专利名称：中熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法。
背景技术：
目前我国脱毒马铃薯原原种产业化生产是通过组培快繁技术生产马铃薯脱毒基础苗，再将其进行移栽炼苗生产微型薯。而MS培养基是目前马铃薯脱毒基础苗工业化扩繁广泛采用的培养基，其琼脂用量过高，有的甚至到1. 7%，且琼脂成本较高，基础苗生长在过硬的基质环境下，茎脆根柔性较差，造成基础苗长势差，基础苗扩繁一代需要25天左右，移栽炼苗前，从瓶中取出基础苗，倒入温水中，将根部周围的琼脂洗掉，琼脂较硬洗根时根易损伤，影响移栽成活率。未按品种成熟期选用培养基，加大了工业化生产成本，使基础苗生长势较差。在培养期间增加了药品成本及用电损耗，且基础苗生长势较差，质量不好，对工业化生产不利。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基，采用该培养基的脱毒基础苗生产周期短、生长旺盛、生产成本低。本发明的目的之二是提供一种上述中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是。一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于，以IL培养基计算含有1890 1910mg 的 KNO3>169 17Img 的 KH2PO4,369 371mg 的 MgSO4 · 7H20、439 44Img 的 CaCl2 · 2Η20、22· 27 22. 23mg 的 MnSO4 · 4Η20、0· 827 0. 833mg 的 KI,6. 17 6. 23mg 的 H3BO3>8. 57 8. 63mg 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 247 0. 253mg 的 Na2MoO4 ·Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CuSO4 · 5Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CoCl2 · 6H20、37. 0 37. 3mg 的 Na2 · EDTA 和 26 28mg 的 FeSO4 ·7Η20、1· 99 2. Olmg 甘氨酸、0. 09 0. Ilmg 的 VB1^O. 49 0. 5Img 的 VB6, 以及0. 49 0. 5Img的或VPP ；余量为水。其中还含有402. 5 422. 5mg 的 NH4NO ；其中还含有24900 25100mg的C源蔗糖。一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特别之处在于，包括如下步骤(1)培养基基本母液的配制a、制备大量元素母液取18900 19100mg 的 KN03、1690 1710mg 的 KH2P04、3690 3710mg 的 MgSO4 · 7H20和4390 4410mg的CaCl2 · 2H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入IL容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；b、制备微量元素母液取2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 Η3Β03、857 863mg 的 ZnSO4 ·7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 ·Η20、2· 47 2. 53mg 的 CuSO4 ·5Η20、 和2. 47 2. 53mg的CoCl2 · 6H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；C、制备铁盐母液取370 373mg的Na2 · EDTA和260 280mg的FeSO4 · 7H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；d、制备1号有机物母液取199 20Img 甘氨酸、9 Ilmg 的 VB”49 5Img 的 VB6JP 49 5Img 的 VB5 或 VPP,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；按每升培养基分别量取IOOmL大量元素母液、铁盐母液，以及IOmL微量元素母液和1号有机物母液，放入烧杯中备用；(2)按每L培养基加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2. 49 2. 51%，卡拉胶质量浓度达到0. 5%，加热80-121°C搅拌均勻；(4)用氢氧化钠或盐酸将pH值调到5. 8 6. 0，即完成固体培养基的制备；(5)装瓶后高压灭菌即可。其中C源为蔗糖，加入量为24900 25100mg。其中在大量元素母液中还加入4025 4225mg的ΝΗ4Ν03。其中调节pH值是用lmol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中， 滴后搅拌均勻，重复该过程直至PH值调到5. 8 6. 0，即完成固体培养基的制备。其中装瓶后高压灭菌是将配好的固体培养基，每瓶装30 40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内，121°C灭菌15 19. 5分钟后取出即可。与背景技术相比，本发明的培养基中不仅营养组分和成分减少，而且用低成本的卡拉胶代替琼脂作为凝固剂后，试管苗生长旺盛且周期缩短，从而有效减少了育苗中的能耗和成本。
具体实施例方式实施例1 脱毒中熟马铃薯试管苗培养基重量组分原料制取如下a、大量元素母液(母液1)组成18900 19IOOmg硝酸钾(KNO3) >4025 4225mg 硝酸铵(NH4NO3)、1690 17IOmg 磷酸二氢钾(KH2PO4) ,3690 37IOmg硫酸镁(MgSO4 ·7Η20)、 4390 4410mg氯化钙(CaCl2 ·2Η20)，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入IL容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；b、微量元素母液(母液 2)组成2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 H3BO3>857 863mg 的 ZnSO4 · 7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 · H2O, 2. 47 2. 53mg的CuSO4 · 5H20、和2. 47 2. 53mg的CoCl2 · 6H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；
C、铁盐母液组成(母液3) 370 37!3mg乙二胺四乙酸二钠(Na2 · EDTA)、260 ^Omg硫酸亚铁(FeSO4 ·7Η20)，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中， 再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存、备用；d、l号有机物母液组成(母液4) :199 201mg甘氨酸、9 Ilmg的VB1Jg-Slmg 的VB6、和49 51mg的VB5或VPP，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存、备用；分别按照每升培养基量取IOOmL母液1、母液3，量取IOmL母液2、母液4，放入烧杯中备用(2)按每L培养基共加5g卡拉胶，用天平称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2. 49 2. 51%，卡拉胶质量浓度达到0. 5%，加热80-121°C搅拌均勻；(4)用lmol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中，滴后搅拌均勻，重复该过程直至PH值调到5. 8 6. 0，即完成固体培养基的制备；(5)将配好的培养基，每瓶装30 40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内，121°C灭菌 15 19. 5分钟，可完成培养基的制备。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标 单株苗鲜重^ang、干重12. ^ig、株高6. 77cm、茎粗1. 03mm、叶片数5. 5、根条数8. 4条、根长 5. 41cm。实施例2:本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为4750mg、硝酸铵(NH4N03)为Omg，蔗糖含量为1. 5%.在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重62mg、干重3. 5mg、株高4. 69cm、茎粗1.09mm、叶片数5. 1、根条数5.0 条、根长3. 68cm。实施例3 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为4750mg，母液4中肌醇含量为2500mg，蔗糖含量为2%。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重135mg、干重6. 4mg、株高5. 59cm、茎粗0. 90mm、叶片数6. 4、根条数5. 4 条、根长5. 29cm。实施例4 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为4750mg、硝酸铵(NH4N03)为8250mg，母液4中肌醇含量为5000mg。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重2(Mmg、干重9. 6mg、株高6. 41cm、茎粗1. 26mm,叶片数6. 9、根条数6. 8 条、根长5. 55cm。实施例5 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为9500mg、硝酸铵(NH4N03)为Omg，母液4中肌醇含量为2500mg。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重129mg、干重6. 9mg、株高4. 92cm、茎粗0. 92mm、叶片数5. 3、根条数6. O 条、根长4. 42cm。实施例6 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为9500mg，母液4中肌醇含量为5000mg，蔗糖含量为1. 5%。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重45mg、干重3. Omg、株高3. 81cm、茎粗0. 95mm、叶片数5. 6、根条数3. 5 条、根长3. 27cm。实施例7 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸钾(KN03)含量为9500mg、硝酸铵(NH4NCX3)为8250mg，蔗糖含量为2. 0%。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重80mg、干重4. 7mg、株高4. 43cm、茎粗1. 17mm、叶片数4. 8、根条数4.4 条、根长3. 12cm。实施例8 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸铵(NH4N03)为Omg，母液4中肌醇含量为5000mg，蔗糖含量为2. 0%。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重7;3mg、干重4. 8mg、株高4. 21cm、茎粗0. 79mm、叶片数4. 7、根条数3. 6 条、根长3. 85cm。实施例9 本实施例与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸铵(NH4N03)为8250mg，母液 4中肌醇含量为2500mg，蔗糖含量为1. 5%。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重13;3mg、干重6. 8mg、株高7. 68cm、茎粗1. 12mm、叶片数6. 3、根条数7. 3 条、根长3. 71cm。实施例10 本实施例(MS培养基)与实施例1的区别在于每升母液1中硝酸铵(NH4N03)为 16500mg，母液4中肌醇含量为lOOOOmg。在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标分别为单株苗鲜重83mg、干重8. ;3mg、株高4. 6cm、茎粗1. 07mm、叶片数4. 2、根条数4. 6条、 根长4. 7cm。经试验证明，本发明的培养基成本低于目前生产上广泛使用的MS (CK) 21.7%。
权利要求
1.一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于，以IL培养基计算含有1890 1910mg 的 KNO3>169 17Img 的 KH2PO4,369 371mg 的 MgSO4 · 7H20、439 44Img 的 CaCl2 · 2Η20、22· 27 22. 23mg 的 MnSO4 · 4Η20、0· 827 0. 833mg 的 KI,6. 17 6. 23mg 的 H3BO3>8. 57 8. 63mg 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 247 0. 253mg 的 Na2MoO4 ·Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CuSO4 · 5Η20、0· 0247 0. 0253mg 的 CoCl2 · 6H20、37. 0 37. 3mg 的 Na2 · EDTA 和 26 28mg 的 FeSO4 ·7Η20、1· 99 2. Olmg 甘氨酸、0. 09 0. Ilmg 的 VB1^O. 49 0. 5Img 的 VB6, 以及0. 49 0. 5Img的或VPP ；余量为水。
2.如权利要求1所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于其中还含有 402. 5 422. 5mg 的 NH4NO。
3.如权利要求1或2所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于其中还含有 24900 25IOOmg的C源蔗糖。
4.一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)培养基基本母液的配制a、制备大量元素母液取 18900 19100mg 的 KNO3>1690 1710mg 的 KH2PO4,3690 3710mg 的 MgSO4 · 7H20 和4390 4410mg的CaCl2 · 2H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入IL容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；b、制备微量元素母液取 2227 2223mg 的 MnSO4 · 4Η20、82· 7 83. 3mg 的 KI,617 623mg 的 H3B03、857 863mg 的 ZnSO4 · 7Η20、24· 7 25. 3mg 的 Na2MoO4 · H2O, 2. 47 2. 53mg 的 CuSO4 · 5H20、禾口 2. 47 2. 53mg的CoCl2 ·6Η20，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中， 再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；C、制备铁盐母液取370 37;3mg的Na2 · EDTA和洸0 ^Omg的FeSO4 · 7H20,以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；d、制备1号有机物母液取199 20Img甘氨酸、9 Ilmg的VB”49 5Img的VB6JP 49 5Img的卯5或乂卩卩， 以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于IL容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4°C保存备用；按每升培养基分别量取IOOmL大量元素母液、铁盐母液，以及IOmL微量元素母液和1 号有机物母液，放入烧杯中备用；(2)按每L培养基加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2. 49 2. 51%，卡拉胶质量浓度达到0. 5%，加热80-121°C搅拌均勻；(4)用氢氧化钠或盐酸将PH值调到5.8 6. 0，即完成固体培养基的制备；(5)装瓶后高压灭菌即可。
5.如权利要求4所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于其中C 源为蔗糖，加入量为24900 25100mg。
6.如权利要求4所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于其中在大量元素母液中还加入4025 4225mg的NH4NO3。
7.如权利要求4所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于其中调节PH值是用lmol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中，滴后搅拌均勻，重复该过程直至PH值调到5. 8 6. 0，即完成固体培养基的制备。
8.如权利要求4所述的中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于其中装瓶后高压灭菌是将配好的固体培养基，每瓶装30 40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内， 121°C灭菌15 19. 5分钟后取出即可。
全文摘要
本发明涉及一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法，一种中熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特别之处在于，包括如下步骤(1)培养基基本母液的配制，制备大量元素母液，制备微量元素母液，制备铁盐母液，制备1号有机物母液；(2)按每L培养基加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中；(4)用氢氧化钠或盐酸将pH值调到5.8～6.0；(5)装瓶后高压灭菌即可。本发明的培养基中不仅营养组分和成分减少，而且用低成本的卡拉胶代替琼脂作为凝固剂后，试管苗生长旺盛且周期缩短，从而有效减少育苗中的能耗和成本。
文档编号A01H4/00GK102257958SQ20111012582
公开日2011年11月30日 申请日期2011年5月17日 优先权日2011年5月17日
发明者曹君迈, 焦向炜, 祁金涛 申请人:北方民族大学