专利名称：一种香根鸢尾驯化苗的组培方法
技术领域：
本发明涉及一种香根鸢尾驯化苗的组培方法，属于植物组培技术领域。
背景技术：
香根鳶尾(Jri1SLam.)又叫白色花鳶尾,是鳶尾属为多年生草本植物。地下根茎发达，叶剑形，花茎直立，一朵至多朵花，单朵顶生或总状花序，花由苞内抽出，花白色或淡蓝色。原产于欧洲，性喜温暖，耐寒、耐干旱、耐瘠薄、怕涝。香根莺尾是极好的园林观赏花卉，也是名贵的香料植物。其花大而艳丽，可用作切花，也常用用于庭园观赏。根茎提取的莺尾硬脂和莺尾浸膏，是用于高级化妆品、香皂、香水以及食品的高级天然香料。随着香根鸢尾应用价值的进一步开发，香根鸢尾种苗需求也越来越大，如何提高种苗的繁殖能力成为亟待解决的问题。由于香根莺尾主要靠根茎分生繁殖，不仅对母本材料要求高，用量大，而且繁殖率低，同时还受季节的限制，难以进行规模化、标准化生产和优·良品种的大面积推广。
发明内容
为克服现有香根鸢尾种苗繁殖技术存在材料要求高、用量大、难以规模化生产等问题，本发明的目的在于提供一种香根鸢尾驯化苗的组培方法，通过改进生产流程和培养基配方，来提高增殖率，降低生产成本，同时将优良性状的种苗固定下来，操作简变易行，以满足优质种苗的大规模生产需要。本发明提供的是这样一种香根鸢尾驯化苗的组培方法，其特征在于经过下列步骤
A.将消毒灭菌处理过的根茎嫩芽，在无菌条件下，接入下列诱导培养基中MS+萘乙酸(NAA) O. 2 O. 5mg/L+6-苄基氨基嘌呤(6-BA) I. O 2. Omg/L+ 蔗糖 30000 mg/L+ 琼脂6500 mg/L，pH=5. 8 6. 0，在光照强度为2000 30001x，温度为25±2°C，光照时间为8 12h/d的条件下，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出O. 5 Icm的幼芽，切下幼芽；
B.将A步骤切下的幼芽转接到新的与A步骤相同的诱导培养基中，并在与A步骤相同的培养条件下，重复该步骤进行继代培养3 5次，每次继代周期为20 30d ；
C.增殖数量达到生产所需量时，2cm以下的丛生芽返回B步骤进行继续培养，2.Ocm以上的健壮植株接种到下列培养基中1/2 MS+萘乙酸(NAA)O. 2 O. 5mg/L+蔗糖30000 mg/L+琼脂6500 mg/L，pH=5. 8 6. O，在光照强度为2000 3000 lx，温度为25 ±2°C，光照时间为8 12h/d的条件下，生根培养至植株基部长出3 7条细根；
D.取C步骤的生根植株于室外散射光下进行常规炼苗10 15d，将炼苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量浓度为O. I O. 2%的多菌灵溶液中消毒I 2min后，移栽至装有下列质量比基质的育苗袋中腐植土 红土 珍珠岩=1 1 :1，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，即得香根鸢尾驯化苗。
所述步骤A中的消毒灭菌处理是将尚未发芽的香根鸢尾根茎洗净，在室温条件下放置于湿润的苔藓上，每3天喷一次水以保持湿润，直至根茎上长出O. 5 2. Ocm的嫩芽，将嫩芽自基部切下，用水冲洗后，再用体积浓度为75%的酒精对其表面擦拭I 2次，然后再用IOOmL质量浓度为O. 05 O. 1%升汞和O. I O. 15mL吐温的混合溶液浸泡10 20分钟，用无菌水洗3次，每次2min，然后用无菌滤纸吸干，得到消毒灭菌处理过的根茎嫩芽。本发明具有下列优点和效果本发明可减少药品用量，通过同步进行芽诱导和增殖培养，可有效控制变异株的产生，简化组培程序，缩短了繁育周期，节约了生产成本，能将香根鸢尾品种的优良性状快速固定并保持下来，解决了常规繁育体系生产亲本用量大，种苗质量不稳定、种苗繁殖速度慢的难题。I.用试管繁殖技术在培养室内即可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了 经济效益，克服了种苗无法周年进行生产的难点；
2.繁殖速度快，2(Γ30天为一个周期，繁殖倍数可达3 5倍；
3.解决了常规繁育体系生产的种苗亲本来源复杂，种苗质量不稳定的难题，通过本发明，使种苗性状稳定，种苗来源单一，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为市场提供统一标准的优良种苗；
4.本发明在外植体的选择方面，选择优良株系，通过本发明中的快速繁殖方法将抗性强的香根鸢尾品种优良种性快速地固定并保持下来，有效缩短了繁育周期；
5.对整个香根鸢尾种苗生产技术流程中的关键环节进行优化整合，采用MS基本培养液和大量元素减半的1/2MS培养液，减少药品用量，节约成本，同步进行芽诱导和增殖培养，简化了组培技术的培养程序，只需两种配方的培养基，不经过愈伤组织的形成，直接长成新芽，减少不定芽发生变异的机率，可有效控制变异株的产生，利于安排生产计划；
6.无菌生根苗直接移栽进入育苗袋中，省去了组培苗营养钵移栽的环节，移栽成活的种苗便于运输，摘去育苗袋后直接栽种。
具体实施例方式为了更好地说明本发明，下面给出本发明的实施例，但本发明的内容并不仅限于此。实施例I
Α.将尚未发芽的香根鸢尾根茎洗净，在室温条件下放置于湿润的苔藓上，每3天喷一次水以保持湿润，直至根茎上长出O. 5cm的嫩芽，将嫩芽自基部切下，用水冲洗后，再用体积浓度为75%的酒精对其表面擦拭2次，然后再用IOOmL质量浓度为O. 05%升汞和O. 15mL吐温的混合溶液浸泡20分钟，用无菌水洗3次，每次2min，然后用无菌滤纸吸干，得到消毒灭菌处理过的根茎嫩芽；在无菌条件下，接入下列诱导培养基中MS+萘乙酸(NAA) O. 3mg/L+6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 2. Omg/L+ 蔗糖 30000 mg/L+ 琼脂 6500 mg/L, pH=5. 8，在光照强度为20001x，温度为23°C，光照时间为8h/d的条件下，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出O. 5cm的幼芽，切下幼芽；
B.将A步骤切下的幼芽转接到新的与A步骤相同的诱导培养基中，并在与A步骤相同的培养条件下，重复该步骤继代培养3次，每次继代周期为30d，增殖倍数可达3倍；
C.增殖数量达到生产所需量时，2cm以下的丛生芽返回B步骤继续培养，2.Ocm以上的健壮植株接种到下列培养基中进行生根培养1/2 MS+萘乙酸(NAA)O. 3mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂6500 mg/L, pH=6. 0，在光照强度为2500 lx，温度为25°C，光照时间为12h/d的条件下，生根培养至植株基部长出3条细根；
D.取C步骤的生根植株于室外散射光下进行常规炼苗10d，将炼苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量浓度为O. 1%的多菌灵溶液中消毒2min后，移栽至装有下列质量比基质的育苗袋中腐植土 红土 珍珠岩=1 1 :1，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，SP得香根鸢尾驯化苗。实施例2
A.将尚未发芽的香根鸢尾根茎洗净，在室温条件下放置于湿润的苔藓上，每3天喷一次水以保持湿润，直至根茎上长出I. Ocm的嫩芽，将嫩芽自基部切下，用水冲洗后，再用体积浓度为75%的酒精对其表面擦拭I次，然后再用IOOmL质量浓度为O. 1%升汞和O. 12mL吐温的混合溶液浸泡15分钟，用无菌水洗3次，每次2min，然后用无菌滤纸吸干，得到消毒灭菌处理过的根茎嫩芽；在无菌条件下，接入下列诱导培养基中MS+萘乙酸(NAA) O. 2mg/ L+6-苄基氨基嘌呤出-BA) I. 5mg/L+蔗糖30000 mg/L+琼脂6500 mg/L, pH=6. 0，在光照强度为30001x，温度为25°C，光照时间为10h/d的条件下，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出O. 8cm的幼芽，切下幼芽；
B.将A步骤切下的幼芽转接到新的与A步骤相同的诱导培养基中，并在与A步骤相同的培养条件下，重复该步骤继代培养5次，每次继代周期为20d，增殖倍数可达5倍；
C.增殖数量达到生产所需量时，约2cm以下的丛生芽返回B步骤继续培养，2.Ocm以上的健壮植株接种到下列培养基中进行生根培养1/2 MS+萘乙酸(NAA)O. 2mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂6500 mg/L，pH=5. 8，在光照强度为20001x，温度为23°C，光照时间为10h/d的条件下，生根培养至植株基部长出5条细根；
D.取C步骤的生根植株于室外散射光下进行常规炼苗15d，将炼苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量浓度为O. 2%的多菌灵溶液中消毒Imin后，移栽至装有下列质量比基质的育苗袋中腐植土 红土 珍珠岩=1 1 :1，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，SP得香根鸢尾驯化苗。实施例3
A.将尚未发芽的香根鸢尾根茎洗净，在室温条件下放置于湿润的苔藓上，每3天喷一次水以保持湿润，直至根茎上长出2. Ocm的嫩芽，将嫩芽自基部切下，用水冲洗后，再用体积浓度为75%的酒精对其表面擦拭2次，然后再用IOOmL质量浓度为O. 08%升汞和O. ImL吐温的混合溶液浸泡10分钟，用无菌水洗3次，每次2min，然后用无菌滤纸吸干，得到消毒灭菌处理过的根茎嫩芽；在无菌条件下，接入下列诱导培养基中MS+萘乙酸(NAA) O. 5mg/L+6-苄基氨基嘌呤(6-BA) I. Omg/L+ 蔗糖 30000 mg/L+ 琼脂 6500 mg/L, pH=6. 0，在光照强度为22001x，温度为27°C，光照时间为12h/d的条件下，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出Icm的幼芽，切下幼芽；
B.将A步骤切下的幼芽转接到新的与A步骤相同的诱导培养基中，并在与A步骤相同的培养条件下，重复该步骤继代培养4次，每次继代周期为25d，增殖倍数可达4倍；
C.增殖数量达到生产所需量时，约2cm以下的丛生芽返回B步骤继续培养，2.Ocm以上的健壮植株接种到下列培养基中进行生根培养1/2 MS+萘乙酸(NAA) O. 5mg/L+蔗糖30000 mg/L+琼脂6500 mg/L，pH=6. 0，在光照强度为3000 lx，温度为27°C，光照时间为8h/d的条件下，生根培养至植株基部长出7条细根；
D.取C步骤的生根植株于室外散射光下进行常规炼苗12d，将炼苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量浓度为O. 2%的多菌灵溶液中消毒2min后，移栽至装有下列质量比基 质的育苗袋中腐植土 红土 珍珠岩=1 1 :1，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，SP得香根鸢尾驯化苗。
权利要求
1.一种香根鸢尾驯化苗的组培方法，其特征在于经过下列步骤 A.将消毒灭菌处理过的根茎嫩芽，在无菌条件下，接入下列诱导培养基中MS+萘乙酸(NAA) O. 2 O. 5mg/L+6-苄基氨基嘌呤(6-BA) I. O 2. Omg/L+ 蔗糖 30000 mg/L+ 琼脂6500 mg/L，pH=5. 8 6. O，在光照强度为2000 30001x，温度为25±2°C，光照时间为8 12h/d的条件下，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出O. 5 Icm的幼芽，切下幼芽； B.将A步骤切下的幼芽转接到新的与A步骤相同的诱导培养基中，并在与A步骤相同的培养条件下，重复该步骤进行继代培养3 5次，每次继代周期为20 30d ； C.增殖数量达到生产所需量时，2cm以下的丛生芽返回B步骤进行继续培养，2.Ocm以上的健壮植株接种到下列培养基中1/2 MS+萘乙酸(NAA)O. 2 O. 5mg/L+蔗糖30000 mg/L+琼脂6500 mg/L，pH=5. 8 6. O，在光照强度为2000 3000 lx，温度为25 ±2°C，光照时间为8 12h/d的条件下，生根培养至植株基部长出3 7条细根； D.取C步骤的生根植株于室外散射光下进行常规炼苗10 15d，将炼苗取出，按常规洗净苗上的培养基，放入质量浓度为O. I O. 2%的多菌灵溶液中消毒I 2min后，移栽至装有下列质量比基质的育苗袋中腐植土 红土 珍珠岩=1 1 :1，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，即得香根鸢尾驯化苗。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于所述步骤A的消毒灭菌处理是将尚未发芽的香根鸢尾根茎洗净，在室温条件下放置于湿润的苔藓上，每3天喷一次水，直至根茎上长出O. 5 2. Ocm的嫩芽，将嫩芽自基部切下，用水冲洗后，再用体积浓度为75%的酒精对其表面擦拭I 2次，然后再用IOOmL质量浓度为O. 05 O. 1%升汞和O. I O. 15mL吐温的混合溶液浸泡10 20分钟，用无菌水洗3次，每次2min，然后用无菌滤纸吸干，得到消毒灭菌处理过的根茎嫩芽。
全文摘要
本发明提供一种香根鸢尾驯化苗的组培方法，通过将消毒灭菌处理的香根鸢尾外植体接入诱导和增殖培养基中，同步进行诱导和增殖培养至外植体萌发分化出幼芽；继代培养多次至所需种苗数量后，转接到生根培养基中培养至植株基部长出3～7条根；移栽至育苗袋中，按常规进行浇水、施肥管理，生长40d后，即得香根鸢尾驯化苗。本发明可减少药品用量，通过同步进行芽诱导和增殖培养，可有效控制变异株的产生，简化组培程序，缩短了繁育周期，节约了生产成本，能将香根鸢尾品种的优良性状快速固定并保持下来，解决了常规繁育体系生产亲本用量大，种苗质量不稳定、种苗繁殖速度慢的难题。
文档编号A01H4/00GK102893872SQ201210432708
公开日2013年1月30日 申请日期2012年11月3日 优先权日2012年11月3日
发明者段青, 吴丽芳, 崔光芬, 王继华, 王祥宁, 贾文杰, 马璐琳, 赵培飞 申请人:云南省农业科学院花卉研究所