专利名称：一种红芽芋微型块茎愈伤组织诱导、分化和植株再生方法
技术领域：
本发明涉及一种植物种苗繁育方法，特别是一种红芽芋微型块茎愈伤组织诱导、分化和植株再生的方法。
背景技术：
红芽芋是芋属天南星科多年生宿根性草本植物，以地下球茎子芋为主要收获物的蔬菜，其食用部分球茎富含淀粉、粗纤维、粗脂肪、蛋白质、VC、钙、磷、铁，是芋中之珍品，可作蔬菜或主食，具有无公害、产量高、商品价值高、耐贮运等优点。红芽芋属生理碱性食物，被推荐为功能食品。随着种植业结构调整和人们对无公害蔬菜及品种多样化的需求，红芽芋的身价也相对提高，特别是优质、反季节的芋头上市后倍受青睐，一直是国内外市场上紧俏的抢手货。目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，红芽芋品种普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，利用试管苗快速繁殖已成为红芽芋生产急需解决的问题。本研究以红芽芋微型块茎为试材，通过植物组织培养技术，获得愈伤组织并再分化出大量丛生芽，对充分发挥和利用我国红芽芋资源优势，保护、开发我国道地蔬菜和丰富特色蔬菜种类有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种红芽芋微型块茎愈伤组织诱导、分化和植株再生的方法。实现本发明目的的技术方案是，(I)愈伤组织诱导选取红芽芋微型块茎作为外植体，在无菌条件切成小块，接种于愈伤组织培养基(MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 O. 5mg/L 2，
4-D+0. 2 O. 3% AC)上进行培养；培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为黑暗培养，培养温度25± 1°C，培养50 60d后，即可得到红芽芋脱毒苗微型块茎的愈伤组织块；(2)丛生芽诱导将诱导的愈伤组织块接种到丛生芽诱导培养基(MS+2. O 4. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 5mg/L NAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L,琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. O,培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25± 1°C，培养40 60d后，即可得到丛生芽组织块；(3)丛生芽的增殖培养将丛生芽组织块接种到丛生芽增殖培养基(MS+1. O 2. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 2mg/L NAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25±1°C，培养30 60d后，即可得到大量的红芽芋不定芽；；(4)不定芽的生根成苗选取红芽芋不定芽接到生根培养基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L ΝΑΑ+0. 5 1. Omg/L PP333)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25±1°C，培养30 60d后，即可获得红芽芋的小苗。本发明与现有技术比较具有成本低、丛生芽繁殖数量多等优点。
具体实施例方式
结合下述实施例对本发明作进一步说明
(I)红芽芋微型块茎愈伤组织的诱导
选取红芽芋微型块茎作为外植体，在无菌条件切成小块，接种于愈伤组织培养基 (MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 O. 5mg/L 2,4-D+O. 2 O. 3% AC)上进行培养；培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为黑暗培养， 培养温度25± 1°C，培养50 60d后，即可得到红芽芋微型块茎的愈伤组织块。
(2)丛生芽诱导
将诱导的愈伤组织块接种到丛生芽诱导培养基(MS+2. O 4. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 5mg/L NAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25±1°C，培养40 60d后，即可得到丛生芽组织块。
(3)丛生芽的增殖培养
将丛生芽组织块接种到丛生芽增殖培养基(MS+1. O 2. Omg/L ΚΤ+0.1 O. 2mg/ LNAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25± 1°C，培养30 60d 后，即可得到大量的红芽芋不定芽。
(4)不定芽的生根成苗
选取红芽芋不定芽接到生根培养基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L ΝΑΑ+0. 5 1. Omg/ LPP333)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25± 1°C，培养30 60d 后，即可获得红芽芋的小苗，可直接驯化移栽，用于大田种植。
权利要求
1.本发明公开了一种红芽芋微型块茎愈伤组织诱导、分化和植株再生方法，其特征在于有以下步骤(I)愈伤组织诱导选取红芽芋脱毒苗微型块茎作为外植体，在无菌条件切成小块，接种于愈伤组织培养基(MS+2. O 3. Omg/L 6-BA+0.1 0. 5mg/L 2,4-D+O. 2 ·0.3 % AC)上进行培养；培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为·5.8 6. 0，培养条件为黑暗培养，培养温度25土 1°C，培养50 60d后，即可得到红芽芋脱毒苗微型块茎的愈伤组织块；(2)丛生芽诱导将诱导的愈伤组织块接种到丛生芽诱导培养基(MS+2. 0 4. Omg/L KT+0.1 0. 5mg/L NAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25 ± I °C，培养40 60d后，即可得到丛生芽组织块；(3)丛生芽的增殖培养将丛生芽组织块接种到丛生芽增殖培养基(MS+1. 0 2. Omg/L KT+0.1 ·0.2mg/L NAA)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25±1°C，培养30 60d后，即可得到大量的红芽芋不定芽；(4)不定芽的生根成苗选取红芽芋不定芽接到生根培养基(1/2MS+0. 5 1. Omg/L NAA+0. 5 1. Omg/L PP333)上进行培养，培养基中蔗糖浓度为30g/L，琼脂浓度为7. 5g/L，培养基pH值为5. 8 6. 0，培养条件为光照时间14h/d，光强约1500 20001x，培养温度25±1°C，培养30 60d后，即可获得红芽芋的小苗。
全文摘要
一种红芽芋微型块茎愈伤组织诱导、分化和植株再生方法，(1)愈伤组织诱导选取红芽芋脱毒苗微型块茎作为外植体，在无菌条件切成小块，接种于愈伤组织培养基上进行培养，得到红芽芋脱毒苗微型块茎的愈伤组织块；(2)丛生芽诱导将诱导的愈伤组织块接种到丛生芽诱导培养基上进行培养，得到丛生芽组织块；(3)丛生芽的增殖培养将丛生芽组织块接种到丛生芽增殖培养基上进行培养，得到大量的红芽芋不定芽；；(4)不定芽的生根成苗选取红芽芋不定芽接到生根培养基上进行培养，可获得红芽芋的小苗。利用本发明可在短期内形成大量优质的红芽芋试管苗，可进行规模化、工厂化生产，解决红芽芋农业生产中所存在的问题。
文档编号A01H4/00GK102986532SQ20121051455
公开日2013年3月27日 申请日期2012年11月10日 优先权日2012年11月10日
发明者洪森荣, 肖月土, 尹明华, 王艾平 申请人:上饶师范学院