专利名称：一种非洲菊组培穴盘苗的繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种植物组培穴盘苗的繁育方法，尤其涉及非洲菊组培穴盘苗的繁育方法。
背景技术：
非洲菊又名扶郎花，其花朵硕大，花枝挺拔、花色丰富，姿态各异，装饰性强，产量高，瓶插寿命长，在适宜条件下可周年生产，是世界花卉市场上最重要的切花之一，占世界切花销售量的第5位。非洲菊作为大宗鲜切花种类，在我国占有重要地位，正受到越来越多人的喜爱，其栽培面积仅次于玫瑰、百合和康乃馨，生产上迫切需要优质非洲菊种苗。非洲菊品种杂合性高，采用种子繁殖的后代易发生变异。一般采用分株和扦插等无性繁殖方法进行繁殖。但是分株和扦插的繁殖系数低，很难满足大规模生产需要。采用组织培养可以快速繁育种苗，并能保持母株的优良性状。目前非洲菊组织培养繁殖中，普遍存在外植体污染率高，不定芽的诱导分化率低，诱导周期长，组培苗移栽成活率低等问题， 特别是用传统的苗床进行育苗，苗与苗之间易发生串根现象，起苗时根系极易受损伤，使之种植后缓苗时间长，成活率低。穴盘育苗与苗床培育的根系裸露的苗相比，提高了成苗率和更有效地利用了种植空间，具有生长期短，植株生长整齐，移植不易伤根，操作简单，节约劳动力，移植后缓苗期短，病害传播几率低等优点。经检索国内外未见报道非洲菊组培苗穴盘育苗技术。
发明内容
针对上述情况，本发明提供一种非洲菊组培穴盘苗的繁育方法，提高非洲菊的繁殖速度和苗的整齐度，更好的保持了其母本优良性状。本发明是通过以下技术方案来实现的
本发明提供的非洲菊组培穴盘苗繁育方法，其特征在于 (1)无菌材料的获得
采取直径小于1cm、未露出小花的非洲菊幼小花蕾，用自来水流水冲洗20min，然后在超净工作台内将花蕾置于无菌瓶中，依次用70%酒精浸泡30s，0. 1%升汞中加入其体积0. 1% 吐温-80浸泡8-10分钟，再用无菌水冲洗4-6遍后待用。(2)不定芽的诱导分化
将步骤(1)得到的无菌材料用小镊子剥去花蕾上的所有苞片，再切掉花蕾表面小花及苞片基部，剩余花托部分，将花托切成4块，接种于不定芽诱导分化培养基上，将培养瓶置于温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天的条件下进行培养，1_2周后外植体膨大，3-4周后出现黄绿色愈伤组织，4-6周后可分化出不定芽。(3)不定芽的增殖
将步骤(2)得到的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天，4周继代培养一次，增殖系数为3_6。
(4)不定芽的生根
将步骤(3)得到的不定芽接种到生根培养基上进行生根诱导培养，培养室内温度 250C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，10天后生根率可达99%，生根数目平均 3-4条/株，根长度为0. 5-1. Ocm0(5)炼苗
将步骤(4)得到的生根苗在培养室内打开培养瓶的瓶口炼苗2-3天。(6)穴盘移栽
炼苗结束后，将组培苗从培养瓶内取出，洗净根部存留的培养基，避免伤害组培苗的幼根，然后移栽到盛有基质的穴盘中，穴盘填充的移栽基质含水量为60%-70%，移栽后覆塑料薄膜保温保湿。(7)穴盘苗管理
组培苗移栽后保持白天温度2(T30°C，夜间最低温度不低于12°C，湿度90%以上；10天后揭开塑料薄膜使小苗逐步适应湿度50%-70%的环境条件，移栽2周后开始施用肥料，在此条件下培养30-40天。上述的不定芽诱导分化培养基是在1/2MS培养基中添加2. 0-10. Omg/L 6_苄基腺嘌呤、0. 1-0. 5mg/L吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为5. 8-6. 2。上述的不定芽增殖培养基是在MS培养基中添加0. 5-2. Omg/L 6_苄基腺嘌呤或 0-10. Omg/L激动素、0. 1-0. 5 mg/L吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为 5. 8-6. 2。上述的不定芽生根培养基是在1/2MS培养基中添加0. 1-0. 5mg/L吲哚乙酸或 0. 05-0. 5mg/L吲哚丁酸或0. 01-0. 02mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH 为 5. 8-6. 2。上述的育苗穴盘规格为72 1 孔，72孔穴盘口径38mm，高40mm，规格 540mmX 280mm ； 105 孔穴盘口 径 33mm，高 40mm，规格 540mmX 280mm ；128 孔穴盘口 径 30mm，高 40mm,规格 540mm X 280mm。上述的移栽基质配方为重量75%泥炭加25%蛭石。上述移栽2周后施用肥料为氮、磷、钾复合肥，采用两种重量比例为20 10 :20或 14 0 14，两种比例氮磷钾复合肥分别用重量2000倍液交替施用。本发明与传统非洲菊的繁殖方法相比，提高了非洲菊的繁殖速度和苗的整齐度， 更好的保持了其母本优良性状，是一种适合非洲菊种苗工厂化生产的有效方法。
图1是非汧
图2是非汧
图3是非汧
图4是非汧
图5是非汧
图6是非汧
图7是非汧
图8是非洲菊组培穴盘苗的示意图片。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1
(1)无菌材料的获得
采取直径小于1cm、未露出小花的非洲菊幼小花蕾，用自来水流水冲洗20min，然后在超净工作台内将花蕾置于无菌瓶中，依次用70%酒精浸泡30s，0. 1%升汞中加入其体积0. 1% 吐温-80浸泡8分钟，再用无菌水冲洗4-6遍后待用。(2)不定芽的诱导分化
将步骤(1)得到的无菌材料用小镊子剥去花蕾上的所有苞片，再切掉花蕾表面小花及苞片基部，剩余花托部分，将花托切成4块，接种于不定芽诱导分化培养基上，将培养瓶置于温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天的条件下进行培养，1_2周后外植体膨大，3周后出现黄绿色愈伤组织(见图1)，5周后可分化出不定芽(见图2)。所述的不定芽诱导分化培养基是在1/2MS培养基中添加2. 0-10. Omg/L 6_苄基腺嘌呤、0. 1-0. 5mg/L吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为5. 8-6. 2。(3)不定芽的增殖
将步骤(2)得到的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，4周继代培养一次(见图3)，增殖系数为5。所述的不定芽增殖培养基是在MS培养基中添加0. 5-2. Omg/L 6_苄基腺嘌呤或 0-10. Omg/L激动素、0. 1-0. 5 mg/L吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为 5. 8-6. 2。(4)不定芽的生根
将步骤(3)得到的不定芽接种到生根培养基上进行生根诱导培养，培养室内温度 250C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，10天后生根率可达99%，生根数目平均 3-4条/株，根长度为0. 5-1. Ocm (见图4、5)。所述的不定芽生根培养基是在1/2MS培养基中添加0. 1-0. 5mg/L吲哚乙酸或 0. 05-0. 5mg/L吲哚丁酸或0. 01-0. 02mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH 为 5. 8-6. 2。(5)炼苗
将步骤(4)得到的生根苗在培养室内打开培养瓶的瓶口炼苗2-3天。(6)穴盘移栽
炼苗结束后，将组培苗从培养瓶内取出，洗净根部存留的培养基，避免伤害组培苗的幼根，然后移栽到盛有基质的72孔的穴盘中(见图6)，移栽基质为重量75%泥炭加25%蛭石， 移栽基质的含水量为60%-70%，移栽后覆塑料薄膜保温保湿。(7)穴盘苗管理
组培苗移栽后保持白天温度2(T30°C，夜间最低温度不低于12°C，湿度90%以上；10天后揭开塑料薄膜使小苗逐步适应湿度50%-70%的环境条件，移栽2周后开始施用肥料，在此条件下培养30-40天(见图7、8)。施用的肥料为氮、磷、钾复合肥，采用两种比例为20 10 20或14 0 :14，两种比例氮磷钾复合肥分别用重量2000倍液交替施用。实施例2
(1)无菌材料的获得
采取直径小于1cm、未露出小花的非洲菊幼小花蕾，用自来水流水冲洗20min，然后在超净工作台内将花蕾置于无菌瓶中，依次用70%酒精浸泡30s，0. 1%升汞中加入其体积0. 1% 吐温-80浸泡10分钟，再用无菌水冲洗6遍后待用。(2)不定芽的诱导分化
将步骤(1)得到的无菌材料用小镊子剥去花蕾上的所有苞片，再切掉花蕾表面小花及苞片基部，剩余花托部分，将花托切成4块，接种于不定芽诱导分化培养基上(同实施例1)， 将培养瓶置于温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天的条件下进行培养， 1-2周后外植体膨大，3周后出现黄绿色愈伤组织，5周后可分化出不定芽。(3)不定芽的增殖
将步骤(2)得到的不定芽接种到增殖培养基(同实施例1)上进行增殖培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，4周继代培养一次，增殖系数为 5。(4)不定芽的生根
将步骤(3)得到的不定芽接种到生根培养基(同实施例1)上进行生根诱导培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，10天后生根率可达99%，生根数目平均3-4条/株，根长度为0. 5-1. Ocm0(5)炼苗
将步骤(4)得到的生根苗在培养室内打开培养瓶的瓶口炼苗2-3天。(6)穴盘移栽
炼苗结束后，将组培苗从培养瓶内取出，洗净根部存留的培养基，避免伤害组培苗的幼根，然后移栽到盛有基质的105孔穴盘中，移栽基质为重量75%泥炭加25%蛭石，移栽基质的含水量为60%-70%，移栽后覆塑料薄膜保温保湿。(7)穴盘苗管理
组培苗移栽后保持白天温度2(T30°C，夜间最低温度不低于12°C，湿度90%以上；10天后揭开塑料薄膜使小苗逐步适应湿度50%-70%的环境条件，移栽2周后开始施用氮、磷、钾复合肥(同实施例1)，在此条件下培养30-40天。实施例3
(1)无菌材料的获得
采取直径小于1cm、未露出小花的非洲菊幼小花蕾，用自来水流水冲洗20min，然后在超净工作台内将花蕾置于无菌瓶中，依次用70%酒精浸泡30s，0. 1%升汞中加入其体积0. 1% 吐温-80浸泡10分钟，再用无菌水冲洗4遍后待用。(2)不定芽的诱导分化
将步骤(1)得到的无菌材料用小镊子剥去花蕾上的所有苞片，再切掉花蕾表面小花及苞片基部，剩余花托部分，将花托切成4块，接种于不定芽诱导分化培养基上(同实施例1)， 将培养瓶置于温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天的条件下进行培养， 1-2周后外植体膨大，3周后出现黄绿色愈伤组织，5周后可分化出不定芽。
(3)不定芽的增殖
将步骤(2)得到的不定芽接种到增殖培养基(同实施例1)上进行增殖培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，4周继代培养一次，增殖系数为 5。(4)不定芽的生根
将步骤(3)得到的不定芽接种到生根培养基(同实施例1)上进行生根诱导培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，10天后生根率可达99%，生根数目平均3-4条/株，根长度为0. 5-1. Ocm0(5)炼苗
将步骤(4)得到的生根苗在培养室内打开培养瓶的瓶口炼苗2-3天。(6)穴盘移栽
炼苗结束后，将组培苗从培养瓶内取出，洗净根部存留的培养基，避免伤害组培苗的幼根，然后移栽到盛有基质的1 孔穴盘中，移栽基质为重量75%泥炭加25%蛭石，移栽基质的含水量为60%-70%，移栽后覆塑料薄膜保温保湿。(7)穴盘苗管理
组培苗移栽后保持白天温度2(T30°C，夜间最低温度不低于12°C，湿度90%以上；10天后揭开塑料薄膜使小苗逐步适应湿度50%-70%的环境条件，移栽2周后开始施用氮、磷、钾复合肥(同实施例1)，在此条件下培养30-40天。
权利要求
1.一种非洲菊组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得采取直径小于1cm、未露出小花的非洲菊幼小花蕾，用自来水流水冲洗20min，然后在超净工作台内将花蕾置于无菌瓶中，依次用70%酒精浸泡30s，0. 1%升汞中加入其体积0. 1% 吐温-80浸泡8-10分钟，再用无菌水冲洗4-6遍后待用；(2)不定芽的诱导分化将步骤(1)得到的无菌材料用小镊子剥去花蕾上的所有苞片，再切掉花蕾表面小花及苞片基部，剩余花托部分，将花托切成4块，接种于不定芽诱导分化培养基上，将培养瓶置于温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天的条件下进行培养，1-2周后外植体膨大，3-4周后出现黄绿色愈伤组织，4-6周后可分化出不定芽；(3)不定芽的增殖将步骤(2)得到的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，培养室内温度25°C，光照强度1500-25001X，光照时间14小时/天，4周继代培养一次，增殖系数为3_6 ；(4)不定芽的生根将步骤(3)得到的不定芽接种到生根培养基上进行生根诱导培养，培养室内温度 250C，光照强度1500-25001x，光照时间14小时/天，10天后生根率可达99%，生根数目平均 3-4条/株，根长度为0. 5-1. Ocm ；(5)炼苗将步骤(4)得到的生根苗在培养室内打开培养瓶的瓶口炼苗2-3天；(6)穴盘移栽炼苗结束后，将组培苗从培养瓶内取出，洗净根部存留的培养基，避免伤害组培苗的幼根，然后移栽到盛有基质的穴盘中，穴盘填充的移栽基质含水量为60%-70%，移栽后覆塑料薄膜保温保湿；(7)穴盘苗管理组培苗移栽后保持白天温度2(T30°C，夜间最低温度不低于12°C，湿度90%以上；10天后揭开塑料薄膜使小苗逐步适应湿度50%-70%的环境条件，移栽2周后开始施用肥料，在此条件下培养30-40天。
2.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于所述的不定芽诱导分化培养基是在V2MS培养基中添加2. 0-10. Omg/L 6-苄基腺嘌呤、0. 1-0. 5mg/L 吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3-4g/L琼脂粉，调节pH为5. 8-6. 2。
3.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于所述的不定芽增殖培养基是在MS培养基中添加0. 5-2. Omg/L 6-苄基腺嘌呤或0-10. Omg/L激动素、 0. 1-0. 5 mg/L吲哚乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为5. 8-6. 2。
4.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于所述的不定芽生根培养基是在1/2MS培养基中添加0. 1-0. 5mg/L吲哚乙酸或0. 05-0. 5mg/L吲哚丁酸或0. 01-0. 02mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖和3_4g/L琼脂粉，调节pH为5. 8-6. 2。
5.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于所述的育苗穴盘规格为72 1观孔。
6.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于移栽基质为重量75%泥炭加25%蛭石。
7.根据权利要求1所述的非洲菊的组培穴盘苗的繁育方法，其特征在于移栽2周后施用肥料为氮、磷、钾复合肥，采用两种比例为20 10 20或14 0 14，两种比例氮磷钾复合肥分别用2000倍液交替施用。
全文摘要
本发明涉及一种非洲菊组培穴盘苗的繁育方法，包括无菌材料的获得，不定芽的诱导分化，不定芽的增殖，不定芽的生根，炼苗与穴盘移栽等步骤。与传统非洲菊的繁殖方法相比，本发明提高了非洲菊的繁殖速度和苗的整齐度，更好的保持了其母本优良性状。另外，采用穴盘移栽的无土育苗方法不仅减少了对土地资源的消耗，极大地提高了移栽成活率，而且避免了土传病菌通过种苗的传播危害，是一种适合非洲菊种苗工厂化生产的有效方法。
文档编号A01H4/00GK102415337SQ20111026889
公开日2012年4月18日 申请日期2011年9月13日 优先权日2011年9月13日
发明者毕晓颖, 程超, 郑洋, 雷家军, 魏秀娟 申请人:沈阳农业大学