专利名称：紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法
技术领域：
本发明属于植物栽培领域，涉及植物的组织培养，特别涉及ー种紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法。
背景技术：
紫珠为马鞭草科紫珠属落叶灌木，它株形秀丽，枝条柔软，耐寒耐阴性強。配植于庭院、公园、緑地边缘，新奇别致，与常绿树搭配种植显得娇艳可爱，是花果俱佳的观赏花木，是园林緑化的优良树种。其根、茎、叶、花、籽均可入药，有清热解毒、凉血止血、消炎生肌、抗癌等奇特功能，常被用于呕血、咯血、衄血、便血、尿血、牙龈出血、崩漏、皮肤紫癜、夕卜伤出血、痈疽肿毒、毒蛇咬伤、烧伤等症的治疗，是多种中药的常用组方之一，需求量日益增大。但是现有的播种、扦插等常规紫珠繁殖方法所能提供的种苗已经远远难以满足对于紫珠的生产需求。ー种快速高效的紫珠育苗方法亟待出现。CN 101406125A公开了ー种中药植物广东紫珠苗木人工快速培育方法，其选择PH4-7、含有机肥的砂质壤土，选择1-2年生健壮木质化紫珠枝条，斜剪成10-15cm插条进行扦插，夏、秋稍抽发期喷施叶肥，控制苗高IOOcm以内以矮化壮苗，扦插后培育7-8个月出圃移栽。其扦插成活率较高，但是扦插培育的紫珠苗容易感染病菌，使品种退化，而且培育过程不易控制，管理困难。CN 101406126B公开了ー种中药植物广东紫珠种籽人工快速繁殖方法，其采用将成熟紫珠果实保存于2-8°C的环境中，于播种前去其果皮果肉，播种于8°C以上的苗床营养土中；当幼苗长至15-20cm时移入pH值5. 5-6. 5的酸性砂质壤土中，保持湿润、防涝、施肥、除草、防虫，培养5-8个月后，于12月至次年2月即可移栽。其种籽发芽育苗成活率高，缺点是繁殖条件对于环境的温度、壤土的酸度等要求较高，不易控制；并且仍然无法在短时间内提供足以满足园林绿化、中药开发等需要的大量种苗。植物的组织培养是根据植物细胞具有“全能性”的理论，于近年来发展起来的ー项无性繁殖的新技木。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义则是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物的组织培养具有①占用空间小，不受地区、季节限制；②培养周期短、可短时间大量繁殖；③不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征；④培养脱毒作物投资少，经济效益高等众多优点，正逐渐成为多种植物培育的新方式。但是作为园艺新品种的紫珠，目前尚未见有关用植物的组织培养方法进行培育报道。
发明内容
本发明目的在于，克服现有技术中紫珠繁殖率低、生长缓慢、遗传稳定性差以及栽培过程受环境影响较大、不易控制等缺陷，提供ー种紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法，其脱病毒、繁殖率高、生长速率快，能有效避免品种退化问题，而且管理方便，利于自动化控制，可以在短时间内提供大量种苗。为达到上述目的，本发明采用如下技术方案ー种紫珠的组织培养快速育苗方法，包括如下步骤(I)外植体消毒①取紫珠当年生带腋芽的枝条并除去叶片后作为外植体，在洗涤液中浸泡。优选地，所述洗涤液为浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液，即将Ig洗衣粉溶于IOOml水中所得到的洗涤液。所述浸泡优选10_20min,最优选为15min。②刷洗后于流水下冲洗。所述刷洗优选用软毛刷子轻轻刷洗。所述冲洗优选2_4h，最优选为3h ；③在超净工作台上，先放入酒精中浸泡，再用无菌水冲洗；所述超净工作台是可提供局部无尘无菌的高清洁度工作环境的工作台设备，是本领域的常用设备。优选地,所述酒精是70wt%的酒精。所述酒精中浸泡优选30s_60s，最优选为40-50s。所述无菌水冲洗优选2-6次，最优选4次。④升汞消毒后再用无菌水冲洗。优选地,所述升萊是O. lwt%的升萊。所述升萊消毒优选10_15min,最优选为12min。所述无菌水冲洗优选为4-8次，最优选为6次。⑤吸干表面水分，将茎段剪成带I个腋芽的茎段；所述莖段的长度优选为O. 8-1. 2cm,最优选为1cm。(2)诱导培养将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中进行诱导培养，待新梢长出，进行下 一步骤。优选地，所述诱导培养基是同时添加了 O. 2-0. 5mg/L的6_BA (6苄基嘌呤)和O. 01-0. 04mg/L的IBA (吲哚丁酸)的MS培养基；最优选为同时添加O. 3mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA的MS培养基。所述MS培养基的配方为大量元素(母液I)mg/L
NH4NO333000
KNO338000
CaC b 21-I2O8800
MgS04'7H207400
KCH2PO43400微量元素(母液II)
KI166
H3BO31240
MnS04*4H204460
ZnSO4-TH2O1720
Ν&2Μοθ4*2Η2θ50
CuSO4OH2O5
CoC12*6H205铁盐(母液III)
FeS04'7H205560
Na2-EDTACH2O7460
有机成分(母液IV)
肌醇20000
烟酸100
盐酸吡哆醇(维生素B6)100 盐酸硫胺素(维生素BI)100
甘氨酸400
本发明所述的诱导培养基中还添加了 25_30g/L的蔗糖以及6. 5_8g/L的琼脂，且调PH值至5. 2-5. 8，在温度121で、压カO. 105MPa的条件下灭菌20min。优选地，所述诱导培养的条件为于温度22_28°C、光照强度2000_2500Lux、光照周期12-16h/d的条件下培养30-45d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养40d。所述6-BA (6苄基嘌呤)为ー种人工 合成的细胞分裂素，添加到培养基中能够将氨基酸、生长素、无机盐等营养成分向处理部位调运，具有抑制植物叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老的功能。所述IBA (吲哚丁酸)为ー种植物主根的生长促进剂，能够促进细胞分裂与细胞生长，主要是加速根的生长，提高生根的百分率、发芽率以及成活率。(3)増殖培养将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行增殖培养，待新梢长至
4-5cm时，进行下一步骤。优选地，所述增殖培养基是同时添加了 O. 3-0. 8mg/L的6-BA和O. 01-0. 05mg/L的IBA的MS培养基；最优选为同时添加O. 5mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA的MS培养基。所述MS培养基的配方与上文所述完全相同，此处不赘述。本发明所述的增殖培养基中还添加了 25_30g/L的蔗糖以及6. 5_8g/L的琼脂，且调PH值至5. 2-5. 8，在温度121で、压カO. 105MPa的条件下灭菌20min。优选地，所述增殖培养的条件为于温度22_28°C、光照強度2000_2500LUX、光照周期12-16h/d的条件下培养40-60d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养50d。(4)生根培养将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根培养，得到主根长3-4cm的生根苗。优选地，所述生根培养基是添加了 O. 03-0. 06mg/L的IBA的1/2MS培养基；最优选为添加了 O. 05mg/L的IBA的1/2MS培养基。所述1/2MS培养基是将上述MS培养基中的大量元素减半，即其中含有16500mg/L的 NH4N03、19000mg/L 的 KN03、4400mg/L 的 CaCl2 *2H20,3700mg/L 的 MgSO4 ·7Η20 以及 1700mg/L的KH2PO4,而保持原MS培养基中的其它成分以及含量不变。本发明所述的生根培养基中还添加了 25_30g/L的蔗糖以及6. 5_8g/L的琼脂，且调PH值至5. 2-5. 8，在温度121で、压カO. 105MPa的条件下灭菌20min。优选地，所述生根培养的条件为于温度22_28°C、光照強度2000_2500LUX、光照周期12-16h/d的条件下培养15-25d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养20d。进ー步地，本发明还提供根据上述紫珠的组织培养快速育苗方法培养出的生根苗的移栽方法，具体步骤如下将生根苗暴露于空气中炼苗，洗去根部的培养基后移栽至黄土、泥炭土、细河沙的混合基质中，进行遮阴处理并隔天浇水一次。优选地，所述炼苗时间为5-10d，最优选为7d。
优选地，所述混合基质中黄土、泥炭土、细河沙的重量比为1-2:1-2:1，最优选为
2 2 I ο优选地，所述遮阴处理为60%_80%的遮阴处理20天，最优选为70%的遮荫处理天。移栽苗的成活率达95%_99%。综上所述，本发明优化后的技术方案为ー种紫珠的组织培养快速育苗方法，包括如下步骤(I)外植体消毒①取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡10-20min ；②轻轻刷洗后于流水下冲洗2_4h ；③在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡30s_60s，无菌水冲洗2-6次；④O. lwt%的升萊消毒10_15min,无菌水冲洗4_8次；⑤吸干表面水分，将茎段剪成O. 8-1. 2cm长且带I个腋芽的茎段。(2)诱导培养将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，于温度22_28°C、光照強度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养30_45d，待新梢长出，进行下ー步骤；所述诱导培养基是同时添加了 O. 2-0. 5mg/L的6-BA和O. 01-0. 04mg/L的IBA的MS培养基；(3)増殖培养
将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，于温度22_28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养40_60d，待新梢长至4_5cm时，进行下ー步骤；所述增殖培养基是同时添加了 O. 3-0. 8mg/L的6-BA和O. 01-0. 05mg/L的IBA的MS培养基；(4)生根培养将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根，于温度22-28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养15_25d，得到主根长3-4cm的生根苗；所述生根培养基是添加了 O. 03-0. 06mg/L的IBA的1/2MS培养基。根据上述紫珠的组织培养快速育苗方法培养出的生根苗的移栽方法，具体步骤如下将生根苗暴露于空气中炼苗5-10d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为1-2:1-2:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行60%-80%的遮阴处理20天井隔天浇水一次。本发明最优化的技术方案为—种紫珠的组织培养快速育苗方法，包括如下步骤(I)外植体消毒①取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡15min ；
②用软毛刷轻轻刷洗后于流水下冲洗3h ；③在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡40-50s，无菌水冲洗4次；④O. lwt%的升汞消毒12min，无菌水冲洗6次；⑤吸干表面水分，将茎段剪成Icm长且带I个腋芽的茎段；(2)诱导培养 将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，于温度25°C、光照強度2500LUX、光照周期14h/d的条件下培养40d，待新梢长出，进行下ー步骤；所述诱导培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 3mg/L的6-BA和O. 02mg/L的 IBA ；(3)増殖培养将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，于温度25°C、光照强度2500LUX、光照周期14h/d的条件下培养50d，待新梢长至4_5cm时，进行下ー步骤；所述增殖培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 5mg/L的6-BA和O. 02mg/L的 IBA ；(4)生根培养将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根，于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养20d，得到主根长3_4cm的生根苗；所述生根培养基是添加了 O. 05mg/L的IBA的1/2MS培养基。根据上述紫珠的组织培养快速育苗方法培养出的生根苗的移栽方法，具体步骤如下将生根苗暴露于空气中炼苗7d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为2:2:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行70%的遮阴处理20天井隔天浇水一次。本发明的ー种紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法具有脱病毒、繁殖率高、繁殖速率快等优点，移栽苗的成活率达95%-99%，解决了现有技术中紫珠繁殖率低、生长缓慢、遗传稳定性差的问题，可以在短时间内提供大量种苗，提供了一种エ厂化大規模提供紫珠成品苗的方法，满足了园林绿化、中药资源开发的迫切需要。下面结合具体实施方式
对本发明作进ー步详细说明。但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的权利范围以权利要求书为准。
具体实施例方式为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性的实施例如下实施例I :紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法，具体步骤如下(I)取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，先在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡15min，接着用软毛刷轻轻刷洗，再在流水下冲洗3h ;然后在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡45s,用无菌水冲洗4次；再用O. lwt%的升萊消毒12min，无菌水冲洗6次；吸干表面水分后将茎段剪成Icm长且带I个腋芽的茎段。
(2)将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 2mg/L的6-BA和O. 01mg/L的IBA ;于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养40d，可见新梢长出，污染率< 23%，初代诱导率77%。(3)将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 3mg/L的6-BA和O. Olmg/L的IBA ;于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养，每50d继代增殖一次，增殖倍数达到3倍，共继代4次，得到4-5cm长的新梢。(4)将步骤(3)中得到的新梢转移到生根培养基上进行生根培养，该培养基是在1/2MS培养基中添加了 O. 05mg/L的IBA ;于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养20d，得到主根长3-4cm的生根苗。(5)将步骤(4)中培养出的生根苗暴露于空气中炼苗7d，洗去根部的培养基，移栽 至重量比为1:1:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行70%的遮阴处理。移栽成活率为 95%。实施例2 紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法，具体步骤如下(I)取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，先在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡lOmin，接着用软毛刷轻轻刷洗，再在流水下冲洗2h ;然后在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡30s,用无菌水冲洗2次；再用O. lwt%的升萊消毒lOmin，无菌水冲洗4次；吸干表面水分后将茎段剪成O. 8cm长且带I个腋芽的茎段。(2)将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 3mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA ;于温度22で、光照强度2000Lux、光照周期12h/d的条件下培养30d，可见新梢长出，污染率< 15%，初代诱导率85%。(3)将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 5mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA ;于温度22°C、光照强度2000Lux、光照周期12h/d的条件下培养，每40d继代增殖一次，增殖倍数达到6倍，共继代4次，得到4-5cm长的新梢。(4)将步骤(3)中得到的新梢转移到生根培养基上进行生根培养，该培养基是在1/2MS培养基中添加了 O. 03mg/L的IBA ;于温度22°C、光照强度2000Lux、光照周期12h/d的条件下培养15d，得到主根长3-4cm的生根苗。(5)将步骤(4)中培养出的生根苗暴露于空气中炼苗5d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为1.5:1.5:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行60%的遮阴处理。移栽成活率为98%。实施例3:紫珠组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法，具体步骤如下(I)取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，先在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡20min，接着用软毛刷轻轻刷洗，再在流水下冲洗4h ;然后在超净工作台上,放入70wt%的酒精中浸泡60s，用无菌水冲洗6次；再用O. lwt%的升汞消毒15min，无菌水冲洗8次；吸干表面水分后将茎段剪成I. 2cm长且带I个腋芽的茎段。(2)将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 5mg/L的6-BA和O. 04mg/L的IBA ;于温度28で、光照强度2200Lux、光照周期16h/d的条件下培养45d，可见新梢长出，污染率< 20%，初代诱导率80%。(3)将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，该培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 8mg/L的6-BA和O. 05mg/L的IBA ;于温度28°C、光照强度2200Lux、光照周期16h/d的条件下培养，每60d继代增殖一次，增殖倍数达到5倍，共继代4次，得到4-5cm长的新梢。(4)将步骤(3)中继代得到的新梢转移到生根培养基上进行生根培养，该培养基是 在1/2MS培养基中添加了 O. 06mg/L的IBA ;于温度28°C、光照强度2200Lux、光照周期16h/d的条件下培养25d，得到主根长3-4cm的生根苗。(5)将步骤(4)中培养出的生根苗暴露于空气中炼苗10d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为2:2:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行80%的遮阴处理。移栽成活率为99%。应该注意到并理解，在不脱离后附的权利要求所要求的本发明的精神和范围的情况下，能够对上述详细描述的本发明做出各种修改和改进。因此，要求保护的技术方案的范围不受所给出的任何特定示范教导的限制。申请人:声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
权利要求
1.ー种紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，包括(I)外植体消毒、(2)诱导培养、(3)增殖培养、(4)生根培养四个步骤。
2.根据权利要求I所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述步骤(I)的具体步骤为 ①取紫珠当年生带腋芽的枝条并除去叶片后作为外植体，在洗涤液中浸泡； 优选地，所述洗涤液为浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液； 所述浸泡优选10-20min,最优选为15min ； ②刷洗后于流水下冲洗； 所述冲洗优选2-4h,最优选为3h ； ③在超净工作台上，先放入酒精中浸泡，再用无菌水冲洗； 优选地，所述酒精是70wt%的酒精； 所述酒精中浸泡优选30s-60s，最优选为40-50s ； 所述无菌水冲洗优选2-6次，最优选4次； ④升汞消毒后再用无菌水冲洗； 优选地，所述升萊是O. lwt%的升萊； 所述升萊消毒优选10-15min,最优选为12min ； 所述无菌水冲洗优选为4-8次，最优选为6次； ⑤吸干表面水分，将茎段剪成带I个腋芽的茎段； 所述莖段的长度优选为O. 8-1. 2cm,最优选为1cm。
3.根据权利要求I或2所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体步骤为 将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中进行诱导培养，待新梢长出，进行下一歩骤； 优选地，所述诱导培养基是同时添加了 O. 2-0. 5mg/L的6-BA和O. 01-0. 04mg/L的IBA的MS培养基；最优选为同时添加O. 3mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA的MS培养基； 优选地，所述诱导培养的条件为于温度22-28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12-16h/d的条件下培养30-45d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养40d。
4.根据权利要求1-3之一所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体步骤为 将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行增殖培养，待新梢长至4-5cm时，进行下一步骤； 优选地，所述增殖培养基是同时添加了 O. 3-0. 8mg/L的6-BA和O. 01-0. 05mg/L的IBA的MS培养基；最优选为同时添加O. 5mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA的MS培养基； 优选地，所述增殖培养的条件为于温度22-28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12-16h/d的条件下培养40-60d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养50d。
5.根据权利要求1-4之一所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述步骤(4)的具体步骤为将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根培养，得到主根长3_4cm的生根苗； 优选地，所述生根培养基是添加了 O. 03-0. 06mg/L的IBA的1/2MS培养基；最优选为添加了 O. 05mg/L的IBA的1/2MS培养基； 优选地，所述生根培养的条件为于温度22-28°C、光照強度2000-2500LUX、光照周期12-16h/d的条件下培养15-25d ;最优选为于温度25°C、光照强度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养20d。
6.根据权利要求1-5之一所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)外植体消毒 ①取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡10-20min ； ②刷洗后于流水下冲洗2-4h； ③在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡30s-60s，无菌水冲洗2-6次； ④O.lwt%的升萊消毒10-15min,无菌水冲洗4_8次； ⑤吸干表面水分，将茎段剪成O.8-1. 2cm长且带I个腋芽的茎段。
(2)诱导培养 将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，于温度22-28で、光照強度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养30_45d，待新梢长出，进行下ー步骤； 所述诱导培养基是同时添加了 O. 2-0. 5mg/L的6-BA和O. 01-0. 04mg/L的IBA的MS培养基; (3)增殖培养 将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，于温度22-28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养40_60d，待新梢长至4_5cm时，进行下ー步骤； 所述增殖培养基是同时添加了 O. 3-0. 8mg/L的6-BA和O. 01-0. 05mg/L的IBA的MS培养基; (4)生根培养 将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根，于温度22-28°C、光照强度2000-2500Lux、光照周期12_16h/d的条件下培养15_25d，得到主根长3-4cm的生根苗； 所述生根培养基是添加了 O. 03-0. 06mg/L的IBA的1/2MS培养基； 所述1/2MS是将MS培养基中大量元素减半，其它成分保持不变而获得的。
7.根据权利要求1-6之一所述的紫珠的组织培养快速育苗方法，其特征在于，包括如下步骤 (1)外植体消毒 ①取紫珠当年生带腋芽的健壮枝条并除去叶片后作为外植体，在浓度为lwt%的洗衣粉的水溶液中浸泡15min ； ②刷洗后于流水下冲洗3h；③在超净工作台上，放入70wt%的酒精中浸泡40-50s，无菌水冲洗4次； ④O.lwt%的升萊消毒12min,无菌水冲洗6次； ⑤吸干表面水分，将茎段剪成Icm长且带I个腋芽的茎段； (2)诱导培养 将步骤(I)处理过的茎段接种到诱导培养基中，于温度25°C、光照強度2500LUX、光照周期14h/d的条件下培养40d，待新梢长出，进行下ー步骤； 所述诱导培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 3mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA ； (3)增殖培养 将步骤(2)中得到的新梢剪下转移到増殖培养基中进行増殖，于温度25°C、光照強度2500Lux、光照周期14h/d的条件下培养50d，待新梢长至4_5cm时，进行下ー步骤； 所述增殖培养基是在MS常规培养基中同时添加了 O. 5mg/L的6-BA和O. 02mg/L的IBA ； (4)生根培养 将步骤(3)中得到的长至4-5cm的新梢转移到生根培养基中进行生根，于温度25°C、光照強度2500LUX、光照周期14h/d的条件下培养20d，得到主根长3-4cm的生根苗； 所述生根培养基是添加了 O. 05mg/L的IBA的1/2MS培养基。
8.根据权利要求1-7之一所述的紫珠的组织培养快速育苗方法培养出的生根苗的移栽方法，其特征在于，具体步骤如下 将生根苗暴露于空气中炼苗，洗去根部的培养基后移栽至黄土、泥炭土、细河沙的混合基质中，进行遮阴处理并隔天浇水一次； 优选地，所述炼苗时间为5-10d，最优选为7d ； 优选地，所述混合基质中黄土、泥炭土、细河沙的重量比为1-2:1-2:1 ; 优选地，所述遮阴处理为60%-80%的遮阴处理20天，最优选为70%的遮荫处理20天。
9.根据权利要求8所述的生根苗的移栽方法，其特征在于，具体步骤如下 将生根苗暴露于空气中炼苗5-10d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为1-2:1-2:1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行60%-80%的遮阴处理20天井隔天浇水一次。
10.根据权利要求8或9所述的生根苗的移栽方法，其特征在于，具体步骤如下 将生根苗暴露于空气中炼苗7d，洗去根部的培养基，移栽至重量比为2 :2 1的黄土、泥炭土、细河沙混合基质中，进行70%的遮阴处理20天井隔天浇水一次。
全文摘要
本发明属于植物栽培领域，涉及植物的组织培养，特别涉及一种紫珠的组织培养快速育苗方法及其生根苗移栽方法。该方法包括外植体消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、组培苗移栽五个阶段，具有脱病毒、繁殖率高、繁殖速率快等优点，解决了现有技术中紫珠繁殖率低、生长缓慢、遗传稳定性差的问题，可以在短时间内提供大量种苗。本发明提供了一种工厂化大规模提供紫珠成品苗的方法，满足了园林绿化、中药资源开发的迫切需要。
文档编号A01H4/00GK102668988SQ201210190349
公开日2012年9月19日 申请日期2012年6月8日 优先权日2012年6月8日
发明者邓艳 申请人:江苏九久环境科技有限公司