专利名称：金娃娃鸢尾的组织培养方法
技术领域：
本发明属于植物组织栽培技术领域，特别涉及德国鸢尾金娃娃的组织培养方法。
背景技术：
金娃娃鸢尾是鸢尾科鸢尾属德国鸢尾(Iris gerffl^ica L.)下的一个栽培品种， 德国鸢尾原产欧洲，我国各地常见栽培。金娃娃鸢尾最初是由北京植物园从德国引进的多年生宿根花卉，株高30 40厘米，块状根茎横走或倾斜，叶基生直立，相互套迭，浅绿色。 植株蓬径30 40厘米。花茎自叶丛中抽出，每株10 15个花莛，花莛高15 25厘米， 一支花莛着生1 2朵花，花及花序基部着生数枚苞片，花径9厘米；花瓣金黄色，髯毛基白色，上部桔黄色。花期在3月上旬至4月中旬。金娃娃鸢尾喜光，较耐旱，忌积涝，耐寒，较耐瘠薄。以疏松肥沃、排水良好的中性或微碱性沙壤土为佳。金娃娃鸢尾四季常绿，叶片青翠碧绿、似剑若带，花量大，金黄色，富有朝气活力， 群体效果尤佳。一次栽植，多年开花，耐寒耐旱，病虫害少，栽培管理容易，是新优宿根花卉的代表。可作为背景材料种植于花坛、花径，也可与其他植物材料搭配，在园林中用途广泛， 市场开发潜力巨大。目前金娃娃鸢尾主要用分株法繁殖，受季节限制，一年只能在春秋分株两次，而且繁殖系数低，繁殖技术已成为制约金娃娃鸢尾推广应用的瓶颈。CN101263787A公开了一种路易斯鸢尾组织培养快速成苗的方法，包括以下步骤 1)材料的选取取路易斯鸢尾花、花蕾、花轴、叶片和块根等营养器官作为外植体，常规消毒后接种；2)芽的诱导与增殖培养将1)中已杀菌消毒的营养器官接种于诱导培养基上， 待愈伤组织形成至1 2CM2大小、具有0. 5 0. 8CM绿色凸起块时转入分化培养基，当长至5 8CM长时转入生根培养基；3)根的诱导选生长一致的无根苗转入根的诱导培养基， 当长至12 15CM时进行炼苗；4)炼苗在自然光照下炼苗6 8天后出苗；洗掉根部培养基，移栽到经消毒的装有混合基质的育苗容器中，浇水、遮荫和保温，然后出苗。目前，关于鸢尾组培繁殖方面的报道仅限于路易斯、马蔺、杂种鸢尾、长春黄等几个品种，金娃娃鸢尾的组织培养和植株再生技术未见报道。
发明内容
针对现有技术的空白，本发明的目的在于提供一种金娃娃鸢尾的组织培养方法， 该方法繁殖系数高、成活率高。本发明的目的是这样实现的
金娃娃鸢尾的组织培养方法，包括以下步骤
1)从金娃娃鸢尾的地栽苗中选取生长健壮、无病虫害的植株作为材料，于3月上旬到4 中旬有花芽时，剪下带花柄的幼嫩花芽，去除最外层的苞片，清水冲洗备用；
2)将清洗干净的花芽依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒，并用无菌水冲洗；
3)去除花苞下方的内层苞片，切除顶端的花苞和子房，将内层苞片着生处的花柄接入诱导分化培养基中；4)培养一段时间后，内层苞片着生处形成不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培
养；
5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的丛芽切下，经生根培养基培养后，形成健壮的组培生根苗。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤1)中采集花芽前半个月保证天气晴朗，在晴天的上午，采集幼嫩的l_3cm的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗10-30min备用。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤1)中采集花芽前半个月如遇雨则对植株采取避雨措施，然后在晴天的上午，采集幼嫩的l_3cm的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗10-30min备用。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤2)中在超净工作台上操作， 其中酒精浓度为70%-80%，浸泡时间为2-4s，倒掉酒精后无菌水冲洗4-6次，然后加入 0. 08%-0. 1 的升汞溶液，浸泡4-6min，期间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗5-7次。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤3)中花芽消毒后用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌镊子小心剥去最内层苞片，无菌刀片切除花苞及子房，切下子房下部内层苞片着生处4-6mm的花柄部分，接入无菌的诱导分化培养基中；所述的诱导分化培养基的配方为:MS 培养基中添加 0. 05-0. 15mg · I71 NAA,0. 5-1. 5mg · Γ1 6_ΒΑ、3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，ρΗ为5. 2—5.6。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤4)中培养温度为25士 1°C，光照时间为ll_13h，光强1800-2200LX，花柄接入培养基14_16d后，内层苞片着生处分化出不定芽，并进一步分化成幼嫩植株的上半部分，将小于Icm的不定芽丛采取芽间分离的方式分成小的芽丛，转接入增殖培养基；所述的增殖培养基的配方为MS培养基中添加 0. 03-0. 05mg · Γ1 NAA、l_2mg · Γ1 6_ΒΑ、3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，ρΗ 为 5. 2-5. 6。所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其中步骤5)中不定芽丛在增殖培养基中培养15-20d，基部再生出芽丛，将长度超过6cm的芽株从芽丛上分离，接入生根培养基；所述的生根培养基的配方为=MS培养基中添加0. 5-1. 5mg · Γ1 ΝΑΑ、0· 05-0. 15mg · Γ1 6-BA、 3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，ρΗ为5. 2-5. 6，培养80-100天后，形成健壮的生根苗。本发明任何地方所述的培养基中，其中
MS是国际通用的培养基，其成分和配制方法参见文献(谭文澄、戴策刚主编，观赏植物组织培养技术，北京中国国林业出版社，1991)
6-BA的化学成分为6-苄氨基嘌呤，使用时配置成高浓度母液，即0. 5mg/mL。具体配置方法称取50毫克6-BA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸馏水定容至100毫升，即可使用。NAA的化学成分为α-萘乙酸，使用时配置成0.5mg /mL的母液。具体配置方法 称取50毫克NAA，先用少量95%酒精溶解，然后用蒸馏水定容至100毫升，即可使用。与现有技术相比，本发明涉及的金娃娃鸢尾组培苗的制作方法具有如下优点和显著进步采用本发明的组织培养方法得到的金娃娃鸢尾组培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系数达到12.7以上，生根率达到93%以上，得到的鸢尾生长健壮，具有广阔的市场前景。
具体实施例方式以下是本发明涉及的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。实施例1
1)在连续半个月的晴朗天气后，采集幼嫩的总长度为Icrn左右的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗30min备用。2)酒精浓度为70%，浸泡时间为2s，倒掉酒精后无菌水冲洗4次，加入0. 08%的升汞溶液，浸泡6min，期间不断摇动，倒掉升汞溶液后用无菌水冲洗5次。3)花芽消毒后用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌镊子小心剥去最内层苞片，无菌刀片切除花苞及子房，切下子房下部内层苞片着生部4mm的花柄部分，接入无菌的诱导分化培养基中；诱导分化培养基的配方为MS培养基中添加0. 05mg -Γ1 NAA、0. 5mg -Γ1 6-BA、 3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 2。4)培养温度为M°C，光照时间为llh，光强1800Lx，花柄接入培养基14d左右内层苞片着生处分化出不定芽，并进一步分化成幼嫩植株的上半部分。将小于Icm的不定芽丛采取芽间分离的方式分成小的芽丛，转接入增殖培养基，增殖培养基的配方为MS培养基中添加 0. 03mg · Γ1 NAA、Img · Γ1 6-BA, 3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，pH 为 5. 2。5)不定芽丛在增殖培养基中培养15d，基部再生出芽丛，将长度超过6cm的芽株从芽丛上分离，接入生根培养基，生根培养基的配方为MS培养基中添加0. 5mg · Γ1 NAA、 0. 05mg · L-1 6-BA,3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 2，培养IOOd后，形成健壮的生根苗。实施例2
1)在连续半个月的晴朗天气后，采集幼嫩的总长度为2cm左右的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗25min备用。2)酒精浓度为75%，浸泡时间为3s，倒掉酒精后无菌水冲洗5次，加入0. 1%的升汞溶液，浸泡5min，期间不断摇动，倒掉升汞溶液后用无菌水冲洗6次。3)花芽消毒后用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌镊子小心剥去最内层苞片，无菌刀片切除花苞及子房，切下子房下部内层苞片着生部5mm的花柄部分，接入无菌的诱导分化培养基中；诱导分化培养基的配方为MS培养基中添加0. lmg-Γ1 NAAU. Omg-Γ1 6-BA、 3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 4。4)培养温度为25°C，光照时间为12h，光强2000Lx，花柄接入培养基14d左右内层苞片着生处分化出不定芽，并进一步分化成幼嫩植株的上半部分。将小于Icm的不定芽丛采取芽间分离的方式分成小的芽丛，转接入增殖培养基，增殖培养基的配方为MS培养基中添加 0. (Mmg · Γ1 NAA、1. 5mg · Γ1 6-BA,3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，pH 为 5. 4。5)不定芽丛在增殖培养基中培养18d，基部再生出芽丛，将长度超过6cm的芽株从芽丛上分离，接入生根培养基，生根培养基的配方为MS培养基中添加1. Omg · Γ1 NAA、 0. Img · L-1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 4，培养90d后，形成健壮的生根苗。实施例3
1)在连续半个月的晴朗天气后，采集幼嫩的总长度为3cm左右的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗20min备用。
2)酒精浓度为80%，浸泡时间为2s，倒掉酒精后无菌水冲洗6次，加入0. 12%的升汞溶液，浸泡細in，期间不断摇动，倒掉升汞溶液后用无菌水冲洗7次。3)花芽消毒后用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌镊子小心剥去最内层苞片，无菌刀片切除花苞及子房，切下子房下部内层苞片着生部6mm的花柄部分，接入无菌的诱导分化培养基中；诱导分化培养基的配方为MS培养基中添加0. 15mg -Γ1 NAA、1. 5mg -Γ1 6_BA、 3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 6。4)培养温度为^°C，光照时间为13h，光强2200Lx，花柄接入培养基14d左右内层苞片着生处分化出不定芽，并进一步分化成幼嫩植株的上半部分。将小于Icm的不定芽丛采取芽间分离的方式分成小的芽丛，转接入增殖培养基，增殖培养基的配方为MS培养基中添加 0. 05mg · Γ1 NAA、2mg · Γ1 6_ΒΑ、3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，pH 为 5. 6。5)不定芽丛在增殖培养基中培养20d，基部再生出芽丛，将长度超过6cm的芽株从芽丛上分离，接入生根培养基，生根培养基的配方为MS培养基中添加1. 5mg · Γ1 NAA、 0. 15mg · L-1 6-BA、3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，pH为5. 6，培养70d后，形成健壮的生根苗。实施例4
除步骤1)中采集花芽前半个月对植株进行避雨处理，其他步骤同实施例1，培养获得健壮的生根苗。采用上述实施例1-4组织培养方法得到的金娃娃鸢尾组培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系数达到12. 7以上，生根率达到93%以上。以下结合相应的试验数据对本发明作进一步说明。设置诱导分化培养基中不同的激素配比试验，NAA浓度两个梯度0. Img · L^1U. 0 mg · L-1A-BA浓度两个梯度0. 1 mg · L^1U. 0 mg · L—1，并设立空白对照，见表1。表1诱导分化培养基中不同的激素配比试验结果表
权利要求
1.金娃娃鸢尾的组织培养方法，包括以下步骤1)从金娃娃鸢尾的地栽苗中选取生长健壮、无病虫害的植株作为材料，于3月上旬到4 月中旬有花芽时，剪下带花柄的幼嫩花芽，去除最外层的苞片，清水冲洗备用；2)将清洗干净的花芽依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒，并用无菌水冲洗；3)去除花苞下方的内层苞片，切除顶端的花苞和子房，将内层苞片着生处的花柄接入诱导分化培养基中；4)培养一段时间后，内层苞片着生处形成不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培养；5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的丛芽切下，经生根培养基培养后，形成健壮的组培生根苗。
2.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤1)中采集花芽前半个月保证天气晴朗，在晴天的上午，采集幼嫩的l_3cm的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗10-30min备用。
3.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤1)中采集花芽前半个月如遇雨则对植株采取避雨措施，然后在晴天的上午，采集幼嫩的l_3cm的花芽，剥去外层的苞片，保留最内的一层苞片，流水冲洗10-30min备用。
4.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤2)中在超净工作台上操作，其中酒精浓度为70%-80%，浸泡时间为2- ，倒掉酒精后无菌水冲洗4-6次，然后加入0. 08%-0. 12%的升汞溶液，浸泡4-6min，期间不断摇动，倒掉升汞溶液用无菌水冲洗 5-7 次。
5.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤3)中花芽消毒后用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌镊子小心剥去最内层苞片，无菌刀片切除花苞及子房， 切下子房下部内层苞片着生处4-6mm的花柄部分，接入无菌的诱导分化培养基中；所述的诱导分化培养基的配方为=MS培养基中添加0. 05-0. 15mg ·厂1 NAA,0. 5-1. 5mg · Γ1 6-ΒΑ、 3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，ρΗ为5. 2 — 5. 6。
6.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤4)中培养温度为25士 1°C，光照时间为11-1池，光强1800-2200LX，花柄接入培养基14_16d后，内层苞片着生处分化出不定芽，并进一步分化成幼嫩植株的上半部分，将小于Icm的不定芽丛采取芽间分离的方式分成小的芽丛，转接入增殖培养基；所述的增殖培养基的配方为MS培养基中添加 0. 03-0. 05mg ·厂1 NAA、l_2mg · Γ1 6-ΒΑ,3% 蔗糖和 0. 54% 琼脂配成，ρΗ 为 5. 2-5. 6。
7.如权利要求1所述的金娃娃鸢尾的组织培养方法，其特征在于步骤5)中不定芽丛在增殖培养基中培养15-20d，基部再生出芽丛，将长度超过6cm的芽株从芽丛上分离， 接入生根培养基；所述的生根培养基的配方为MS培养基中添加0. 5-1. 5mg · Γ1 NAA、 0. 05-0. 15 ·厂1 6-ΒΑ,3%蔗糖和0. 54%琼脂配成，ρΗ为5. 2-5. 6，培养80-100天后，形成健壮的生根苗。
全文摘要
本发明涉及德国鸢尾金娃娃的组织培养方法，包括以下步骤1)从金娃娃鸢尾的地栽苗中选取植株作为材料，于3月上旬到4月中旬有花芽时，剪下带花柄的幼嫩花芽，去除外层的苞片，清水冲洗备用；2)在超净工作台上，将清洗干净的花芽依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并用无菌水冲洗；3)去除花苞下方的内层苞片，切除顶端的花苞和子房，将内层苞片着生部的花柄接入培养基中；4)培养一段时间后，内层苞片着生处形成不定芽，将不定芽转接入增殖培养基中培养；5)培养一段时间后，将不定芽生长形成的丛芽切下，经生根培养基培养后，形成健壮的组培生根苗。该组培方法消毒简便、成活率高、繁殖速度快。
文档编号A01H4/00GK102396418SQ20111026364
公开日2012年4月4日 申请日期2011年9月7日 优先权日2011年9月7日
发明者周媛, 徐洪亮, 戢小梅, 童俊, 董艳芳, 许林, 郭彩霞, 陈法志 申请人:武汉市林业果树科学研究所