一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法
【专利摘要】一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法，属于农作物遗传育种【技术领域】。在高粱3叶期，将潮霉素溶液涂抹在高粱幼苗的第2片叶子上，分别于3天和7天后观察叶片有无灰色斑点或死亡，以此确认其是否为转基因植株。方法简单，操作容易，无需设备，费用低廉。
【专利说明】一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法
【技术领域】
[0001]一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法属于农作物遗传育种领域，更具体地说是一种对高粱群体中转基因植株进行筛选鉴定的方法。
【背景技术】
[0002]由于高粱转基因的效率较低，往往需要培育大量的苗，从中筛选检测转基因成功的植株，因此需要一种高效的鉴定方法。目前植物转基因鉴定方法主要是采用聚合酶链式反应(PCR)法。PCR鉴定的准确性很高，但在时间和精力方面投入较多，并且需要专门的仪器，代价高，效率低。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种利用潮霉素涂抹叶片鉴定高粱转基因苗的高效方法。相对于PCR法，该方法不但操作简便，所需费用少，准确性高，而且不需要专用设备。利用PCR法对潮霉素涂叶鉴定法印证表明，该方法的鉴定准确率高达95%以上。
[0004]本发明是这样实现的:
1.一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹叶片，目测叶片是否产生灰色斑点或死亡，以此确认是否为转基因植株。
[0005]2.本发明的操作有以下要点:所述的潮霉素溶液为1%。潮霉素溶液；所述的用潮霉素溶液涂抹叶片于高粱幼苗的3叶期进行；所述的用潮霉素溶液涂抹叶片是涂抹高粱幼苗第2片叶的正面；所述的用潮霉素溶液涂抹叶片是用脱脂棉蘸取1%。潮霉素溶液进行；所述的用潮霉素溶液涂抹叶片须戴一次性薄膜`手套进行；所述的目测叶片是否产生灰色斑点和死亡分别于涂抹后3天和7天进行；所述的确认是否转基因苗的方法是:3天后观察到处理过的叶片有灰色斑点且7天后该叶片发生死亡的苗定为非转基因苗；3天后观察到处理过的叶片无灰色斑点且7天后也未发生死亡的苗定为转基因苗。
[0006]本发明的有益效果:采用本发明的方法鉴定高粱转基因苗，与传统的PCR法相比，操作简单，无需昂贵的设备，费用低廉。用PCR方法印证表明，本发明的准确率高达95%以上，可谓精准高效。
【具体实施方式】
[0007]具体实施实例1:将S1390载体转入到高粱品系U68中的转基因鉴定
通过将S1390载体转入到高粱品系U68中的操作，获得了高粱转基因的待测群体，在待测群体中检测鉴定转基因植株。方法是，在高粱幼苗3叶期，双手戴一次性塑料薄膜手套，用脱脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均匀地涂抹在高粱幼苗第2片叶的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天观测到有23株经涂抹潮霉素的叶片上未出现灰色斑点且第7天也未发生异常。这23株即为潮霉素涂叶法鉴定出的转基因苗。用PCR方法对这23株苗进行检测，共有22株扩增出目的片断，证实潮霉素涂叶法的鉴定准确率达95.6%。[0008]具体实施例2:将SRnai载体转入到高粱品系3042B中的转基因鉴定
通过将SRnai载体转入到高粱品系3042B中的操作，获得了高粱转基因的待测群体，在待测群体中检测鉴定转基因植株。方法是，在高粱幼苗3叶期，双手戴一次性塑料薄膜手套，用脱脂棉球蘸取1%。潮霉素溶液均匀地涂抹在高粱幼苗第2片叶的正面，第2天再如法涂抹一次。涂抹后第3天观测到有87株经涂抹潮霉素的叶片上未出现灰色斑点且第7天也未出现异常。这87株即为潮霉素涂叶法鉴定出的转基因苗。用PCR方法对这87株苗进行检测，共有84株扩增出目的片断，证实`潮霉素涂叶法的鉴定准确率达96.5%。
【权利要求】
1.一种高粱转基因植株的潮霉素涂叶鉴定法，利用高粱幼苗的叶片进行，其特征在于，用潮霉素溶液涂抹高粱叶片，目测叶片是否产生灰色斑点或死亡，以此确认是否为转基因植株。
2.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的潮霉素溶液为I %。潮霉素溶液。
3.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹叶片于高粱幼苗3叶期进行。
4.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹叶片是涂抹高粱幼苗第2叶片。
5.根据权利要求1和权利要求4所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹叶片是涂抹在第2叶片的正面。
6.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹叶片是用脱脂棉蘸取1%。潮霉素溶液进行。
7.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的用潮霉素溶液涂抹叶片须戴一次性薄膜手套进行。
8.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的目测叶片是否产生灰色斑点和死亡分别于涂抹后3天和7天进行。
9.根据权利要求1所述的一种高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的确认是否转基因苗的方法是:3天后观察到处理过的叶片有灰色斑点，或7天后发生死亡的苗定为非转基因苗。
10.根据权利要求1所述的一种 高粱转基因植株的目测鉴定法，其特征在于，所述的确认是否转基因苗的做法是:3天后观察到处理过的叶片无灰色斑点，且7天后也未发生死亡的苗定为转基因苗。
【文档编号】A01G7/06GK103843602SQ201210522496
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月7日 优先权日:2012年12月7日
【发明者】李杰勤, 王丽华, 詹秋文, 陆景标, 张俊, 林平, 赵庭, 万海波, 周青, 王茂辉, 刘井良, 李万祥 申请人:安徽科技学院