专利名称：一种明日叶快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及ー种明日叶快速繁殖方法，具体涉及ー种以明日叶的叶片为外植体，在培养基上诱导直接产生丛生芽的方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术：
明日叶(Angelica Keiskei Miq. Koidz),别名明日草、八丈草,原产于日本的八丈岛和伊豆诸岛。经常食用明日叶的当地人，长寿者很多，而且到了高龄仍很健康，能与年轻人一祥地劳动，所以又叫做长寿菜。近年来，明日叶中的许多成分逐渐地被了解，也因此受到瞩目，其中含有非常丰富的各种维生素、矿物质和微量元素，并且这些营养成分十分均衡。明日叶中含有的珍贵活性成分查尔酮有抗肿瘤、抗氧化以及清除自由基、抗胃溃疡、抗菌和抗炎等功效，所以明日叶的高食用价值和药用价值日益受到人们的重视。 明日叶为多年生草本，株高50-100cm;叶互生，三出复叶，叶缘具细锯齿；花白色，伞形花序顶生，发芽率低，这也就使组织培养技术在明日叶的繁殖起到很大作用。中国专利(CN1930952)报道了ー种明日叶的组织培养和快速繁殖方法，该方法包括(I)采用明日叶的带芽茎段作为外植体，经消毒后进行接种培养，获得愈伤组织，诱导出丛生状芽；(2)通过丛生芽在培养基里的増殖，将其增殖约3倍；(3)将增殖所得的丛生芽切割，移接到生根培养基中促其生根，获得完整的再生植株；(4)将再生植株移栽到营养土中，得到明日叶的移栽苗。发明人通过大量实验发现，诱导明日叶的叶片直接产生丛生芽的方法減少了诱导愈伤组织环节，节约诱导时间，減少诱导突变率，具有很好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种简单、快捷并能减少诱导突变率的诱导明日叶高频产生丛生芽的方法，以克服现有技术的主要不足。本发明实现过程如下
ー种明日叶快速繁殖方法，其利用明日叶的叶片作为外植体，在离体条件下不经愈伤组织阶段直接诱导培养产生丛生芽，之后再利用丛生芽诱导生根长成完整植株。上述明日叶快速繁殖方法具体包括以下步骤
(1)取材在明日叶成株上取新鲜叶片；
(2)灭菌叶片用HgCl2浸泡灭菌；
(3)接种和诱导将灭菌后的明日叶的叶片切成O.5 I. Ocm的正方形碎片，接种在诱导丛生芽的MS培养基上，培养20d产生绿色的芽点，继续培养10 15d分化长成丛生芽；
(4)生根待丛生芽长至2 3cm，剪下，插入含有NAAO. 5mg/L的MS生根培养基中进行生根培养。上述步骤(2)中，用流水冲洗叶片3 5min，然后用70%的酒精浸泡30 60s，再用O. 1%的HgCl2浸泡灭菌5 7 min,不停晃动减少外植体上的气泡，使叶片完全浸在升汞中充分消毒，最后用无菌水冲洗6 8次。上述步骤(3)中，所述诱导丛生芽的MS培养基组成为在MS培养基中加入I mg/L 2，4-D 和 O. 2 mg/L 6-BA。上述步骤(3)和(4)过程中培养条件为光照强度为40 μ mo I · m_2 · s—1，光照时间 16h，温度为 25°C ±2°C。本发明的优点与积极效果本发明直接诱导明日叶的叶片产生丛生芽，避免了先产生愈伤组织这ー过程，节约了诱导时间，減少了诱导突变率，为明日叶药用价值的开发提供了原料基础，具有很好的应用前景。
图I为实体显微镜下观察的芽点图片(20d)；
图2为实体显微镜下观察的丛生芽图片(30d)；
图3为在不同叶片外植体边缘直接长出丛生芽的图片。
具体实施例方式实施例I
(I)取材在生长良好的明日叶成株上取较为新鲜的完整叶片作为外植体。(2)消毒用流水冲洗叶片4 min,然后在超净工作台上用70%的酒精浸泡25 s,再用O. 1%的HgCl2浸泡灭菌6分钟，不停晃动，目的在于减少外植体上的气泡，使叶片完全 浸在升汞中，消毒充分，最后用无菌水冲洗7次。(3)接种和诱导将消毒好的明日叶的叶片切成O. 5 I. O厘米的正方形碎片，接种在含有I mg/L 2，4-D和O. 2 mg/L6_BA的MS诱导培养基上，20 d产生大量绿色芽点(图I )，继续培养，芽点直接长成丛生芽(图2)。经过数据采集统计，明日叶外植体直接出芽率达到了 90%以上(图3)。丛生芽诱导的培养条件为光照強度40 μ mol · m_2 · s'光照时间16h，温度为 25°C ±2°C。(5)生根待不定芽长至2-3cm，将诱导得到的不定芽剪下，插入MS+ NAA lmg/L的诱导生根培养基中进行培养，温度为25°C ±2°C、光强为40 μ mol · m 2 · s \光照时间16h条件，生根率为100%。培养2-3周后即可获得大量组培苗。
权利要求
1.ー种明日叶快速繁殖方法，其特征在于利用明日叶的叶片作为外植体，在离体条件下不经愈伤组织阶段直接诱导培养产生丛生芽，之后再利用丛生芽诱导生根长成完整植株。
2.根据权利要求I所述明日叶快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤 (1)取材在明日叶成株上取新鲜叶片； (2)灭菌叶片用HgCl2浸泡灭菌； (3)接种和诱导将灭菌后的明日叶的叶片切成O.5 I. Ocm的正方形碎片，接种在诱导丛生芽的MS培养基上，培养20d产生绿色的芽点，继续培养10 15d分化长成丛生芽； (4)生根待丛生芽长至2 3cm，剪下，插入含有NAAO. 5mg/L的MS生根培养基中进行生根培养。
3.根据权利要求2所述明日叶快速繁殖方法，其特征在于步骤(2)中，用流水冲洗叶片3 5min，然后用70%的酒精浸泡30 60s，再用O. 1%的HgCl2浸泡灭菌5 7 min,不停晃动减少外植体上的气泡，使叶片完全浸在升汞中充分消毒，最后用无菌水冲洗6 8次。
4.根据权利要求2所述明日叶快速繁殖方法，其特征在于步骤(3)中，所述诱导丛生芽的MS培养基组成为在MS培养基中加入I mg/L 2，4-D和O. 2 mg/L 6-BA。
5.根据权利要求2所述明日叶快速繁殖的方法，其特征在于步骤(3)和(4)中培养条件为光照强度为40 μ mo I · πΓ2 · s—1，光照时间16h，温度为25°C ±2°C。
全文摘要
本发明公开了一种以明日叶的叶片为外植体，在培养基上直接诱导产生丛生芽的快繁方法。该方法利用明日叶的叶片作为外植体，在离体条件下不经愈伤组织阶段直接诱导培养产生丛生芽，之后再利用丛生芽诱导生根长成完整植株。本发明避免了先产生愈伤组织这一过程，节约了诱导时间，减少了诱导突变率，为明日叶药用价值的开发提供了原料基础，具有很好的应用前景。
文档编号A01H4/00GK102668985SQ20121016859
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月28日 优先权日2012年5月28日
发明者刘梦昕, 曾洁, 李颖, 芦恒, 黄凤智, 黄萱 申请人:西北大学