专利名称：马铃薯茎尖脱毒育种方法及双层培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及脱毒育种技术及固态组培基质技术，特别是一种马铃薯茎尖脱毒育种方法及双层培养基。
背景技术：
采用培养基进行马铃薯茎尖脱毒育种是国内国际应用的先进技术。现有培养基技术分成两大部分即组织培养和试管薯诱导出薯两部分，使用两种培养基，先用组织培养基培养苗，苗长成后再加入诱导培养基。暗光培养。这种技术污染率高，损失大，所以国内国际均未大规模使用。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的缺陷或不足，提供一种马铃薯茎尖脱毒育种方法及双层培养基，以提高效率，并降低污染率。本发明的技术方案如下马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，利用双层培养基植入马铃薯茎尖后一次性成苗出试管薯，省却成苗后的移栽培养步骤；所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基；所述马铃薯茎尖植入在组织培养基中成苗；待苗长成后直接进入暗光培养，在所述诱导培养基中出试管薯。所述待苗长成后直接进入暗光培养是指当苗长成至预设的一定高度后直接进入暗光培养。所述双层培养基中每一层都是固态培养基。所述双层培养基被设置在培养容器内，在培养容器内先装入制备好的诱导培养基形成一个培养基底层，然后装入制备好的组织培养基形成一个培养基上层。一种双层培养基，其特征在于，所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基。利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，将组织培养基和诱导培养基分别制备，先将诱导培养基装入培养容器灭菌，将灭菌的诱导培养基在无菌室内降温至凝固成固态；再将组织培养基放入生物反应器内灭菌，待灭菌基质降至一定温度时，在无菌操作条件下将组织培养基放入装有诱导培养基的容器中，待组织培养基降至常温时，即得双
层培养基。所述在无菌室内降温至凝固成固态是指在无菌室内降温至15°C或以下。所述待灭菌基质降至一定温度，是指待灭菌基质降至50°C或以下。所述常温是指20 25°C。本发明的技术效果如下
该项技术实施后，可以降低污染10%以上，同时节省劳动力20%左右，试管薯结薯率提高20%左右，试管薯均重提高50%左右。该项技术实施后，以全国马铃薯7000万亩计算，可以节省土地面积600万亩左右。
具体实施例方式马铃薯茎尖脱毒育种是国内国际应用的先进技术，现有培养基技术分成两大部分即组织培养和试管薯诱导出薯两部分，使用两种培养基，先用组织培养基培养苗，苗长成后再加入诱导培养基。暗光培养。这种技术污染率高，损失大，所以国内国际均未大规模使用。本项目发明使用双层培养基技术，解决了现有的问题。具体办法如下将组织培养基和诱导培养基分别制备，先将诱导培养基装入培养容器灭菌，将灭菌的培养基在无菌室内降温到15°C凝固成固态，再将组织培养基放入生物反应器内灭菌，待灭菌基质降至50°C时，在无菌操作条件下将组织培养基分别放入装有诱导培养基的容器中，待培养基降至常温O0-25°C )，即可接入苗，苗在规定的温度、光照、温度条件下长成至所需高度，直接进入暗光培养，即可出试管薯。该项技术实施后，可以降低污染10%以上，同时节省劳动力20%，试管薯结薯率提高20%，试管薯均重提高50%。该项技术实施后，以全国马铃薯7000万亩计算，可以节省土地面积600万亩。本发明属于脱毒育种中的MS双层固态组培基质设计方案。MS培养基中的MS是培养基发明人穆拉希吉克(Murashige，Τ.)和斯科克(Skoog，F.)的缩写。MS培养基其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。本领域技术人员能够参照或参考中华人民共和国农业部发布的农业行业标准， NY/T1212-2006，马铃薯脱毒种薯繁育技术规程，进一步了解本发明相关技术概念。马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，利用双层培养基植入马铃薯茎尖后一次性成苗出试管薯，省却成苗后的移栽培养步骤；所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基；所述马铃薯茎尖植入在组织培养基中成苗；待苗长成后直接进入暗光培养，在所述诱导培养基中出试管薯。所述待苗长成后直接进入暗光培养是指当苗长成至预设的一定高度后直接进入暗光培养。所述双层培养基中每一层都是固态培养基。所述双层培养基被设置在培养容器内，在培养容器内先装入制备好的诱导培养基形成一个培养基底层，然后装入制备好的组织培养基形成一个培养基上层。一种双层培养基，其特征在于，所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基。利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，将组织培养基和诱导培养基分别制备，先将诱导培养基装入培养容器灭菌，将灭菌的诱导培养基在无菌室内降温至凝固成固态；再将组织培养基放入生物反应器内灭菌，待灭菌基质降至一定温度时，在无菌操作条件下将组织培养基放入装有诱导培养基的容器中，待组织培养基降至常温时，即得双层培养基。所述在无菌室内降温至凝固成固态是指在无菌室内降温至15°C或以下。所述待灭菌基质降至一定温度，是指待灭菌基质降至50°C或以下。所述常温是指20 25°C。
在此指明，以上叙述有助于本领域技术人员理解本发明创造，但并非限制本发明创造的保护范围。任何没有脱离本发明创造实质内容的对以上叙述的等同替换、修饰改进和/或删繁从简而进行的实施，均落入本发明创造的保护范围。
权利要求
1.马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，利用双层培养基植入马铃薯茎尖后一次性成苗出试管薯，省却成苗后的移栽培养步骤；所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基；所述马铃薯茎尖植入在组织培养基中成苗；待苗长成后直接进入暗光培养，在所述诱导培养基中出试管薯。
2.根据权利要求1所述的马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，所述待苗长成后直接进入暗光培养是指当苗长成至预设的一定高度后直接进入暗光培养。
3.根据权利要求1所述的马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，所述双层培养基中每一层都是固态培养基。
4.根据权利要求1所述的马铃薯茎尖脱毒育种方法，其特征在于，所述双层培养基被设置在培养容器内，在培养容器内先装入制备好的诱导培养基形成一个培养基底层，然后装入制备好的组织培养基形成一个培养基上层。
5.一种双层培养基，其特征在于，所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基。
6.利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，将组织培养基和诱导培养基分别制备，先将诱导培养基装入培养容器灭菌，将灭菌的诱导培养基在无菌室内降温至凝固成固态；再将组织培养基放入生物反应器内灭菌，待灭菌基质降至一定温度时，在无菌操作条件下将组织培养基放入装有诱导培养基的容器中，待组织培养基降至常温时，即得双层培养基。
7.根据权利要求6所述的利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，所述在无菌室内降温至凝固成固态是指在无菌室内降温至15°C或以下。
8.根据权利要求6所述的利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，所述待灭菌基质降至一定温度，是指待灭菌基质降至50°C或以下。
9.根据权利要求6所述的利用培养容器制备双层培养基的方法，其特征在于，所述常温是指20 25°C。
全文摘要
马铃薯茎尖脱毒育种方法及双层培养基，以提高效率，并降低污染率，其特征在于，利用双层培养基植入马铃薯茎尖后一次性成苗出试管薯，省却成苗后的移栽培养步骤；所述双层培养基包括一个培养基底层和堆叠在所述底层之上的一个培养基上层，所述培养基底层为制备好的诱导培养基，所述培养基上层为制备好的组织培养基；所述马铃薯茎尖植入在组织培养基中成苗；待苗长成后直接进入暗光培养，在所述诱导培养基中出试管薯。
文档编号A01H4/00GK102342248SQ20111029957
公开日2012年2月8日 申请日期2011年9月28日 优先权日2011年9月28日
发明者李亚雄 申请人:金色种业有限公司