专利名称：一种人工授精的尼罗罗非鱼繁殖方法
技术领域：
本发明涉及到水产鱼苗技术，特别是涉及到人工繁殖的尼罗罗非鱼的方法。
背景技术：
尼罗罗非鱼属热带性鱼类，具有适应性广、食性杂、抗病力强，饲料利用率高，生长 快和肉质细嫩等优点，因而受到养殖者的欢迎。当前，尼罗罗非鱼的繁殖方法是将性成熟的雌、雄亲鱼放入水温稳定在18°C以 上的同一繁殖池中，待水温升至22°C及以上时雌鱼自行排卵、雄鱼排精，精卵结合受精进行 自然繁殖后代。这种自然繁殖方法的不足之处在于一是对繁殖池的要求高，它需要在亲鱼 放养前对其清整消毒，杀死鱼池中野杂鱼、敌害生物和病原体，清塘后还要施基肥；二是受 精卵的数量少，繁殖效率低，孵化率和鱼苗的成活率很低；三是不利大规模批量生产，人为 控制难；四是难于得到未受精的卵子和早期受精的卵，一些育种方法在尼罗罗非鱼的育种 很难得到应用。专利申请号为2007101331957的罗非鱼雌雄配对繁殖方法，它是在室外池塘或水 泥池中放置网箱，挑选发育成熟的雄罗非鱼剪其上颂并用消毒液消毒后置于网箱内，再将 发育成熟的雌鱼放入其网箱内进行配对培育7-10天，在雌鱼口腔中得到受精卵。这种繁殖 方法不足之处是罗非鱼雄鱼排精的时间和罗非鱼雌鱼排卵的时间不一定却能同步。不同 步时即雄鱼排精时，雌鱼未能排卵，或是雌鱼排卵时，雄鱼未能排精。这样丧失了雌鱼卵子 受精的机会。因此，受精卵的数量少，繁殖效率不高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人工授精的尼罗罗非鱼繁殖方法；它是通过人工授精 使尼罗罗非鱼繁殖后代的方法。本发明的技术方案为
1、尼罗罗非鱼性成熟亲鱼的选择
(1)外观，成熟的尼罗罗非鱼雄鱼副性征明显，其头部、体部、尾部各鳍婚姻色即粉红色 明显，泄殖孔两个，即为肛门和尿道生殖孔，生殖孔乳突长而尖，微红。雌鱼泄殖孔为3个， 即为肛门、尿道、生殖孔。成熟的尼罗罗非鱼雌鱼副性征不是太明显，生殖孔乳突短、微红。(2)个体大小，雄性尼罗罗非鱼亲鱼个体比雌鱼大，雄性个体0.4-lkg，雌性尼罗罗 非鱼亲鱼个体在0. 2-0. 6kg。(3)催产亲鱼的选择，除上述条件外，雌亲鱼个体人工挤卵观察时(挤卵数枚)，卵 粒大小均勻，散粒，淡黄色。雄性尼罗罗非鱼挤精时，有水样乳白精液流出为佳。2、人工催产与受精
(1)催产药物的选择雄亲鱼和雌亲鱼催产药物分单用和混合使用药物两种； 单用药物是指注射用高效鱼用催产剂、鲤脑垂体(PG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促 黄体素释放激素类似物(LRH-A2)，混合使用药物是指PG与LRH-A2或LRH-A2与HCG混合使用。(2)催产剂的注射部位雄亲鱼和雌亲鱼药物催产采用一针注射或二针注射的方 式进行；一针注射是指将催产药物按各自雌鱼、雄鱼的剂量一次性的分别注射到雌鱼、雄鱼 体内胸鳍基部位；二针注射是指雌鱼第一针注射催产药物总剂量的1/6-1/3，第二针在第 一针注射8-12小时后进行，并注射其催产药物余量；雄鱼注射催产药物剂量为雌鱼催产药 物剂量的1/2 ；雄鱼在雌鱼注第二针时一次性注射；
单用的具体剂量有①高效鱼用催产剂雌鱼每千克为300-400IU (国际单位)，雄鱼每 千克为150-200 IU (国际单位);②绒毛膜促进腺激素(HCG)单用雌鱼每千克为700-800IU (国际单位)，雄鱼每千克为350-400 IU (国际单位);③促黄体素释放激素类似物(LRH-A2), 雌鱼每千克6-8微克，雄鱼每千克3-4微克；
混合剂量雌鱼每千克PG 3-4毫克+ LRH-A2 3-5微克，雄鱼每千克PG 1. 5-2毫克+ LRH-A2 1. 5-2. 5微克；或雌鱼每千克LRH-A2 1-2微克+ HCG 500-600IU，雄鱼每千克LRH-A2 0. 5-1 微克十 HCG 250-300IU ；
(3)催产水温水温25-32°C；
(4)效应时间自注射催产药物后至雌亲鱼排卵的时间为效应时间，水温25-30°C时， 效应时间12-25小时；
(5)人工授精雌、雄亲鱼自注射催产药物后放入催产池进行流水刺激，在达到效应时 间后将亲鱼捕捉，分别挤卵与排精，精液用0. 8%生理盐水液保存液稀释4-5倍后，倒入盛卵 盆的卵子中混勻并加水搅拌4-5分钟后使其充分受精，清洗受精卵，倒掉带精的水体，补加 新水后进行微流水或流水孵化；
3、人工孵化及出苗
(1)孵化用具尼罗罗非鱼为沉性卵，其孵化器具有塑料盒、孵化箱、孵化池或孵化槽；
(2)孵化要求水深一般5-10厘米，早晚各一次清洗受精卵，孵化时避免强光直射，孵 化水温为25-32°C，孵化时间在72-144小时出苗(卵黄苗)；
(3)开口饵料出苗后尼罗罗非鱼苗沉入底层，吸收自身所带的卵黄囊中的卵黄为内源 性营养，3-4天后能平游可开食，开口饵料可投喂熟蛋黄浆或幼小浮游动物轮虫或幼鳖饲料 即可。本发明的优点如下
1、本发明通过人工授精繁殖尼罗罗非鱼，使其雄鱼排精和雌鱼排卵时间同步，因而受 精卵的数量多，繁殖效率高，孵化和鱼苗的成活率高。2、本发明对开展尼罗罗非鱼的雌核发育、倍性育种及亲本建立和选育提供了技术 和方法的支撑。3、本发明对尼罗罗非鱼苗种生产从单一性的自然繁殖，或收集受精卵孵化方式向 依靠科技进步，提高繁殖效率进行转变，其对尼罗罗非鱼鱼苗种产业具有巨大的推动作用 和积极意义。
具体实施例方式以下为本发明的具体实施例 实施例一(1)选成熟的尼罗罗非鱼亲本，即选用头部、体部、尾部及各鳍为粉红色明显的雄鱼重 0.4 kg并用人工挤精时有水样乳白精液流出，选生殖孔乳突短而圆，微红的雌鱼重0.2kg 并用人工挤压数枚卵，其卵粒大小均勻、呈淡黄色。(2)用上海同医生物科技有限公司出品的注射用高效鱼用催产剂对雄鱼、雌鱼进 行注射。雌鱼注射剂量为60IU，一针注完；雄鱼注射量为60IU，一针注完。注射部位均为胸 鳍基部。(3)将雌、雄亲鱼注射后放入催产池进行流水刺激，水温为25°C在效应时间达到 25小时后检查并将成熟亲鱼捕捉，进行人工授精，即分别挤卵与排精。精液用保存液0. 8% 生理盐水稀释4倍后倒入盛卵盆卵子中混勻并加水搅拌使其充分受精4分钟后，清洗受精 卵，倒掉带精的水体，补加新水后，在水深5厘米的孵化池进行微流水或流水孵化。孵化时 避免阳光直射，孵化水温25°C，孵化时间144小时出鱼苗。实施例二
(1)选成熟的尼罗罗非鱼亲本，即选用头部、体部、尾部及各鳍为粉红色明显的雄鱼重 Ikg并用人工挤精时有水样乳白精液流出，选生殖孔乳突短而圆，微红的雌鱼重0. 6kg并用 人工挤压数枚卵，其卵粒大小均勻、呈淡黄色。(2)用绒毛腺促性腺激素(HCG)进行二针注射。雌鱼注射剂量为480IU，第一针注 射剂量为160IU，第二针在第一针注射8小时后注射320IU，注射部位为雌鱼胸鳍基部；雄 鱼注射剂量为400IU，雄鱼在雌鱼注第二针时一次性注射；注射部位为雄鱼胸鳍基部。(3)将雌、雄亲鱼注射催产药物后放入催产池进行流水刺激，催产水温32°C，在时 效时间达到12小时后将亲鱼捕捉，进行人工授精，即分别挤卵与排精。精液用0. 8%生理盐 水液稀释5倍后倒入卵子中混勻并加水搅拌使其充分受精。5分钟后，清洗受精卵，倒掉带 精的水体，加新水后，在水深10厘米的孵化池进行微流水或流水孵化。孵化时避免阳光直 射，孵化水温32°C，孵化时间72小时出鱼苗。实施例三
(1)选成熟的尼罗罗非鱼亲本，即选用头部、体部、尾部及各鳍为粉红色明显的雄鱼重 Ikg并用人工挤精时有水样乳白精液流出，选生殖孔乳突短而圆，微红的雌鱼重0. 6kg并用 人工挤压数枚卵，其卵粒大小均勻、呈淡灰色。(2)用鲤脑垂体(PG) +促营体释放激素类似物(LRH-A2)混合进行一针注射。雌 鱼注射剂量为PG 2. 4毫克+ LRH-A2 3微克，一针注完，注射部位为雌鱼胸鳍基部；雄鱼注 射量为PG 2毫克+ LRH-A2 2. 5微克混合后，一针注完，注射部位为雄鱼胸鳍基部。(3)将雌、雄亲鱼注射催产药物后放入催产池进行流水刺激，催产水温28°C，在时 效时间达到20小时后将亲鱼捕捉，进行人工授精，即分别挤卵与排精。精液用0. 8%生理盐 水液稀释5倍后倒入卵子中混勻并加水搅拌使其充分受精。5分钟后，清洗受精卵，倒掉带 精的水体，加新水后，在水深10厘米的孵化池进行微流水或流水孵化。孵化时避免阳光直 射，孵化水温280C，孵化时间100小时出鱼苗。实施例四
(1)选成熟的尼罗罗非鱼亲本，即选用头部、体部、尾部及各鳍为粉红色明显的雄鱼重 Ikg并用人工挤精时有水样乳白精液流出，选生殖孔乳突短而圆，微红的雌鱼重0. 6kg并用 人工挤压数枚卵，其卵粒大小均勻、呈淡灰色。
(2 )用促黄体释放激素类似物(LRH-A2) +绒毛膜促性腺激素(HCG)混合进行二针 注射。雌鱼注射剂量为LRH-A2 1. 2微克+ HCG 360IU混合二针注射，第一针LRH-A2 0. 2微 克与HCG 60IU混合注射，第二针在第一针注12小时后注射LRH-A2I微克与HCG 3000IU混 合注射，注射部位为雌鱼胸鳍基部；雄鱼注射剂量为LRH-A2 1微克+HCG 300IU混合二针注 射，雄鱼在雌鱼注第二针时一次性注射；注射部位为雄鱼胸鳍基部。(3)将雌雄亲鱼注射催产药物后放入催产池进行流水刺激，催产水温25°C，在效应 时间达到30小时后将亲鱼捕捉，进行人工授精，即分别挤卵与排精。精液用0. 8%生理盐水 液稀释5倍后倒入卵子中混勻并加水搅拌使其充分受精。5分钟后，清洗受精卵，倒掉带精 的水体，加新水后，在水深10厘米的孵化池进行微流水或流水孵化。孵化时避免阳光直射， 孵化水温30°C，孵化时间90小时出鱼苗。
权利要求
1. 一种涉及到水产鱼苗技术的一种人工授精的尼罗罗非鱼繁殖方法其特征是(1)尼罗罗非鱼性成熟亲鱼的选择选择成熟的副性征明显的雄亲鱼个体0.4-lkg，选 择成熟的雌亲鱼个体在0. 2-0. 6kg，并对雌鱼进行人工挤卵数枚观察，卵粒大小均勻，淡黄 色、散粒，对雄亲鱼挤精时，有水样乳白精液流出；(2)人工催产与受精催产药物的选择雄亲鱼和雌亲鱼催产药物分单用和混合使用药物两种，单用药物是 指注射用高效鱼用催产剂、鲤脑垂体(PG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促营体素释放激素 类似物(LRH-A2),混合使用药物是指PG与LRH-A2或LRH-A2与HCG混合使用； 催产剂的注射部位雄亲鱼和雌亲鱼药物催产采用一针注射或二针注射的方式进行； 一针注射是指将催产药物按各自雌鱼、雄鱼的剂量一次性的分别注射到雌鱼、雄鱼体内胸 鳍基部位；二针注射是指雌鱼第一针注射催产药物总剂量的1/6-1/3，第二针在第一针注 射8-12小时后进行，并注射其催产药物余量；雄鱼注射催产药物剂量为雌鱼催产药物剂量 的1/2，雄鱼在雌鱼注第二针时一次性注射； 其注射部位为雌鱼、雄鱼各自的胸鳍基部位，单用的具体剂量有①高效鱼用催产剂雌鱼每千克为300-400IU (国际单位)，雄鱼每 千克为150-200 IU (国际单位)；②绒毛膜促进腺激素(HCG)雌鱼每千克为700-800IU (国 际单位)，雄鱼每千克为350-400 IU (国际单位)；③促黄体素释放激素类似物(LRH-A2)雌 鱼每千克6-8微克，雄鱼每千克3-4微克，混合剂量雌鱼每千克PG 3-4毫克+ LRH-A2 3-5微克，雄鱼每千克PG 1. 5-2毫克+ LRH-A2 1. 5-2. 5微克；或雌鱼每千克LRH-A2 1-2微克+ HCG 500-600IU，雄鱼每千克LRH-A2 0. 5-1 微克+ HCG 250-300IU, 催产水温水温25-32 °C，效应时间水温25-30°C时，效应时间12-25小时，人工授精雌、雄亲鱼注射后放入催产池进行流水刺激，在达到效应时间后将亲鱼捕 捉，分别挤卵与排精，精液用0. 8%生理盐水液保存液稀释4-5倍后，倒入卵子中混勻并加水 搅拌4-5分钟后使其充分受精，清洗受精液，倒掉带精的水体，加新水后进行微流水或流水 孵化；(3)人工孵化及出苗孵化用具尼罗罗非鱼为沉性卵，其孵化器具有塑料盒、孵化箱、孵化池或孵化槽， 孵化要求水深一般5-10厘米，早晚各一次清洗受精卵，孵化时避免强光直射，孵化水 温为25-32°C，孵化时间在72-144小时出苗(卵黄苗)，开口饵料出苗后尼罗罗非鱼苗沉入底层，吸收自身所带的卵黄囊中的卵黄为内源性 营养，3-4天后能平游即可开食，开口饵料可投喂熟蛋黄浆或幼小浮游动物轮虫或幼鳖饲 料。
全文摘要
一种涉及到水产鱼苗技术的一种人工授精的尼罗罗非鱼繁殖方法，它是将催产药物分别注入尼罗罗非鱼雄鱼和雌鱼后，使雄鱼排出精子，并收集后用0.8%生理盐水液保存液稀释4-5倍后与雌鱼排出的卵子混合搅拌3-5分钟，使卵子受精，再将受精卵孵化成鱼苗。本发明能大幅度提高尼罗罗非鱼的繁殖效率及孵化率和鱼苗的成活率，对开展尼罗罗非鱼的雌核发育、倍性育种以及家系的建立和选育提供了技术和方法的支撑。
文档编号A01K61/00GK101999332SQ20101056023
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月26日 优先权日2010年11月26日
发明者李忠, 杨永铨, 梁宏伟, 罗相忠, 邹桂伟 申请人:中国水产科学研究院长江水产研究所