专利名称：利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基。
背景技术：
胭脂花(Primula maximowiczii),别名段报春,蒙名为套日格-哈布日西勒-其其格，属报春花科(Primulaceae)报春花属(Primula),为一种早春开花的多年生草本野生花卉。主要分布于我国东北、华北至西北的亚高山草甸及较高山林地下、林缘和潮湿腐殖质丰富的地方，其观赏价值高，是一种很有园林开发价值的野生花卉。胭脂花还是一种野生的蒙药药用植物，据《新华本草纲要》记载，全草可以入药，有止痛、祛风的功能，可用于治疗癫痫 头痛。由于胭脂花分布海拔较高，入药需求量较大，近年来已日益匮乏。目前，有关胭脂花的研究工作主要集中在种子萌发条件、不同条件对胭脂花生长发育的影响、染色体核型观察及化学成分等，有关胭脂花的离体培养研究很少。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于获得胭脂花(Primula maximowiczii)体细胞再生植株的成套培养基，含有独立包装的培养基A ;所述培养基A为由MS培养基、2，4- 二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固体培养基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量为
I.Omg/L一2. Omg/L ;所述噻苯隆在所述培养基A中的含量为I. Omg/L一4. 0mg/L。在上述成套培养基中，所述2，4- 二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量具体可为
1.0mg/L 或 2. 0mg/Lo在上述成套培养基中，所述噻苯隆在所述培养基A中的含量具体可为I. 0mg/L、
2.0mg/L 或 4. 0mg/Lo在上述成套培养基中，所述成套培养基还含有独立包装的培养基B ;所述培养基B为由MS培养基、2，4- 二氯苯氧乙酸和6-苄氨基腺嘌呤制成的固体培养基；所述2，4- 二氯苯氧乙酸在所述培养基B中的含量为4. 0mg/L,所述6-节氨基腺嘌呤在所述培养基B中的含量为2. 0mg/L。在上述成套培养基中，所述MS培养基为表I所不的培养基。本发明的另一个目的是提供一种获得胭脂花(Primula maximowiczii)体细胞再生植株的方法，包括将所述胭脂花的叶柄用所述培养基A培养获得所述胭脂花的不定芽，最后获得所述胭脂花的再生植株。在上述方法中，所述胭脂花的叶柄取自株高为2_3cm的所述胭脂花实生苗。在上述方法中，还包括将所述胭脂花不定芽用所述培养基B进行扩繁培养的步骤。在上述方法中，还包括将所述胭脂花不定芽用不含植物生长调节剂的MS培养基进行生根培养的步骤。在上述方法中，所述培养的光照和温度条件如下每天24小时中光照16小时，光照强度为1500-2000LUX，其余时间为黑暗，温度为25°C。实验证明,将胭脂花(Primula maximowiczii)叶柄外植体在含不同浓度植物生长调节剂2，4-D (I. 0-2. Omg/L)和TDZ (I. 0-4. Omg/L)组合的MS培养基中进行诱导，不定芽诱导率在19. 0%—52. 4%之间，明显高于含单一的植物生长调节剂2，4-D (I. 0-4. Omg/L)或TDZ (I. 0-4. Omg/L)的MS培养基的不定芽诱导率2. 4% —19. 0%。在含2，4-D 4. 0mg/L和6-BA 2. 0mg/L的MS培养基中进行不定芽扩繁培养，扩增系数可达9. 2。本发明以胭脂花叶柄为外植体，建立了完整稳定的胭脂花体细胞再生体系，对有效保护和利用野生胭脂花资源具有重要价值。
图I为本发明使用的胭脂花(Primula maximowiczii)无菌实生苗。图2为胭脂花叶柄外植体在不定芽诱导培养基上培养14天产生的不定芽。图3为胭脂花不定芽经扩繁培养14天产生的丛生不定芽。图4为胭脂花不定芽经生根培养获得的再生苗。图5为移栽成活的胭脂花再生植株。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。胭脂花(Primula maximowiczii):中央民族大学；参考文献毛娟娟，潘会堂，唐明.光质对胭脂花幼苗成长的影响.安徽农业科学.2009, 37(17) :7961-7962.TDZ :中文名称噻苯隆，化学名称N-苯基-N’ _1，2，3_噻二唑_5_脲，北京普博欣生物科技有限责任公司生产，纯度> 99%。2，4-D :化学名称2，4_ 二氯苯氧乙酸，北京普博欣生物科技有限责任公司生产，纯度 > 99%o6-BA :化学名称6-苄氨基腺嘌呤，北京普博欣生物科技有限责任公司生产，纯度> 99%。下述实施例中MS培养基的组成如表I所示表I. MS培养基组成(pH5. 8)
权利要求
1.用于获得胭脂花(Primulamaximowiczii)体细胞再生植株的成套培养基,含有独立包装的培养基A ;所述培养基A为由MS培养基、2，4- 二氯苯氧乙酸和噻苯隆制成的固体培养基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量为I. Omg/L—2. Omg/L ;所述噻苯隆在所述培养基A中的含量为I. Omg/L—4. Omg/L。
2.根据权利要求I所述的成套培养基，其特征在于所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培养基A中的含量为I. Omg/L或2. Omg/L。
3.根据权利要求I或2所述的成套培养基，其特征在于所述噻苯隆在所述培养基A中的含量为 I. Omg/L、2. Omg/L 或 4. Omg/L。
4.根据权利要求1-3中任一所述的成套培养基，其特征在于所述成套培养基中含有独立包装的培养基B ;所述培养基B为由MS培养基、2，4- 二氯苯氧乙酸和6-苄氨基腺嘌呤制成的固体培养基；所述2，4-二氯苯氧乙酸在所述培养基B中的含量为4. Omg/L，所述.6-苄氨基腺嘌呤在所述培养基B中的含量为2. Omg/L。
5.获得胭脂花(Primulamaximowiczii)体细胞再生植株的方法,包括将所述胭脂花的叶柄用权利要求1-3中任一所述的培养基A培养获得所述胭脂花不定芽，最后获得所述胭脂花的再生植株。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述胭脂花的叶柄取自株高为2-3cm的所述胭脂花实生苗。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于所述方法包括将所述胭脂花不定芽用权利要求4所述的培养基B进行扩繁培养的步骤。
8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于所述方法包括将所述胭脂花不定芽用不含植物生长调节剂的MS培养基进行生根培养的步骤。
9.根据权利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于所述培养的光照和温度条件如下每天24小时中光照16小时，光照强度为1500-2000LUX，其余时间为黑暗，温度为25°C。
全文摘要
本发明公开了一种利用叶柄获得胭脂花体细胞再生植株的方法及其培养基。将胭脂花(Primula maximowiczii)叶柄外植体在含不同浓度植物生长调节剂2,4-D(1.0-2.0mg/L)和TDZ(1.0-4.0mg/L)组合的MS培养基中进行诱导的不定芽诱导率在19.0%—52.4%之间，明显高于含不同单一的植物生长调节剂2，4-D(1.0-4.0mg/L)或TDZ(1.0-4.0mg/L)的MS培养基的不定芽诱导率2.4%—19.0%。在含2,4-D 4.0mg/L和6-BA 2.0mg/L的MS培养基中进行不定芽扩繁培养，扩增系数可达9.2。本发明以胭脂花叶柄为外植体，建立了完整稳定的胭脂花体细胞再生体系，对有效保护和利用野生胭脂花资源具有重要价值。
文档编号A01H4/00GK102715083SQ20121018548
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月6日 优先权日2012年6月6日
发明者刘坤, 宋韵霏, 张璐, 李建飞, 毕凯丽, 王俊丽, 王前 申请人:中央民族大学