专利名称：一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及水产饲料添加剂加工方法领域，尤其涉及到一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法。
背景技术：
香菇多糖是从香菇中提取的有效活性成分，主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，还含有大量的可转变为维生素D的麦角留醇和菌留醇，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97. 5%，对艾氏癌的抑制率为80%。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。此外香菇多糖还能 提高机体的超氧化物歧化酶(SOD)的活性，并具有清除自由基的作用。肽是介于氨基酸与蛋白质之间的一种生化物质，它比蛋白质分子量小，比氨基酸分子量大，是蛋白质的一个片段。由两个以上以至多达几十个氨基酸肽键相连聚合成肽，再由多个肽以侧链相接聚合成蛋白质。两个以上的氨基酸之间以肽键相连，形成的“氨基酸链”或“氨基酸串”就叫做肽。其中，10个以上氨基酸组成的肽被称为多肽，而由2至9个氨基酸组成的就叫做寡肽，由2至4个氨基酸组成的就叫做小分子肽或小肽。据报道小分子肽能够通过细胞膜的渗透以原形直接进入细胞内，而不需要再次消化，也不需要耗费能量，因此小分子肽的吸收、转化和利用具有高效、完全、彻底的特点。小分子肽有很强的生物活性，参与酶的合成，激发酶的活性，强化酶的功能，维持酶的稳定；通过合成特异蛋白质，产生特殊的生理效应。小分子肽对于细胞的作用是双重的，即可以补充营养需求修复缺损，又可以改善功能状态。现有水产饲料添加剂大多不能很好地提高饲养动物的免疫能力，成为水产饲料加工制造的一个限制因素。绿色水产饲料添加剂的研究开发也是进年来该行业的发展方向，确保饲养动物绿色、环保是水产养殖行业的首要问题。本发明利用香菇柄下脚料和水产加工下脚料为原料，经发酵而成富含香菇多糖和小分子肽的水产饲料添加剂，原料取材本身就体现了变废为宝，安全环保的宗旨，同时本发明生产的饲料添加剂能够较好地提高饲养动物的免疫力。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处而提供一种工艺简单、变废为宝、制作方便的含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法。本发明是通过如下方式实现的一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于具体步骤如下一 .香菇多糖制备(一)、香菇柄超微粉碎处理
取已干燥的香菇柄下脚料，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65°C鼓风干燥48h后，再进行超微粉碎处理；( 二)、液态产酶培养及酶液的制备用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置28°C的生化培养箱(或摇床)中培养72h ;取混合培养液进行低速离心(或定性滤纸过滤)，得上清液即为所需酶液；(三)、香菇柄糖化液的制备取经超微粉碎后的香菇柄粉末，与步骤(二)中的酶液进行酶解，去除酶解产物中的大颗粒残渣即得香菇柄糖化液；
(四)香菇多糖溶液制备将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液；二.小分子肽制备(一)、取水产品加工下脚料，去除杂质后，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆；(二)、将步骤(一)所得的匀浆加入海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解后得到酶解液；(三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液；(四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液；(五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用；三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 5 10，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。所述的马铃薯液体培养基的制备方法为将马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min，用纱布过滤，所得滤液加葡萄糖，补足水至100ml，装入三角瓶。所述的海洋低温碱性蛋白酶能水解水产品加工下脚料中的蛋白质，释放出小分子肽，同时水解产生的油脂可用于饲料生产。所述的用蝶式离心机离心的过滤液的上层油脂干燥后可用于饲料生产。本发明利用香菇多糖能够提高超氧化物歧化酶活性及其他多种生物学功能，具有免疫调节作用，同时也能够激活小分子肽的生物学活性的特点。小分子肽也具有多种生物学效应，用于饲料添加剂不仅能发挥香菇多糖和小分子肽自身的作用，同时彼此有一个协同增强的作用，能较大地提高免疫能力。香菇多糖和小分子肽自身的营养价值也能提高饲料效率。香菇柄下脚料和水产加工下脚料一般都低值化处理，极大地浪费了资源，本发明将其充分回收利用，大大地提高了经济效益。同时本发明生产的水产饲料添加剂能够很好地提高饲养动物的免疫能力，降低饵料系数。本发明优点在于
I、生产工艺简单，操作方便。2、有效地回收被浪费的资源。3、提高饲养动物的免疫能力，降低饵料系数。
具体实施例方式现详述本发明
具体实施例方式一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于具体步骤如下一 .香菇多糖制备 (一)、香菇柄超微粉碎处理取已干燥的香菇柄下脚料，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65°C鼓风干燥48h后，再进行超微粉碎处理；( 二)、液态产酶培养及酶液的制备用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置28°C的生化培养箱(或摇床)中培养72h ;取混合培养液进行低速离心(或定性滤纸过滤)，得上清液即为所需酶液；(三)、香菇柄糖化液的制备取经超微粉碎后的香菇柄粉末，与步骤(二)中的酶液进行酶解，去除酶解产物中的大颗粒残渣即得香菇柄糖化液；(四)香菇多糖溶液制备将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液；二 .小分子肽制备(一)、取水产品加工下脚料，去除杂质后，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆；(二)、将步骤(一)所得的匀浆加入海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解后得到酶解液；(三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液；(四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液；(五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用；三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 5 10，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。所述的马铃薯液体培养基的制备方法为将马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min，用纱布过滤，所得滤液加葡萄糖，补足水至100ml，装入三角瓶。所述的海洋低温碱性蛋白酶能水解水产品加工下脚料中的蛋白质，释放出小分子肽，同时水解产生的油脂可用于饲料生产。
所述的用蝶式离心机离心的过滤液的上层油脂干燥后可用于饲料生产。本发明利用香菇多糖能够提高超氧化物歧化酶活性及其他多种生物学功能，具有免疫调节作用，同时也能够激活小分子肽的生物学活性的特点。小分子肽也具有多种生物学效应，用于饲料添加剂不仅能发挥香菇多糖和小分子肽自身的作用，同时彼此有一个协同增强作用，能较大地提高免疫能力。香菇多糖和小分子肽自身的营养价值也能提高饲料效率。香菇柄下脚料和水产加工下脚料一般都低值化处理，极大地浪费了资源，本发明将其充分回收利用，大大地提高了经济效益。同时本发明生产的水产饲料添加剂能够很好地提高饲养动物的免疫能力，降低饵料系数。具体实施例一—.香燕多糖制备
(一)、香菇柄超微粉碎处理取已干燥的香菇柄下脚料lOOOg，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65°C鼓风干燥48h后，以2kg IT1的加料速度在进行超微粉碎处理，粉碎机的工作压力为I. OMpa，进料压力0. 3Mpa，气量为I. 8m3. mirT1 ；( 二 )、液态产酶培养及酶液的制备用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置28°C的生化培养箱(或摇床)中培养72h ;取混合培养液进行低速离心(或定性滤纸过滤)，得上清液即为所需酶液； (三)、香菇柄糖化液的制备取经超微粉碎后的香菇柄，与步骤(二)中的酶液进行酶解，所述的经超微粉碎后的香菇柄与步骤(二)中的酶液质量体积比为Ikg 150ml，酶解温度为28°C，pH值为4. 5 ；酶解产物经去除大颗粒残渣即得香菇柄糖化液；(四)香菇多糖溶液制备将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液；二 .小分子肽制备(一 )、取水产品加工下脚料，去除杂质后称重2000g，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆；( 二)、将步骤(一)所得的匀浆加入5000U/kg海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解控制反应温度在18°C，反应pH为6. 8，酶解4天后得到酶解液；(三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液；(四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液；(五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用；三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 5，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。
具体实施例二 一.香菇多糖制备(一)、香菇柄超微粉碎处理取已干燥的香菇柄下脚料lOOOg，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65°C鼓风干燥48h后，以2kg IT1的加料速度在进行超微粉碎处理，粉碎机的工作压力为I. OMpa，进料压力0. 3Mpa，气量为I. 8m3. mirT1 ；( 二 )、液态产酶培养及酶液的制备用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置28°C的生化培养箱(或摇床)中培养72h ;取混合培养液进行低速离心(或定性滤纸过滤)，得上清液即为所需酶液； (三)、香菇柄糖化液的制备取经超微粉碎后的香菇柄粉末，与步骤(二)中的酶液进行酶解，所述的经超微粉碎后的香菇柄与步骤(二)中的酶液质量体积比为Ikg 300ml，酶解温度为30°C，pH值为5. 0 ;酶解产物经去除大颗粒残渣即得香菇柄糖化液；(四)香菇多糖溶液制备将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液；二 .小分子肽制备(一 )、取水产品加工下脚料，去除杂质后称重2000g，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆；( 二)、将步骤(一)所得的匀浆加入7000U/kg海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解控制反应温度在20°C，反应pH为7. 0，酶解4天后得到酶解液；(三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液；(四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液；(五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用；三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 7，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。具体实施例三一.香菇多糖制备(一)、香菇柄超微粉碎处理取已干燥的香菇柄下脚料lOOOg，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65°C鼓风干燥48h后，以2kg IT1的加料速度在进行超微粉碎处理，粉碎机的工作压力为I. OMpa，进料压力0. 3Mpa，气量为I. 8m3. mirT1 ；(二 )、液态产酶培养及酶液的制备用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置28°C的生化培养箱(或摇床)中培养72h ;取混合培养液进行低速离心(或定性滤纸过滤)，得上清液即为所需酶液；(三)、香菇柄糖化液的制备取经超微粉碎后的香菇柄粉末，与步骤(二)中的酶液进行酶解，所述的经超微粉碎后的香菇柄与步骤(二)中的酶液质量体积比为Ikg 500ml，酶解温度为33°C，pH值为5. 5 ;酶解产物经去除大颗粒残渣即得香菇柄糖化液；(四)香菇多糖溶液制备将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液；二.小分子肽制备(一 )、取水产品加工下脚料，去除杂质后称重2000g，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆；二)、将步骤(一)所得的匀浆加入8000U/kg海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解控制反应温度在22°C，反应pH为7. 3，酶解4天后得到酶解液；(三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液；(四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液；(五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用；三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 10，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。本发明的实验数据采用实施例一方法制备的饲料添加剂进行以下试验，可见本发明所述的饲料添加剂能提高动物肌体抗病、抗不良环境的免疫能力，提高了成活率，降低了饵料系数，达到很好的经济效益。试验I苗期添加实施例一方法制备的饲料添加剂喂养的效果试验某处养殖场设三个处理实验，饲养期110天每口池；试验结果见表I:表I南美白对虾苗期添加实施例一制备的饲料添加剂试验
权利要求
1.一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于 具体步骤如下 一 香燕多糖制备 (一)、香菇柄超微粉碎处理 取已干燥的香菇柄下脚料，粗粉碎过60目筛得香菇柄粗粉，过60目筛的香菇柄粗粉，经过65 °C鼓风干燥48h后，再进行超微粉碎处理； (二)、液态产酶培养及酶液的制备 用接种环刮I环绿色木霉孢子接种到含马铃薯液体培养基的三角瓶中，混匀，放置.280C的生化培养箱或摇床中培养72h ;取混合培养液进行低速离心或定性滤纸过滤，得上清液即为所需酶液； (三)、香菇柄糖化液的制备 取经超微粉碎后的香菇柄粉末，与步骤(二)中的酶液进行酶解，去除酶解产物中的大颗粒残渣即得香菇柄糖化液； (四)香菇多糖溶液制备 将步骤(三)中所得香菇柄糖化液经双层过滤后，所得滤液通过静置过夜自动分层、离心，所得的上清液即为香菇多糖溶液； 二.小分子肽制备 (一)、取水产品加工下脚料，去除杂质后，加入水，然后利用组织匀浆机破碎匀浆； (二)、将步骤(一)所得的匀浆加入海洋低温碱性蛋白酶，进行酶解，酶解后得到酶解液； (三)、将步骤(二)的酶解液经筛网过滤，过滤后得到过滤液； (四)、将步骤(三)的过滤液用蝶式离心机进行离心过滤，得上清液； (五)、将步骤(四)的上清液，进行二次超滤浓缩，制得小分子肽溶液，并加入稳定剂备用; 三.含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备 将步骤一所得香菇多糖溶液与步骤二所得小分子肽溶液充分混合，香菇多糖溶液与小分子肽溶液体积比为I : 5 10 (即比值为1/10 1/5)，进行喷雾干燥，干燥后即得含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂。
2.根据权利要求I所述的一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述的马铃薯液体培养基的制备方法为将马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min，用纱布过滤，所得滤液加葡萄糖，补足水至100ml，装入三角瓶。
3.根据权利要求I所述的一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述的海洋低温碱性蛋白酶能定向水解水产品加工下脚料中的蛋白质，释放小分子肽，同时水解产生的油脂可用于饲料生产。
4.根据权利要求I所述的一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述的用蝶式离心机离心的过滤液的上层油脂干燥后可用于饲料生产。
全文摘要
本发明公开了一种含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂的制备方法；采用已干燥的香菇柄下脚料和水产品加工下脚料作为原料制成含香菇多糖和小分子肽的饲料添加剂；本发明将香菇柄下脚料和水产加工下脚料充分回收利用，且大大地提高了经济效益。同时本发明生产的水产饲料添加剂能够很好地提高饲养动物的免疫能力，降低饵料系数。
文档编号A23K1/10GK102742726SQ20111010216
公开日2012年10月24日 申请日期2011年4月22日 优先权日2011年4月22日
发明者吴云通, 李庆华, 林鸿荣, 黄贞胜 申请人:福建大昌生物科技实业有限公司