玉米黄质强化家禽蛋的制作方法

玉米黄质强化家禽蛋的制作方法
【专利摘要】本发明的目的在于提供以高浓度含有玉米黄质的玉米黄质强化家禽蛋，具体地，涉及通过对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料而得到的玉米黄质强化家禽蛋。
【专利说明】玉米黄质强化家禽蛋
【技术领域】
[0001]本发明涉及例如玉米黄质强化家禽蛋及其制造方法。
【背景技术】
[0002]类胡萝卜素是可用作饲料添加物、食品添加物、药品等的天然色素。类胡萝卜素包括例如:玉米黄质、胡萝卜素、隐黄素、虾青素、角黄素、番茄红素、绿蝇黄质(phoenicoxanthin)、金盖花黄质(adonixanthin)、海胆酮、asteroidenone 和 3_ 轻基海胆酮等。
[0003]类胡萝卜素中，已知玉米黄质作为玉米等各种植物中所含的天然的黄色色素被添加于饲料中以改善鸡等家禽类的蛋黄、肉、表皮的色调的用途和作为食品的着色剂的用途。另一方面，玉米黄质具有强效的抗氧化作用，因而对于人类眼睛的健康发挥着重要的作用的事实已渐为人知(非专利文献I)。玉米黄质大量存在于眼睛视网膜的中心部(黄斑部)，认为表现出针对紫外线等有害光线的过滤器功能和作为抗氧化剂的功能。
[0004]根据这些生理效果，认为玉米黄质与眼睛整体健康、特别是与老年性黄斑变性(Age-related Macular Degeneration ；AMD)等眼病风险密切相关(非专利文献2)。另外，作为其它效能，还报道有抗肿瘤效果(非专利文献3)。所以，认为玉米黄质有望作为健康食品原材料或药品原材料。
[0005]对在这些用途中使用时的玉米黄质在人体内的动力学进行考察。首先，据说人从用于膳食的原材料中口服摄取玉米黄质、并经由肠道吸收至体内。吸收至体内的玉米黄质通过血液而在人体内移动。实际上在人血液中，通过普通的膳食已含有玉米黄质(非专利文献4)。另外，提高人血中玉米黄质浓度的尝试迄今为止已有大量报道。作为玉米黄质源，可考虑菠菜、玉米等蔬菜类或蜜柑等柑橘类的植物系玉米黄质源、鸡蛋的蛋黄等动物系玉米黄质源、或含有玉米黄质的补充剂等。其中，对于植物系的玉米黄质源，认为难以人为地提高其浓度，因而大致分为将玉米黄质源配合于鸡饲料中来提高鸡蛋中的玉米黄质浓度、或用补充剂来提高人血中浓度的方法。
[0006]作为玉米黄质的制造方法，已知有例如:使用由氧代异佛尔酮的不对称还原而得的光学活性的羟基酮作为原料的化学合成法(非专利文献5)和从玉米种子中提取的方法(非专利文献6)。另外，还已知从金盏花中提取玉米黄质的方法(专利文献I)，但来源于金盏花的类胡萝卜素的主成分是黄体素，玉米黄质的含量低。
[0007]另外，作为生产玉米黄质的微生物的例子，已知有:螺旋藻类(专利文献2)、微球藻(Nannochloris)属微细藻类(专利文献3)、屈挠杆菌(Flexibacter)属细菌(专利文献4)、交替单胞菌(Alteromonas)属细菌(专利文献5)、黄杆菌(Flavobacterium)属细菌(非专利文献7)和细菌橙黄土壤杆菌(Agrobacterium aurantiacum)(非专利文献8)。进而，对于已知为类胡萝卜素生产菌的副球菌(Paracoccus)属细菌，例如，已知产玉米黄质素副球菌(Paracoccus zeaxanthinifaciens) ATCC 21588株(非专利文献9)、细菌产胡罗卜素副球菌(Paracoccus carotinifaciens)E-396株的突变株(专利文献6)、副球菌属细菌A-581-1株的突变株(专利文献6)和副球菌属细菌的突变株(专利文献7)会生产玉米黄质。
[0008]玉米黄质作为补充剂对人给予的例子有使用由黄杆菌(Flavobacteria)的工业培养而得的补充剂的例子(非专利文献10)。此时，每天30mg摄取120天，原本为0.086 μ M的血中玉米黄质浓度上升至0.48 μ Μ。此时，相对于摄取量的增加量的比例为0.01 μ M/(mg/Day) ( “ μ M/ (mg/Day) ”意指相对于每I天的玉米黄质摄取量(mg/Day)的血中玉米黄质増加浓度(PM))。另外，使用由化学合成制得的玉米黄质对人给予的例子(非专利文献11)中，每天12.6mg摄取6个月，原本为0.04 μ M的血中玉米黄质浓度上升至0.85 μ Μ。此时，相对于摄取量的增加量的比例为0.06 μ M/ (mg/Day)。进而，之后通过摄取两倍量的玉米黄质6个月，血中玉米黄质浓度上升至1.09μΜ。此时，相对于摄取量的增加量的比例为0.01 μ M/ (mg/Day)。
[0009]相对于这些给予补充剂的例子，对摄取鸡蛋时的玉米黄质的人血中浓度上升也有数例报道。鸡蛋2个/天或4个/天摄取35天的例子(非专利文献12)中，摄取前血中玉米黄质浓度为0.03 μ Μ，与之相对，分别增加至0.05 μ M和0.06 μ M0此时相对于摄取量的增加量的比例为0.03 μ M/(mg/Day)。进而，鸡蛋I个/天摄取35天的例子(非专利文献13)中，摄取前血中浓度为0.04 μ Μ，与之相对，摄取后血中浓度为0.06 μ Μ，増加率为0.16 μ M/(mg/Day)。另外,鸡蛋6个/周摄取12周的例子(非专利文献14)中，摄取前血中浓度为0.1 μ M，与之相对，摄取后血中浓度为0.15 μ Μ，増加率为0.43 μ M/ (mg/Day)。
[0010]综合以上例子，补充剂的例子中可以较容易地增加玉米黄质的摄取量，因而可以提高人血中浓度(0.48?1.09 μ M)。然而，摄取量对血中浓度的效果非常低，需要大量进行摄取。通常，类胡萝卜素的制造成本非常高，因而该低低效率成为问题。
[0011]另一方面，对于鸡蛋来说，出于胆固醇等的担心，I天能够摄取的量的界限为I天I个至2个左右。因此，可期待的人血中玉米黄质浓度非常低(0.06?0.15 μ Μ)。但是，鸡蛋的情形中，从效率的观点出发，可获得高于补充剂的效率。因此，认为若在鸡蛋中导入大量玉米黄质，则会使高效提高人血中玉米黄质浓度变得容易。
[0012]然而，近年来的鸡蛋市场中，除了用通常饲料饲养得到的普通蛋之外，出现了通过在饲料中加入功能性成分，例如叶酸(专利文献8)、维生素E(专利文献9)、亚麻籽(专利文献10)、虾青素(专利文献11)等来饲养鸡而得的更高附加价值的特殊蛋。
[0013]另外，作为利用含有玉米黄质的饲料来提高蛋黄中玉米黄质浓度的方法，已知有在饲料中添加螺旋藻体的方法(专利文献2)、在饲料中添加枸杞的果实或其提取物的方法(专利文献12)等。
[0014]然而，在饲料中添加螺旋藻时，螺旋藻体中的玉米黄质浓度低(1.0mg/g)，要产出高浓度的玉米黄质强化蛋时，则存在添加量变多的问题。为了保持饲料中的营养平衡，理想的是添加量少。另外，使用螺旋藻来强化玉米黄质浓度时，鸡蛋蛋黄中的玉米黄质浓度最大为 1.65mg/100g。
[0015]另一方面，在饲料中添加枸杞的果实时，除了枸杞的果实中的玉米黄质浓度低(1.lmg/100g)之外，还有受天气左右而难以稳定供给的缺点。另外，使用枸杞的果实来强化玉米黄质浓度的鸡蛋蛋黄中的浓度最大为3.35mg/100g。
[0016]因此，即使原料中的玉米黄质浓度高、饲料中的添加量少，也可以将鸡蛋蛋黄中玉米黄质浓度强化至3.35mg/100g以上，能够稳定供给的鸡蛋的制造方法和使用该鸡蛋有效地提高人血中玉米黄质的方法受到需求。[0017]现有技术文献 专利文献
专利文献1:日本特开平8-092205号公报 专利文献2:日本特开平10-155430号公报 专利文献3:日本特开平7-59558号公报 专利文献4:日本特开平5-328978号公报 专利文献5:日本特开平5-49497号公报 专利文献6:日本特开2005-87097号公报 专利文献7:日本特开2007-151475号公报 专利文献8:日本特开2005-224157号公报 专利文献9:日本特开2005-348725号公报 专利文献10:日本特开平8-80164号公报 专利文献11:日本特开平7-143864号公报 专利文献12:日本特开2008-22703号公报 非专利文献
非专利文献 I:Ma L.和 Lin X.M.，“J.Sc1.Food.Agric.”，2010 年，第 90 卷，第 I 号，pp.2-12
非专利文献 2:Stahl W.，“Dev.0phthalmol.”，2005 年，第 38 卷，pp.70-88非专利文献 3:Tsushima Μ.等，“Biol.Pharm.Bull.v , 1995 年，第 18 卷，第 2号，pp.227-233
非专利文献 4:Sugiura Μ.等，“Br.J.Nutr.”，2009 年，第 102 卷，第 8 号，pp.1211-1219
非专利文献 5:Paust J.等，“Pure Appl.Chem.”，1991 年，第 63 卷，第 I 号，pp.45-58
非专利文献6:“生体色素”，1974年，朝倉書店
非专利文献 7:L.Ninet 和 J.Renautj uCarotenoidsj in Microbial Technology，，，New York:Academic Press, 1979 年，第 2 版，第 I 卷，pp.529-544
非专利文献 8:Akihiro Yokoyama 和 Wataru Mikij “FEMS Microbiology Letters”，1995 年，第 128 卷，pp.139-144
非专利文献 9:Alan Berry 等，“International Journal of Systematic andEvolutionary Microbiology”，2003 年，第 53 卷，pp.231-238
非专利文献 10:Bone R.A.等，“ J.Nutr.”，2003 年，第 133 卷，第 4 号，pp.992_998
非专利文献 11:Schalch W.等，“Arch.Biochem.Biophys.”，2007 年，第 458 卷，第 2 号，pp.128-135
非专利文献 12:Vishwanathan R.等，“Am.J.Clin.Nutr.”，2009 年，第 90 卷，第 5 号，pp.1272-1279 非专利文献 13:Goodrow E.F.等，“J.Nutr.”，2006 年，第 136 卷，第 10 号，pp.2519-2524
非专利文献 14:Wenzel A.J.等，“J.Nutr.”, 2006 年，第 136 卷，第 10 号，pp.2568-2573。

【发明内容】

[0018]发明要解决的技术问题
鉴于上述实际情况，本发明的目的是提供可以稳定制造的以高浓度含有玉米黄质的玉米黄质强化蛋。
[0019]用于解决技术问题的手段
为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，通过将产生玉米黄质的细菌添加至鸡等家禽的饲料中，可以产出以高浓度含有玉米黄质的家禽蛋，从而完成了本发明。
[0020]本发明包含以下内容。
[0021](I)家禽蛋,其中，蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为3.5mg?IOmg的玉米黄质。
[0022](2) (I)所述的家禽蛋，其中所述家禽为鸡。
[0023](3)玉米黄质强化家禽蛋，其是通过对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料而得到的。
[0024](4) (3)所述的玉米黄质强化家禽蛋,其中，所述细菌是属于副球菌(Paracoccus)属的细菌。
[0025](5) (3)或(4)所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，所述饲料中的玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
[0026](6) (3)?(5)中任一项所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为1.5mg?IOmg的玉米黄质。
[0027](7) (3)?(6)中任一项所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，所述家禽为鸡。
[0028](8)玉米黄质强化家禽蛋的制造方法，其包括对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料的步骤。
[0029](9) (8)所述的方法，其中，所述细菌是属于副球菌属的细菌。
[0030](10) (8)或(9)所述的方法，其中，所述饲料中的玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
[0031](11) (8)?(10)中任一项所述的方法，其中，所述玉米黄质强化家禽蛋在蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为1.5mg?IOmg的玉米黄质。
[0032](12) (8)?(11)中任一项所述的方法，其中，所述家禽为鸡。
[0033](13)家禽饲料，其含有产生玉米黄质的细菌。
[0034](14) (13)所述的家禽饲料，其中，所述细菌是属于副球菌属的细菌。
[0035](15) (13)或(14)所述的家禽饲料，其中，玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
[0036](16) (13)?(15)中任一项所述的家禽饲料，其中，所述家禽为鸡。
[0037]本说明书包括作为本申请优先权基础的日本专利申请2011-037619号的说明书和/或附图所记载的内容。[0038]发明效果
根据本发明，可以制造以高浓度含有玉米黄质的玉米黄质强化家禽蛋。另外，可以使用该玉米黄质强化家禽蛋来有效地提高人血中玉米黄质浓度。
【专利附图】

【附图说明】
[0039][图1]是示出实施例1中制造的玉米黄质强化鸡蛋的蛋黄中的玉米黄质浓度的图。
[0040][图2]是示出实施例3中摄取了玉米黄质强化鸡蛋的受试者的血中玉米黄质浓度的图。
【具体实施方式】
[0041]以下，更具体地说明本发明。本发明的范围并不限于上述说明，对于以下的例示之外，也可以在不损害本发明主旨的范围内适宜改变来实施。
[0042]本发明涉及以高浓度含有玉米黄质的家禽蛋(以下，有时称作“玉米黄质强化家禽蛋”)。以高浓度含有该玉米黄质的家禽蛋可通过将产生玉米黄质的细菌添加至家禽饲料中、对家禽饲以该饲料并进行饲养和取蛋而得到。因此，本发明还涉及玉米黄质强化家禽蛋的制造方法(以下，称作“本方法”)，其包括对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料的步骤。根据本方法，通过使用产生玉米黄质的细菌，可以使家禽蛋的蛋黄(蛋黄)中以高浓度含有玉米黄质。
[0043]这里，“玉米黄质强化家禽蛋”意指与通常的家禽蛋的蛋黄中玉米黄质浓度相比，蛋黄中玉米黄质浓度显著地高的家禽蛋。
[0044]另外，作为家禽 ，可举出例如:鸡、鹌鹑、火鸡、珠鸡、鸽子、鸭子、鹅等，特别优选鸡。
[0045]本方法中，首先准备产生玉米黄质的细菌。作为本方法中使用的细菌，只要是产生玉米黄质的细菌则没有任何限定，优选可使用属于副球菌属的细菌。属于副球菌属的细菌之中，优选使用产胡罗卜素副球菌(Paracoccus carotinifaciens)、马氏副球菌(Paracoccus marcusii)、haeundaensis 苜Ij球菌(Paracoccus haeundaensis)、产玉米黄质素副球菌(Paracoccus zeaxanthinifaciens),特别优选使用产胡罗卜素副球菌。作为属于副球菌属的细菌的具体菌株的例子，可举出:产胡罗卜素副球菌E-396株(保藏编号:FERMBP-4283 ;国际保藏机构:独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(茨城县
市東1-1-1。< ?'七 > 夕一中央第6〒305-8566，日本)；国际保藏日:平成5年(1993年)4月27天)和副球菌属细菌A-581-1株(保藏编号:FERM BP-4671 ;国际保藏机构:独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(茨城县9 市東1-1-1ο <比七 > 夕一中央第6〒305-8566，日本)；国际保藏日:平成6年(1994年)5月20天)，另外，对这些菌株进行突变，使得与亲代菌株相比优先产生玉米黄质的突变株也优选在本方法中使用。进而，作为玉米黄质产生细菌的具体菌株的其它例，可举出产玉米黄质素副球菌ATCC 21588株(非专利文献9)。
[0046]另外，作为玉米黄质产生细菌，优选可使用对应于16S核糖体RNA的DNA的碱基序列与序列编号I中记载的E-396株的碱基序列实质上相同的细菌。这里，“实质上相同”意指考虑确定DNA的喊基序列时的误差频率等，喊基序列优选95%以上、更优选96%以上、进一步优选97%以上、特别优选98%以上、最优选99%以上相同。同源性可以通过例如基因解析软件Clustal W来确定。
[0047]另外，“对应于16S核糖体RNA的DNA的碱基序列”意指将16S核糖体RNA的碱基序列中的u(尿嘧啶)置换为T(胸腺嘧啶)而成的碱基序列。
[0048]作为培养产生玉米黄质的细菌的方法，只要是生产玉米黄质的条件则任意方法均可，例如，可采用如下所述的方法。即，作为培养基，例如，使用含有生产菌的生长所需要的碳源、氮源、无机盐和根据需要的特殊的要求物质(例如，维生素、氨基酸、核酸等)的培养基。
[0049]这里，作为碳源，可举出例如:葡萄糖、蔗糖、果糖、海藻糖、甘露糖、甘露糖醇、麦芽糖等糖类；乙酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸、丙二酸等有机酸；乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、己醇、异丁醇等醇类等，可使用它们的I种或2种以上。其添加比例根据碳源的种类而不同，但通常相对于培养基IL为I?100g、优选2?50g。
[0050]作为氮源，可使用例如:硝酸钾、硝酸铵、氯化铵、硫酸铵、磷酸铵、氨、脲等，可使用它们的I种或2种以上。其添加比例根据氮源的种类而不同，但通常相对于培养基IL为
0.1?20g、优选I?10g。
[0051]另外，作为无机盐，可举出例如:磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、氯化镁、硫酸铁、氯化铁、硫酸锰、氯化锰、硫酸锌、氯化锌、硫酸铜、氯化钙、碳酸钙、碳酸钠等，可使用它们的I种或2种以上。其添加比例根据无机盐的种类而不同，但通常相对于培养基 IL 为 0.1mg ?10g。
[0052]进而，作为特殊的要求物质，可举出:维生素类、核酸类、酵母提取物、蛋白胨、肉提取物、麦芽提取物、玉米浆、干燥酵母、大豆柏、大豆油、橄榄油、玉米油、亚麻籽油等，可使用它们的I种或2种以上。其添加比例根据特殊的要求物质的种类而不同，但通常相对于培养基 IL 为 0.0lmg ?IOOg0
[0053]培养基的pH调整为例如pH2?12、优选pH6?9。
[0054]培养可在例如10?70°C、优选20?35°C的温度下，通过振摇培养或通气搅拌培养进行通常I天?20天、优选2?9天。
[0055]在这样的条件下培养产生玉米黄质的细菌。培养后，产生玉米黄质的细菌在菌体内和菌体外大量生产玉米黄质。所以，本发明中可以将培养物(培养液)作为产生玉米黄质的细菌直接添加至家禽饲料中。
[0056]或者，对由以上培养方法而得的培养液进行浓缩。浓缩方法可举出膜浓缩、离心分离法等，但从菌体的分离性出发，膜浓缩更优选。为了提高菌体的分离性，将培养液的pH调节至2?6。pH调节中优选使用硫酸。浓缩倍率根据培养液的色素含量等状态而不同，优选为例如1.5?5倍左右。
[0057]接着，进行培养基成分的除去。离心分离之际，向浓缩液中加水，除去培养基成分。使用膜分离时，进行透析过滤，将培养基成分除去。加水量根据浓缩液的色素含量等状态而不同，优选为例如I?5倍左右。
[0058]进而，为了制成粉末制品，对由以上方法得到的浓缩液进行干燥。作为干燥方法，并无特别限制，可采用例如喷雾干燥、喷雾造粒干燥、转鼓干燥、冷冻干燥流化床干燥等公知的干燥方法。这样，可以制造含有玉米黄质色素的干燥菌体。可将所得干燥菌体作为产生玉米黄质的细菌添加至家禽饲料中。例如，属于副球菌属的细菌的该干燥菌体Ig中，以Img?20mg左右(即、I?20mg/g)的高含量含有玉米黄质。所以，本方法中通过使用属于副球菌属的细菌的干燥菌体，即使在饲料中的添加量少，也可以提高从喂养的家禽得到的蛋的蛋黄中的玉米黄质浓度。
[0059]本方法中，对家禽饲以添加有含有玉米黄质色素的干燥菌体等产生玉米黄质的细菌的家禽饲料，并使家禽繁育，进行取蛋，由此产出玉米黄质强化家禽蛋。以相对于家禽饲料IOOg可添加Img以上、例如I?50mg、优选2?20mg产生玉米黄质的细菌中的玉米黄质的方式，将产生玉米黄质的细菌添加至家禽饲料中。例如，将上述含有玉米黄质色素的干燥菌体混合至养鸡等家禽饲养中所通常使用的家禽饲料中。家禽饲料中的含有玉米黄质色素的干燥菌体量根据该干燥菌体中所含的玉米黄质的含量而不同，例如以重量计优选为
0.05%以上、进一步优选为0.1%?5%。
[0060]或者，含有玉米黄质色素的干燥菌体等产生玉米黄质的细菌也可以混合于家禽饲料中给予家禽，或者也可以与维生素类等一起事先混合至预混料中进行喂料。
[0061]喂养了包含含有玉米黄质色素的干燥菌体等产生玉米黄质的细菌的家禽饲料的家禽会产出富含玉米黄质的蛋(即、玉米黄质强化家禽蛋)。根据本方法，可得到例如蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为1.5mg?10mg(优选3.5mg?10mg、特别优选3.5mg?8mg)的玉米黄质的玉米黄质强化家禽蛋。
[0062]以上说明的玉米黄质强化家禽蛋通过被人摄取，可提高人血中的玉米黄质的蓄积。
[0063]所以，本发明还涉及提高人血中玉米黄质浓度的方法，其包括使人摄取玉米黄质强化家禽蛋。提高血中玉米黄质浓度认为与老年性黄斑变性(AMD)等眼病等疾病预防相关。对于该方法中使用的本发明所述的玉米黄质强化家禽蛋，为了有效地增加人血中玉米黄质浓度，优选在蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为3.5mg以上的玉米黄质。另外，通过将玉米黄质强化家禽蛋I天摄取I个以上，可以有效增加人血中玉米黄质浓度。例如，通过使人摄取玉米黄质强化家禽蛋，可以将人血中玉米黄质浓度以0.28 μ M/(mg/Day)以上的效率提闻至0.3 u M以上。
[0064]另外，本发明涉及用于提高人血中玉米黄质浓度的用途的玉米黄质强化家禽蛋、以及提高人血中玉米黄质浓度的玉米黄质强化家禽蛋的用途。
实施例
[0065]以下，用实施例更详细地说明本发明，但本发明的技术的范围并不受这些实施例的限定。
[0066]应予说明，实施例中的类胡萝卜素类的定量是使用高效液相色谱(HPLC)如下所述进行。
[0067]柱是将Inertsil SIL-100A, 5 μ m( Φ 4.6X 250mm) (GL 寸 4 工 制)2 根连接使用。洗脱是通过在室温附近的恒定的温度下流通每分钟1.0mL的作为流动相的正己烷/四氢呋喃/甲醇混合液(40:20:1)来进行的。在测定中，将样品溶解于四氢呋喃，用流动相适当稀释，将所得液体20 μ L作为注入量，柱洗脱液的检测在波长470nm下进行。另外，作为用于定量的标准品，使用了 EXTRASYNTHESE社制玉米黄质(Cat.N0.0307 S)。标准液的玉米黄质浓度的设定是对标准液的453nm的吸光度(A)和在上述条件下进行HPLC分析时的玉米黄质峰的面积百分率％(B)进行测定后，使用下式来进行的。
[0068]玉米黄质的浓度(mg/L)= A + 2327XBX100。
[0069]〔实施例1〕玉米黄质强化鸡蛋的制造
将产胡罗卜素副球菌E-396株(FERM BP-4283)用N-甲基-N’ -硝基-N-亚硝基胍进行突变处理，挑选黄色?橙色的菌落。测定挑选株的培养液中的类胡萝卜素浓度，挑选玉米黄质生产能力高的突变株。
[0070]将以下组成的培养基(蔗糖30g/L、玉米浆30g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、磷酸氢二钠12水合物3.8g/L、氯化钙2水合物5.0g/L、硫酸镁7水合物0.7g/L、硫酸铁7水合物0.3g/L、pH7.2) 2L在121°C下高压釜杀菌20分钟，制备种子用烧瓶培养基。
[0071]接着，将以下组成的培养基(葡萄糖30g/L、玉米浆30g/L、硫酸铵0.5g/L、磷酸二氢钾2.25g/L、磷酸氢二钠12水合物5.7g/L、氯化钙2水合物0.lg/L、硫酸镁7水合物
0.5g/L、硫酸铁7水合物5g/L、L-谷氨酸钠I水合物6g/L、醇系消泡剂0.5g/L)40L加入100L容量的发酵槽，准备两个该发酵槽。在该发酵槽中以达到0.lmg/L的方式添加D-生物素，在121°C高压釜杀菌30分钟。
[0072]将前述挑选的玉米黄质生产能力高的副球菌属玉米黄质产生细菌株接种于上述种子用烧瓶培养基，在27°C以IOOrpm进行旋转振摇培养2天后，将该培养液2L接种于各上述发酵槽。进行27°C、通气量Ivvm的需氧培养120小时。以将培养中的pH维持于7.2的方式用15%氨水连续地控制pH。葡萄糖以不耗尽的方式连续地供给。另外，将最低搅拌转数设为IOOrpm，并以培养中期的培养液中的溶留氧浓度维持于3ppm的方式来改变搅拌转数。通过用气泡传感器来感知发泡而自动添加醇系消泡剂以抑制发泡。对所得培养液进行杀菌后，用离心分离器集菌，对所得菌体添加适量的水，用喷雾干燥器进行干燥。
[0073]通过上述方法由培养液得到含有玉米黄质色素的干燥菌体。含有玉米黄质色素的干燥菌体中的玉米黄质浓度为6.6mg/g。
[0074]接着，在中部饲料株式会社制的基础饲料(X Y — S7)中添加所得的含有玉米黄质色素的干燥菌体，以达到规定的玉米黄质浓度的方式制备饲料。
[0075]将试验饲料产蛋鸡3只一组分为6组，使给予各组的饲料中的玉米黄质浓度为:玉米黄质0mg/100g(玉米黄质无添加组)、以及玉米黄质lmg/100g(lmg/100g添加组)、玉米黄质3mg/100g(3mg/100g添加组)、玉米黄质5mg/100g(5mg/100g添加组)、玉米黄质IOmg/IOOg (lOmg/IOOg添加组)和玉米黄质20mg/100g(20mg/100g添加组)，饲养2周。给料量设为早晚各50g。
[0076]从各试验组收集蛋，通过高效液相色谱测定所得鸡蛋(玉米黄质强化鸡蛋)的蛋黄中的玉米黄质量。其结果示于图1。
[0077]〔实施例2〕摄取了玉米黄质强化鸡蛋的受试者的血中玉米黄质浓度的评价I
使受试者单次摄取半熟状态的5个(相当于2个7.5mg/100g的蛋的分量)实施例1中制造的玉米黄质强化鸡蛋(蛋黄中玉米黄质浓度3mg/100g),测定24小时后的血中玉米黄质浓度。作为对照组，使受试者摄取含有玉米黄质的补充剂(来源于螺旋藻，I片补充剂中玉米黄质浓度为0.17mg/l片)15片，同样地测定24小时后的血中玉米黄质浓度。结果不于表I。
【权利要求】
1.家禽蛋，其中，蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为3.5mg?IOmg的玉米黄质。
2.权利要求1所述的家禽蛋，其中，所述家禽为鸡。
3.玉米黄质强化家禽蛋，其是通过对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料而得到的。
4.权利要求3所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，所述细菌是属于副球菌(Paracoccus)属的细菌。
5.权利要求3或4所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，所述饲料中的玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
6.权利要求3?5中任一项所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为1.5mg?IOmg的玉米黄质。
7.权利要求3?6中任一项所述的玉米黄质强化家禽蛋，其中，所述家禽为鸡。
8.玉米黄质强化家禽蛋的制造方法，其包括对家禽饲以含有产生玉米黄质的细菌的家禽饲料的步骤。
9.权利要求8所述的方法，其中，所述细菌是属于副球菌属的细菌。
10.权利要求8或9所述的方法，其中，所述饲料中的玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
11.权利要求8?10中任一项所述的方法，其中，所述玉米黄质强化家禽蛋在蛋黄中含有相对于蛋黄IOOg为1.5mg?IOmg的玉米黄质。
12.权利要求8?11中任一项所述的方法，其中，所述家禽为鸡。
13.家禽饲料，其含有产生玉米黄质的细菌。
14.权利要求13所述的家禽饲料，其中，所述细菌是属于副球菌属的细菌。
15.权利要求13或14所述的家禽饲料，其中，玉米黄质添加量相对于该饲料IOOg为Img以上。
16.权利要求13?15中任一项所述的家禽饲料，其中，所述家禽为鸡。
【文档编号】A23K1/18GK103476266SQ201280019650
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2012年2月17日 优先权日:2011年2月23日
【发明者】川岛祐贵, 永井秀忠, 五十岚道久 申请人:吉坤日矿日石能源株式会社