专利名称：一种提高桑树黄酮类成分次生代谢产量的方法
技术领域：
本发明属于农业生物技术领域，涉及植物生长物质应用领域，特别是一种通过使用植物生长物质冠菌素提高桑树黄酮类成分次生代谢产量的方法。
背景技术：
现有技术桑树(Morus alba L.)为桑科多年生落叶乔木，我国主要分布于南方和长江流域， 以江苏、浙江、安徽、四川等最多，有着极大的资源优势。桑叶是重要的传统中药，桑叶入药首见于《神农本草经》，被列为中品。卫生部2002年发布的《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中将桑叶列入既是食品又是药品的物品名单。桑叶在中国及其它一些国家被作为一种发散风热药广泛应用。中华人民共和国药典记载桑叶甘、苦、寒，归肺、肝经，能疏风散热，清肺润燥，清肝明目，用于风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花等症，且具有降压、降糖、降脂、抗氧化等多种生物活性。对桑叶化学成分的研究表明，桑叶中含有黄酮类、生物碱类、苯丙素类、有机酸类、 甾体及三萜类等多种化合物。黄酮类化合物是桑叶的重要活性成分之一。桑叶黄酮具有调节降血压、抗氧化、抗肿瘤等药理活性。黄酮作为植物次生代谢产物，在桑树组织中含量很低，大大提高了提取纯化难度。范文杰等人提出了一种双黄酮胶囊、片剂配制方法(专利申请号201110096867.8)，其中黄酮成分来自于桑树总黄酮。朱月信等人提出了一种桑叶黄酮、生物碱复合物的提取分离方法，是一种集酸水浸提-溶剂萃取-柱层析分离方法(专利申请号201010216512. 3)，可制得桑叶复合提取物中黄酮含量10 90%、生物碱含量5 50%。李淑芬等人提出了一种以桑叶为原料连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法 (专利申请号200710060127.幻，通过一次投料连续高效地分离了桑叶中生物碱、黄酮及多糖三种生物活性成分，各步骤互不干扰，且提取率高，工艺操作简单，成本低，利于工业推广和应用。该提取分离工艺，方法简便、成本低、易于工业生产应用。综上，目前桑树黄酮类成分的研究多集中于分离耦合工艺优化和后续药用产品开发，针对提高桑树天然黄酮类成分次生代谢产量的研究未见报道。因此，通过调节植物次生代谢来提高桑树植株中的总黄酮积累量，对于桑树资源中黄酮类化合物的开发利用意义重大。冠菌素(Coronatine，COR, C18H25NO4)是一种新型高效的生物源植物生长物质，多由丁香假单胞菌属的植物致病菌变种分泌于胞外，能有效促进植物次级代谢产物的生物合成(如提高红豆杉次生代谢抗肿瘤药物紫杉醇的产量)，提高植物抗逆性，活性比茉莉酸高 100 10000倍。迄今，本发明利用植物生长物质冠菌素提高桑树中黄酮类成分次生代谢产量的研究尚属首次。
发明内容
解决的技术问题针对以上问题，本发明的目的是基于环保绿色植物生长物质冠菌素，调节桑树次生代谢过程，提供一种提高桑树总黄酮成分含量的方法。技术方案一种提高桑树黄酮类成分次生代谢产量的方法，向桑树幼苗的叶片喷施 0. 001-100 μ mol/L 的冠菌素。所述的桑树植株为桑科(Morus alba L.)。向桑树幼苗的叶片喷施冠菌素，重复2-8次，间隔l-5d。所用桑树为水萌发两周的桑幼苗，置于灭菌质地均勻的石英砂中，以Hoagland全营养液作为营养来源。将处理后的桑幼苗烘干提取总黄酮，测定其含量。有益效果本发明提供的新型植物生长物质冠菌素调节桑树次生代谢的新方法，可以快速有效地提高桑树组织内次生代谢产物总黄酮成分的含量。黄酮类化合物是桑叶的重要活性成分之一，具有降血压、抗氧化、抗肿瘤等药理活性。本发明将新型植物生长物质冠菌素应用于桑树的生理多相调节，调节桑树组织内部的次生代谢途径，大大提高了次生代谢产物黄酮类成分的产量。与空白对照组相比，当冠菌素浓度1 μ mol/L时，桑叶中桑叶中总黄酮提高了 70. 6%。因此，鉴于冠菌素能显著促进植物组织内次生代谢产物含量的提高，有助于今后规模化提升药食两用资源的增产增收和开发利用。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。桑叶黄酮的测定方法采用比色法。称取定量桑叶，加入10倍蒸馏水(pH 8，用碳酸盐缓冲液调节)，于85°C下回流提取池。抽滤，滤液真空浓缩至约0. 5h,抽滤，滤液定容，即为桑叶提取液。提取液样品加入0. 50mol/L的NaNO2溶液0. 5mL摇勻，5min后加入0. 30mol/ L的AlCl3溶液0. 5mL,摇勻，加入1. 00mol/L的NaOH溶液2. 5mL，用蒸馏水定容至8mL,以蒸馏水做参比，在510nm处测吸光度，通过芦丁的标准曲线求得样品中总黄酮含量。实施例1去离子水萌发桑树种子(Morus alba L.)，移于灭菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 两周后，喷施0 μ mol/L冠菌素，间隔两天重复喷施，共五次。取整株桑幼苗烘干称重，测得总黄酮含量为24. 08mg/L。实施例2去离子水萌发桑树种子(Morus alba L.)，移于灭菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 两周后，喷施0. 001 μ mol/L冠菌素，间隔两天重复喷施，共五次。取整株桑幼苗烘干称重， 测得总黄酮含量为22. 72mg/L，与空白组下降了 5. 6%。实施例3去离子水萌发桑树种子(Morus alba L.)，移于灭菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 两周后，喷施100 μ mol/L冠菌素，间隔两天重复喷施，共五次。取整株桑幼苗烘干称重，测得总黄酮含量为29. 25mg/L，与空白组相比提高了 21.0%。实施例4去离子水萌发桑树种子(Morus alba L.)，移于灭菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 两周后，喷施1. 000 μ mol/L冠菌素，间隔两天重复喷施，共五次。取整株桑幼苗烘干称重， 测得总黄酮含量为40. 85mg/L，与空白组相比提高了 70. 6%。
权利要求
1.一种提高桑树黄酮类成分次生代谢产量的方法，其特征在于向桑树幼苗的叶片喷施 0. 001-100 μ mol/L 的冠菌素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的桑树植株为桑科(Morusalba L.)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于向桑树幼苗的叶片喷施冠菌素，重复 2-8次，间隔l-5d。
全文摘要
本发明公开了一种提高桑树黄酮类成分次生代谢产量的方法。黄酮类化合物是桑叶的重要活性成分之一，具有降血压、抗氧化、抗肿瘤等药理活性。本发明将植物生长物质冠菌素应用于桑树的生理多相调节，向桑树幼苗的叶片喷施0.001-100μmol/L的冠菌素，促进桑树次生代谢，大大提高了次生代谢产物黄酮类成分的产量。与空白对照组相比，当冠菌素浓度1μmol/L时，桑叶中总黄酮含量提高了70.6％。冠菌素提高植物组织中次生代谢产量的应用，有助于提升药食两用资源的增产增收和开发利用。
文档编号A01P21/00GK102487632SQ201110342840
公开日2012年6月13日 申请日期2011年11月3日 优先权日2011年11月3日
发明者吴福安, 梁垚, 王俊 申请人:江苏科技大学