0. 15cm圆形木片 组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻轻拍动一遍，污物泛起， 随水流出。每8d进行1次。7. 3加营养泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其生长需要。在每次抄 池后，可用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆2小碗，泼洒后约15 min, 可开启喷水管。7. 4勤观察，发现问题及时处理
仔蛘在育苗池的时间长达1 2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察仔蛘生 长情况，发现问题及时处理。特别是近几年，育苗池仔蛘常常受到水生红虫的侵袭，一经发 现，应及时采取措施，以防大面积流行，造成损失。7. 5仔蛘出池、培育
当仔蛘长到Icm左右时，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘从育苗池捞 出，移入露天大池培育两个月左右，至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作条件同实施例1，插片手术1年后，随机抽取三角帆蛘400个，分别测量壳长、壳 高及育珠生长情况，结果见表1。比较例2
1亲蛘的选择与性别鉴定
挑选3龄的二倍体三角帆蛘，要求壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮，腹部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤，然后确定雌雄。亲蛘按雌雄=1 :1进行选
&3 甶ο2亲蛘的培育
将亲蛘每2对一笼吊养在微流水中，水深约为1. 5m左右，吊养深度30cm，要求水质 清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右。3亲蛘成熟度的检查
挑选外鳃丰满厚实，颜色呈褐黄色、紫黑色或灰黄色的雌蛘，观察钩介幼虫的成熟情 况，如果钩介幼虫大部分破膜，且两壳已能微微扇动，足丝粘连，则表明钩介幼虫大多成熟， 可作为繁殖用蛘，否则，则需加紧培育。4寄主鱼的培育及准备
挑选体质健壮、无病无伤、大小为120g左右/尾的黄颡鱼，每个育苗池准备黄颡鱼
约 5kg。5人工繁殖
5. 1钩介幼虫的采集
自然静水采苗将选出的成熟雌蛘洗净，在阳光下晒15min左右，然后移进孵化室内平 放30min，然后将雌蛘放入塑料盆中(直径0. 6m左右)，每盆放12只，加水刚好淹没雌蛘即 可，待盆内水中有大量棉絮状物时，将亲蛘移去，然后用玻璃棒搅动水体，使棉絮状物分布 均勻，将准备好的黄颡鱼按每个成熟雌蛘加入1公斤的寄主鱼倒进盆中，5min后，检查鱼 鳃和鳍条，若发现有许多小白点，即说明钩介幼虫已寄生在鱼体上，估计每尾寄生1000个 苗时，即可将鱼和水一同倒进育苗池中孵化。5. 2寄主鱼的暂养
钩介幼虫寄生在鱼体上，吸收鱼体的营养生长发育，在水温23 28°C下生长7d，将附 虫鱼按每平方米8尾再次分散到各个蛘苗池去，并停止喂饵进行脱苗，并定时检查鱼鳃和 鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱苗，若白点已消失.说明苗已脱 尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用。在这期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死 亡的鱼，应及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保证进水水源为天然地表水，无污染，无敌害生物，水质不能太肥。7. 1仔蛘的管理
钩介幼虫寄生生活结束后，发育变成仔蛘，从鱼体上脱落，掉入水底，营底栖生活。 等钩介幼虫脱落完毕后，及时捞出寄主鱼，开始流水培育。在培育初期，由于仔蛘个体小，水 流不宜过大，可前期慢后期快，保持水质清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物， 防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直径为0. 15cm圆形木片 组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻轻拍动一遍，污物泛起， 随水流出。每8d进行1次。7. 3加营养泥
11仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其生长需要。在每次抄 池后，用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆2小碗，泼洒后约15 min，可 开启喷水管。7. 4勤观察，发现问题及时处理
仔蛘在育苗池的时间长达广2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察仔蛘生长 情况，发现问题及时处理。7. 5仔蛘出池、培育
当仔蛘长到Icm左右时，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘从育苗池捞 出，移入露天大池培育两个月左右，至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到二倍体三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作条件同实施例1，插片手术1年后，随机抽取三角帆蛘400个，分别测量壳长、壳 高及育珠生长情况，结果见表1。实施例2
1亲蛘的选择与性别鉴定
挑选4龄三角帆蛘，要求壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮，腹 部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤，然后确定雌雄。亲蛘按雌雄=2 1进行选留。2亲蛘的培育
于11月 次年2月将亲蛘中的雄蛘和雌蛘隔离，分别吊养在池塘的微流水中，水深 约为1.5m左右，要求水质清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右， 在繁殖季节(3月初)将雌蛘和雄蛘按每一只分开单独培育，严格隔离。3三倍体诱导
观察选留的雌蛘，若发现雌蛘的鳃发育饱满，卵子成熟，将其转移到雄蛘池，使雌蛘自 然受精，观察雌蛘的怀卵情况，发现怀卵后，用细竹片深入孕育鳃瓣中，取少量的卵于显微 镜下观察受精卵的发育情况，发现80 %以上的受精卵出现第一极体后，将雌蛘取出放入 300ymol/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine, 6-DMAP)的水溶液中，处理持 续时间30分钟，处理后放入池塘进行饲养。4亲蛘成熟度的检查
一个星期后，观察雌蛘勾介幼虫的成熟情况，如果胚胎发育基本完成，成熟度在 80%以上，可作为繁殖用蛘，否则，则需加紧培育。5寄主鱼的培育及准备
挑选体质健壮、无病无伤、大小为120g左右/尾的黄颡鱼，每个育苗池准备黄颡鱼
约 5kg。6人工繁殖
6. 1钩介幼虫的采集
自然静水采苗将选出成熟雌蛘洗净，在阳光下晒15min左右，然后移进孵化室内平放 30min,然后将雌蛘放入塑料盆中(直径0. 6m左右)，每盆放12只，加水刚好淹没雌蛘即可， 待盆内水中有大量棉絮状物时，将亲蛘移去，然后用玻璃棒搅动水体，使棉絮状物分布均 勻，将准备好的黄颡鱼按每个成熟雌蛘加入0. 5公斤的寄主鱼倒进盆中，5min后，检查鱼鳃和鳍条，若发现有许多小白点，即说明钩介幼虫已寄生在鱼体上，估计每尾寄生1000个 苗时，即可将鱼和水一同倒进育苗池中孵化。6. 2寄主鱼的暂养
钩介幼虫寄生在鱼体上，吸收鱼体的营养生长发育，在水温23 28°C下生长7d，将附 虫鱼按每平方米8尾再次分散到各个蛘苗池去，并停止喂饵进行脱苗，并定时检查鱼鳃和 鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱苗，若白点已消失.说明苗已脱 尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用.
在这期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死亡的 鱼，应及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保证进水水源为天然地表水，无污染，无敌害生物，水质不能太肥。7. 1仔蛘的管理
钩介幼虫寄生生活结束后，发育变成仔蛘，从鱼体上脱落，掉入水底，营底栖生活。 等钩介幼虫脱落完毕后，及时捞出寄主鱼，开始漫长的流水培育。在培育初期，由于仔蛘个 体小，水流不宜过大，可前期慢后期快，保持水质清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物， 防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直径为0. 15cm圆形木片 组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻轻拍动一遍，污物泛起， 随水流出。每8d进行1次。7. 3加营养泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其生长需要。在每次抄 池后，可用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆2小碗，有条件的还可在泥 浆中添加一些微量元素，泼洒后约15 min，可开启喷水管。7. 4勤观察，发现问题及时处理
仔蛘在育苗池的时间长达1 2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察仔蛘生 长情况，发现问题及时处理。特别是近几年，育苗池仔蛘常常受到水生红虫的侵袭，一经发 现，应及时采取措施，以防大面积流行，造成损失。7. 5仔蛘出池、培育
当仔蛘长到Icm左右时，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘从育苗池捞 出，移入露天大池培育1年左右至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角帆 蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作条件同实施例1，插片手术1年后，随机抽取三角帆蛘400个，分别测量壳长、壳 高及育珠生长情况，结果见表1。实施例3
1亲蛘的选择与性别鉴定
挑选6龄三角帆蛘，要求壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮，腹 部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤，然后确定雌雄。亲蛘按雌雄=3 1进行选留。
2亲蛘的培育
于11月 次年2月将亲蛘中的雄蛘和雌蛘隔离，分别吊养在池塘的微流水中，水深 约为1.5m左右，要求水质清新，无污染，肥瘦适宜，透明度30cm左右，每亩吊养600只左右， 在繁殖季节(3月初)将雌蛘和雄蛘按每一只分开单独培育，严格隔离。3三倍体诱导
观察选留的雌蛘，若发现雌蛘的鳃发育饱满，卵子成熟，将其转移到雄蛘池，使雌蛘自 然受精，观察雌蛘的怀卵情况，发现怀卵后，用细竹片深入孕育鳃瓣中，取少量的卵于显微 镜下观察受精卵的发育情况，发现80 %以上的受精卵出现第一极体后，将雌蛘取出放入 400ymol/ L的6-二甲基氨基嘌呤(6-Dimethylaminopuine，6-DMAP)的水溶液中，处理持 续时间20分钟，处理后放入池塘进行饲养。4亲蛘成熟度的检查
一个星期后，观察雌蛘勾介幼虫的成熟情况，如果胚胎发育基本完成，成熟度在 80%以上，可作为繁殖用蛘，否则，则需加紧培育。5寄主鱼的培育及准备
挑选体质健壮、无病无伤、大小为120g左右/尾的黄颡鱼，每个育苗池准备黄颡鱼
约 5kg。6人工繁殖
6. 1钩介幼虫的采集
自然静水采苗将选出成熟雌蛘洗净，在阳光下晒15min左右，然后移进孵化室内平放 30min,然后将雌蛘放入塑料盆中(直径0. 6m左右)，每盆放12只，加水刚好淹没雌蛘即可， 待盆内水中有大量棉絮状物时，将亲蛘移去，然后用玻璃棒搅动水体，使棉絮状物分布均 勻，将准备好的黄颡鱼按每个成熟雌蛘加入1公斤的寄主鱼倒进盆中，5min后，检查鱼鳃 和鳍条，若发现有许多小白点，即说明钩介幼虫已寄生在鱼体上，估计每尾寄生1000个苗 时，即可将鱼和水一同倒进育苗池中孵化。6. 2寄主鱼的暂养
钩介幼虫寄生在鱼体上，吸收鱼体的营养生长发育，在水温23 28°C下生长7d，将附 虫鱼按每平方米8尾再次分散到各个蛘苗池去，并停止喂饵进行脱苗，并定时检查鱼鳃和 鳍条上的白点是否消失.如果还有白点，应放回原池继续脱苗，若白点已消失.说明苗已脱 尽，即可把部分寄主鱼转池饲养，以备明年再用.
在这期间，由于水体小，鱼多，为防止缺氧浮头，必须保持水流通畅，对前期体弱死亡的 鱼，应及时捞出，以防污染水质。对跳出育苗池的鱼，应及时发现放人池中。7孵化管理
采用流水育苗，保证进水水源为天然地表水，无污染，无敌害生物，水质不能太肥。7. 1仔蛘的管理
钩介幼虫寄生生活结束后，发育变成仔蛘，从鱼体上脱落，掉入水底，营底栖生活。 等钩介幼虫脱落完毕后，及时捞出寄主鱼，开始漫长的流水培育。在培育初期，由于仔蛘个 体小，水流不宜过大，可前期慢后期快，保持水质清新，溶氧充足。7. 2 抄池
在流水培育的中、后期，要进行抄池，以排除仔蛘在生长发育过程中排泄的污物，防止水质变坏发臭。抄池器也可用一根长Im的木棍，一端钉一块直径为0. 15cm圆形木片 组成。抄池时，先将喷水管暂时停水，然后用抄池器将育苗池水面轻轻拍动一遍，污物泛起， 随水流出。每8d进行1次。7. 3加营养泥
仔蛘在育苗池中后期，食量逐步增加，这时需补充食物，满足其生长需要。在每次抄 池后，可用细纱布过滤的泥浆均勻泼洒在育苗池中，每池用泥浆2小碗，泼洒后约15 min, 可开启喷水管。7. 4勤观察，发现问题及时处理
仔蛘在育苗池的时间长达1 2月，可准备一个放大镜和载玻片，经常观察仔蛘生 长情况，发现问题及时处理。特别是近几年，育苗池仔蛘常常受到水生红虫的侵袭，一经发 现，应及时采取措施，以防大面积流行，造成损失。7. 5仔蛘出池、培育
当仔蛘长到Icm左右时，选晴好天气，用一种特制的三角形抄网将仔蛘从育苗池捞 出，移入露天大池培育2个月左右，至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角 帆蛘，可用于培育珍珠。8、插片、育珠、采珠
操作条件同实施例1，插片手术1年后，随机抽取三角帆蛘400个，分别测量壳长、壳 高及育珠生长情况，结果见表1。随机抽取了经实施例1、比较例1、比较例2、实施例2、实施例3方法培育的2龄三 角帆蛘各400个，分别测量了相应的壳长、壳高及育珠生长情况，其结果如下表1。
表权利要求
一种诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法，所述的方法包括诱导培育三倍体三角帆蚌和利用培育出的三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法，其特征在于所述诱导培育三倍体三角帆蚌的方法为选取年龄为3龄～6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，生长正常的二倍体三角帆蚌作为亲蚌，所述的亲蚌中雄蚌和雌蚌的数量比为11~3，将所选雄蚌和雌蚌隔离，分别进行培育，跟踪观察雌蚌卵子的发育情况，待雌蚌的卵子发育成熟后，将雌蚌移入培育雄蚌的池塘里，使雌蚌自然受精，跟踪观察雌蚌受精卵的发育情况，待80 %以上的受精卵出现第一极体后，将雌蚌放入300～450μmol/Ｌ的6 二甲基氨基嘌呤水溶液中，进行诱导处理10～30分钟，取出诱导后的雌蚌；诱导后的雌蚌经培育后孵化育苗，得到三倍体仔蚌，三倍体仔蚌培育至蚌壳长7cm～9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角帆蚌。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述诱导培育三倍体三角帆蛘的方法包括以 下步骤(1)选取年龄为3龄 6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，贝壳完整无残缺，蛘体健壮， 腹部鼓圆，闭壳肌强劲有力，无病无伤的三角帆蛘作为亲蛘，所述的亲蛘中雄蛘和雌蛘的数 量比为1 广3，于11月 次年2月将雄蛘和雌蛘隔离，分别置于池塘中吊养，3月初将雄蛘 和雌蛘按每一只分开培育；(2)从雄蛘和雌蛘按每一只分开培育开始观察雌蛘卵子的发育情况，待雌蛘的卵子发 育成熟后，将雌蛘移入培育雄蛘的池塘里，雌蛘与雄蛘一一配对培育，使雌蛘自然受精，继 续跟踪观察雌蛘的怀卵情况，雌蛘怀卵后，用探针深入孕育鳃瓣中，取少量的卵于显微镜下 观察，待80 %以上的受精卵出现第一极体后，取出雌蛘，将雌蛘放入300 450 μ mol/ L的 6_ 二甲基氨基嘌呤水溶液中，进行诱导处理10 30分钟，取出诱导后的雌蛘；(3)诱导后的雌蛘进行培育，待雌蛘中80%以上胚胎发育至成熟钩介幼虫后，用寄主鱼 静水采苗并辅助孵化育苗，得到三倍体仔蛘，流水培育三倍体仔蛘至壳长0. 8^1. 2cm，移入 露天大池培育至蛘壳长7cm 9cm，个体重20克以上，得到三倍体三角帆蛘。
全文摘要
本发明公开了一种诱导三倍体三角帆蚌培育珍珠的方法，包括诱导培育三倍体三角帆蚌的方法选取年龄为3龄～6龄，壳长15cm以上，壳厚5cm以上，生长正常的二倍体三角帆蚌作为亲蚌，将所选的亲蚌的雄蚌和雌蚌隔离，分别培育，跟踪观察雌蚌卵子的发育情况，待卵子发育成熟后，将雌蚌移入培育雄蚌的池塘里，使雌蚌自然受精，观察受精卵的发育情况，待80%以上的受精卵出现第一极体后，将雌蚌放入300～450μmol/Ｌ的6-二甲基氨基嘌呤的水溶液中，进行诱导处理10～30分钟，得到诱导后的雌蚌，经培育后孵化育苗，得到三倍体仔蚌，再经培育得到三倍体三角帆蚌。本发明以正常的二倍体三角帆蚌为亲本，自然受精，诱导成功率提高，达70%以上。
文档编号A01K61/00GK101940183SQ20101029201
公开日2011年1月12日 申请日期2010年9月26日 优先权日2010年9月26日
发明者刘小锋, 刘文东, 弭忠祥, 杨受保, 陈海军, 韩继卫 申请人:浙江山下湖珍珠集团股份有限公司;绍兴文理学院