专利名称：脑脊液多次采集手术模型的构建方法
技术领域：
本发明涉及脑脊液采集方法领域，具体涉及一种脑脊液多次采集手术模型的构建 方法。
背景技术：
脑脊液(Cerebrospinal fluid, CSF)是充满在各脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管 内的无色透明的液体，性质与血浆和淋巴液的性质相似，略带粘性，用于供应脑细胞一定的 营养、运走脑组织的代谢产物、调节中枢神经系统的酸碱平衡并缓冲脑和脊髓的压力，对脑 和脊髓具有保护和支持作用。因此研究药物是否能有效的通过血脑屏障可以通过检测药物 在脑脊液中的含量来探索。
脑脊液的采集为临床试验与非临床研究共同的手术难题，脑是哺乳动物生命中枢 和许多重要中枢聚集的场所，所以即使颅内富含着脑脊液，为保证生命安全，在临床试验中 脑脊液的采集方法往往选择穿刺脊椎法。目前脑脊液的采集多为一次性采集，且动物模型 以大、小鼠为主。在非临床研究中，大多数实验选择用穿刺针从实验动物颈部刺入，到达延 髓池采集。
在做药物在机体内的代谢动力学研究时，多采用分批采集不同个体动物的方法满 足多时间点的药物数据。这种代替方法限制了药动学/药效学(Η /PD)试验的科学性。因 此利用犬或其他动物建立新的类非啮齿动物脑脊液多次采集手术模型对生物医药研究显 得尤为重要。发明内容
本发明提供了一种脑脊液多次采集手术模型的构建方法，该方法操作简单，易于 控制，实现了对脑脊液的多次采集。
一种脑脊液多次采集手术模型的构建方法，包括以下步骤
将动物麻醉后，在动物颅骨平面结构上定位手术钻孔，在所述的钻孔中经外套管 穿刺针穿刺、埋入引流管并固定引流管，通过引流管多次采集脑脊液。
所述的钻孔的直径不宜太大，以避免造成过大的创面，优选为2mm 5mm。
为保证穿刺针顺利通过颅骨，并准确到达小脑窝，所述的钻孔对准生理狭缝，钻孔 的方向应与穿刺方向一致。
所述的钻孔优选位于颅骨平面中心。
所述的外套管穿刺针穿刺前在针内填充钝头内针，针头放至已钻好的孔内，穿刺 时穿刺针沿生理狭缝向下方30° 45°刺入到达小脑窝，深入约3 5cm。
所述的穿刺针针头到达小脑窝后拔出内针，将引流管插入针孔内，固定引流管将 穿刺针缓缓拔出，用医用生物胶固定引流管颅骨外端部分，露出数厘米引流管以备采集脑 脊液，缝合肌肉和头皮，保证引流管固定牢固，内部通畅。犬术后恢复12小时以上。
所述的引流管可选用引流聚乙烯塑料(PE)管。
所述的动物为非啮齿类动物，优选为犬。
所述的采集脑脊液的时间为动物恢复12小时以上，采集脑脊液所用的装置可为注射器等抽取式装置。
与现有技术相比，本发明具有如下优点
本发明方法实现了在小脑窝处采集脑脊液，因为小脑窝是颅内一个较大的空腔， 其储存脑脊液能力相对较高；并且小脑窝为颅骨最下端的低洼空腔，手术钻孔在颅骨上方， 因此无论动物清醒状态或是麻醉状态脑脊液都不会因手术缺口而流失。
本发明方法为毒代、药代等药理试验提供了更加有效合理的脑脊液采集新模型， 实现了对脑脊液的多次采集。该方法中动物的手术存活率可达80%，模型成功率可达 60%，说明该模型构建方法设计合理，有利于脑脊液的多次采集。
图1为犬头部骨骼的俯视结构示意图2为犬头部骨骼的侧面结构示意其中，1为额骨；2为颧骨颞突；3为眼窝；4为顶间骨；5为顶骨；6为钻孔处；7为 颞骨颧突；8为咬肌窝；9为部分小脑窝；10为剩余小脑窝。
具体实施方式
现将本发明的具体实施例进一步叙述于后。
实施例1
如图1和图2所示，犬头部骨骼的结构包括额骨1 ；颧骨颞突2 ；眼窝3 ；顶间骨 4 ；顶骨5 ；钻孔处6 ；颞骨颧突7 ；咬肌窝8 ；小脑窝9和10。
Beagle犬静脉注射3%的戊巴比妥钠溶液(lml/kg)麻醉后，俯卧固定于手术台 上。喉咙处用软枕垫起使枕骨朝上，固定Beagle犬头部。以Beagle犬枕骨为中心，将犬枕 骨左后侧毛剃去。用手术刀在离枕骨2 3cm处剃毛区域划开一条2cm左右的横向切口。 用手术分离器械钝性分离犬颅骨平面上方筋膜暴露颅骨上方肌肉群。顺着肌肉纹路垂直颅 骨平面向下分离肌肉直至颅骨暴露。确定颅骨平面中心即钻孔处6，用颅骨钻在中心钻出 2 5mm的孔，孔周围为直径2cm左右的颅骨平面。为保证穿刺针顺利通过颅骨，并准确到 达小脑窝9或10，钻孔方向应与穿刺方向一致，钻孔对准生理狭缝，犬脑组织中小脑与大脑 链接处为生理狭缝。
使用外套管外径为1. 6mm穿刺针，穿刺前在针内填充钝头内针，针头放至已钻好 的孔内，穿刺时穿刺针沿生理狭缝向下方30 45°刺入到达小脑窝，深入约3 5cm。
当穿刺针头到达小脑窝后拔出内针，可以看见脑脊液从针孔中溢出(颅内压作 用)。将引流管插入针孔内，固定引流管将穿刺针缓缓拔出，用医用生物蛋白胶固定引流管 颅骨外端部分，露出数厘米引流管以备采集脑脊液。手术部位洒入抗生素，缝合肌肉和头 皮，麻醉状态下头部低位放置。封住引流管开口端，防止脑脊液外溢。术后隔日伤口护理。
术后12小时，打开引流管封口，将注射器插入引流管，抽取50μ1管内液体舍去。 待脑脊液自行从引流管渗出；即时采取脑脊液可用注射器缓慢抽取。术后每日抽取脑脊液 用于检查脑脊液手术成功率，共观察7天。抽取量设置为第1天(术后麻醉状态分点采集)4. 5ml ；清醒后0. 5ml ；其余13天每天抽取0. 5ml。
手术成功率以Beagle犬术后健康存活为准。模型成功率通过术后Beagle犬可连 续采集不被血液污染脑脊液为成功标准。10只Beagle犬手术，手术成功率80%。手术后 每日采集脑脊液，7天均可顺利采集到脑脊液，模型成功率为60%。
实施例2
如实施例1中所述方法构建模型动物4只。取某可穿透血脑屏障的药物乙二胺 (EDA)注射液，药物配置于质量百分浓度为0. 9%的NaCl注射液中，按药物lmg/kg/h的速 度静脉滴注至汕。并在给药0、30、60和180min (给药结束)及停药后0. 5、1、2、3和4h定 时采取2ml全血和0. 3ml脑脊液。应用所建立的方法检测生物样品中的EDA浓度。应用 DAS 2.0药代动力学软件分析结果。由药动学结果可知，在以静脉滴注方式给予Beagle犬 3mg/kg药物后，EDA以三室模型的方式消除。
权利要求
1.一种脑脊液多次采集手术模型的构建方法，包括以下步骤将动物麻醉后，在动物颅骨平面结构上定位手术钻孔，在所述的钻孔中经外套管穿刺 针穿刺、埋入引流管并固定引流管，通过引流管多次采集脑脊液。
2.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 钻孔的直径为2mm 5mm。
3.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 钻孔对准生理狭缝，钻孔的方向与穿刺方向一致。
4.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 钻孔位于颅骨平面中心。
5.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 外套管穿刺针穿刺前在针内填充钝头内针，针头放至已钻好的孔内，穿刺时穿刺针沿生理 狭缝向下方30° 45°刺入到达小脑窝，深入3cm 5cm。
6.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 外套管穿刺针针头到达小脑窝后拔出内针，将引流管插入针孔内，固定引流管将穿刺针缓 缓拔出，用医用生物胶固定引流管颅骨外端部分，露出数厘米引流管以备采集脑脊液，缝合 肌肉和头皮，保证引流管固定牢固，内部通畅。
7.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 动物为非啮齿类动物。
8.根据权利要求7所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 动物为犬。
9.根据权利要求1所述的脑脊液多次采集手术模型的构建方法，其特征在于，所述的 采集脑脊液的时间为动物恢复12小时以上。
全文摘要
本发明公开了一种脑脊液多次采集手术模型的构建方法，包括以下步骤将动物麻醉后，在动物颅骨平面结构上定位手术钻孔，在所述的钻孔中经外套管穿刺针穿刺、埋入引流管并固定引流管，通过引流管多次采集脑脊液。该方法为毒代、药代等药理试验提供了更加有效合理的脑脊液采集新模型，实现了对脑脊液的多次采集。该方法中动物的手术存活率可达80％，模型成功率可达60％，说明该模型构建方法设计合理，有利于脑脊液的多次采集。
文档编号A61D1/00GK102038560SQ20101061012
公开日2011年5月4日 申请日期2010年12月28日 优先权日2010年12月28日
发明者卢祺炯, 周国亮, 宣尧仙, 张升, 张城达, 徐潘生, 温磊, 辛艳飞, 陈国灿, 顾利强 申请人:浙江省医学科学院