专利名称：一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法。
背景技术：
鹰嘴豆(Cicer arietinum.L)是世界上栽培面积较大的食用豆类作物之一，主要分布于世界40多个国家。在我国，主要种植于新疆、甘肃等省区。鹰嘴豆是豆科，鹰嘴豆属植物，起源于亚洲西部和近东地区，全球栽培面积超过千万公顷，大多分布在印度、巴基斯坦和土耳其等干旱或半干旱地区，是世界第三大豆科作物。鹰嘴豆也是我国维吾尔族人民喜爱的一种副食品，在新疆已有2500年的历史，种植面积在30万亩左右。由于鹰嘴豆具有较高的营养价值、丰产耐旱、直立抗倒伏、较耐高温和生物固氮等特点，上述优良性状已引起鹰嘴豆商业生产者和研究者的重视。目前，国内对鹰嘴豆的研究还处于起步阶段，且国内关于鹰嘴豆遗传转化体系的研究尚未见报道，同时我们具有地理和资源优势，对鹰嘴豆有强大的市场需求，有条件开展对鹰嘴豆遗传转化体系的研究工作，并为今后的相关研究奠定基础。这一研究对以后鹰嘴豆转基因研究，遗传育种的研究，离体组织培养等研究提供技术支持和理论依据；为鹰嘴豆经济效益的提高和鹰嘴豆产量及品质的提高有一定的推动作用，对鹰嘴豆遗传育种的推广和发展有积极作用。
发明内容
本发明提供一种利用鹰嘴豆成熟种子萌发形成带腋芽的小段为外植体快速繁殖鹰嘴豆的新方法，这一研究对今后鹰嘴豆转基因，遗传育种等研究提供技术支持和理论依据；为鹰嘴豆经济效益的提高和鹰嘴豆产量及品质的提高有一定的推动作用。
本发明实施例是这样实现的，一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法，该方法按以下步骤进行:配制基本培养基及各阶段培养基；选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子进行消毒处理后萌发；待鹰嘴豆幼苗长至IOcm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养；将初代幼芽接种于增殖培养基上，培养为继代幼芽；将继代幼芽接种到生根培养基中进行生根培养。进一步，组培培养基包括基本培养基及各阶段培养基，组分与各组分在每升中所含重量为:I)基本培养基:MS 或 1/2MS 培养基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)种子萌发培养基:1/2MS ；3)诱导培养基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培养基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培养基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
进一步，鹰嘴豆种子消毒处理与萌发方法为:选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子，I %次氯酸钠溶液灭菌10分钟，无菌水清洗5-6次，无菌水浸泡一昼夜，次日超净工作台中，0.1%升汞浸泡I分钟，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸除表面水分后，接种于1/2MS培养基中，26±2°C，16/8光暗交替培养。进一步，诱导培养方法为:待鹰嘴豆幼苗长至IOcm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养；26±2°C温度下，16/8光暗交替培养,经20天左右培养至外植体诱导萌发出初代幼芽。进一步，增殖培养方法为:将初代幼芽接种于增殖培养基上，在同上条件下经15-20天培养至分化形成2-5倍、芽长3-5厘米的继代幼芽。进一步，生根培养:将继代幼芽接种到生根培养基中，在相同条件下经30-40天培养至幼苗基部长出8-15条毛细根系，再经20-30天培养至根长7-10厘米。本发明提供的利用鹰嘴豆成熟种子萌发形成带腋芽的小段为外植体快速繁殖鹰嘴豆的新方法，这一研究对今后鹰嘴豆转基因，遗传育种等研究提供技术支持和理论依据；为鹰嘴豆经济效益的提高和鹰嘴豆产量及品质的提高有一定的推动作用。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明提供了一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法，该方法按以下步骤进行:(一 )组培培养基的配制:包括基本培养基及各阶段培养基的组分与各组分在每升中所含重量为:I)基本培养基:MS 或 1/2MS 培养基，其中 Gelzan2g/L，MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ；2)种子萌发培养基:1/2MS ；3)诱导培养基:MS+2，4-D0.5mg/L+6_BA3mg/L ；4)增殖培养基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；5)生根培养基:1/2MS (IOg 蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L ；( 二 )鹰嘴豆种子的灭菌与萌发:选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子，I %次氯酸钠溶液灭菌10分钟，无菌水清洗5-6次，无菌水浸泡一昼夜，次日超净工作台中，0.1 %升汞浸泡I分钟，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸除表面水分后，接种于1/2MS培养基中，26±2°C，16/8光暗交替培养；(三)诱导培养:待鹰嘴豆幼苗长至IOcm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养。26±2°C温度下，16/8光暗交替培养，经20天左右培养至外植体诱导萌发出初代幼芽；(四)增殖培养:将初代幼芽接种于增殖培养基上，在同上条件下经15-20天培养至分化形成2-5倍、芽长3-5厘米的继代幼芽；(五)生根培养:将继代幼芽接种到 生根培养基中，在相同条件下经30-40天培养至幼苗基部长出8-15条毛细根系，再经20-30天培养至根长7-10厘米；以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[实例一]鹰嘴豆种子萌发与外植体制备(一)为了比较不同培养基对鹰嘴豆种子萌发效果的影响，制备了 MS、l/2MS、BjP 1/2B5培养基。选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子，I %次氯酸钠溶液灭菌10分钟，无菌水清洗5-6次，无菌水浸泡一昼夜，次日超净工作台中，0.1%升汞浸泡I分钟，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸除表面水分后，接种于以上各培养基中，26±2°C, 16/8光暗交替培养,筛选最适培养基。[实例二]鹰嘴豆种子萌发与外植体制备(二 )浓硫酸处理15分钟，流水冲洗30分钟，75%酒精清洗I分钟，无菌水清洗5_6次，无菌水浸泡一昼夜，次日超净工作台中，0.1 %升汞浸泡I分钟，接种于MS、1/2MS、BJP 1/2B5培养基中。[实例三]诱导培养基的筛选将带腋芽的茎段分别接种于以下培养基上，筛选最适于诱导鹰嘴豆出芽培养基。
权利要求
1.一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，该方法按以下步骤进行: 配制基本培养基及各阶段培养基； 选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子进行消毒处理后萌发； 待鹰嘴豆幼苗长至IOcm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养； 将初代幼芽接种于增殖培养基上，培养为继代幼芽； 将继代幼芽接种到生根培养基中进行生根培养。
2.如权利要求1所述的鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，组培培养基包括基本培养基及各阶段培养基，组分与各组分在每升中所含重量为: 1)基本培养基:MS或 1/2MS 培养基，其中 Gelzan2g/L, MgCl2L 97g/LpH5.7-6.0 ； 2)种子萌发培养基:1/2MS； 3)诱导培养基:MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA3mg/L ； 4)增殖培养基:MS+6-BA2mg/L+IBAlmg/L； 5)生根培养基:l/2MS(10g蔗糖)+6-BA2mg/L+IBAlmg/L。
3.如权利要求1所述的鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，鹰嘴豆种子的灭菌与萌发方法为: 选取大小均一皱粒鹰嘴豆 种子，1%次氯酸钠溶液灭菌10分钟，无菌水清洗5-6次，无菌水浸泡一昼夜，次日超净工作台中，0.1%升汞浸泡I分钟，以无菌水冲洗并用无菌滤纸吸除表面水分后，接种于1/2MS培养基中，26±2°C，16/8光暗交替培养。
4.如权利要求1所述的鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，诱导培养方法为: 待鹰嘴豆幼苗长至IOcm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养；26±2°C温度下，16/8光暗交替培养，经20天左右培养至外植体诱导萌发出初代幼芽。
5.如权利要求1所述的鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，增殖培养方法为: 将初代幼芽接种于增殖培养基上，在同上条件下经15-20天培养至分化形成2-5倍、芽长3-5厘米的继代幼芽。
6.如权利要求1所述的鹰嘴豆组培快速繁殖方法，其特征在于，生根培养: 将继代幼芽接种到生根培养基中，在相同条件下经30-40天培养至幼苗基部长出8-15条毛细根系，再经20-30天培养至根长7-10厘米。
全文摘要
本发明公开了一种鹰嘴豆组培快速繁殖方法，首先配制基本培养基及各阶段培养基；选取大小均一皱粒鹰嘴豆种子进行消毒处理后萌发；待鹰嘴豆幼苗长至10cm左右，切取带腋芽的茎段于诱导培养基中培养；将初代幼芽接种于增殖培养基上，培养为继代幼芽；将继代幼芽接种到生根培养基中进行生根培养。本发明提供的利用鹰嘴豆成熟种子萌发形成带腋芽的小段为外植体快速繁殖鹰嘴豆的新方法，这一研究对今后鹰嘴豆转基因，遗传育种等研究提供技术支持和理论依据；为鹰嘴豆经济效益的提高和鹰嘴豆产量及品质的提高有一定的推动作用。
文档编号A01H4/00GK103168684SQ201210596360
公开日2013年6月26日 申请日期2012年12月18日 优先权日2012年12月18日
发明者张桦, 高新, 苏豫梅, 任燕萍, 付国勇 申请人:新疆农业大学