专利名称：一种提高烟草青枯病抗性的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高烟草青枯病抗性的方法，具体涉及利用丛枝菌根真菌提高烟草青枯病抗性的方法。
背景技术：
青枯病是烟草生长中最常见的病患之一，它是由茄科劳尔氏菌引起的一种细菌性土传病害。近年来，该病在我国云南、重庆、湖南、福建等长江以南各烟区普遍发生。在旱地重病烟田，青枯病发病率可达30%-80%，造成大片烟株枯死甚至绝收，严重影响烟草的产量和质量，带来了巨大的经济损失。目前，烟草生产中防治青枯病主要采用各种拮抗菌制备的微生物制剂，如一种抗烟草青枯病的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法(CN201110195718.7)、用于防除连作烟草青枯病的拮抗菌NJL-14 (CN201010222337.9)或者一些植物成分，如一种防治烟草青枯病的植物源杀菌剂(CN201110317994.6)，或者农药，如溴菌腈.壬菌铜复配制剂及其防治烟草青枯病的应用(CN201110410302.2)，这些方法在使用中都引入了大量的外源物质或者生物，对生态环境、烟草植株造成污染，如何安全且有效的提高烟草青枯病抗性还有待解决。
发明内容
本发明的目的是为了有效降低烟草的青枯病的发病率和病情指数。本发明的目的是通过以下措施实现的:一种提高烟草青枯病抗性的方法，包括每种丛枝菌根真菌初始菌种单独扩繁，混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草；所述丛枝菌根真菌扩繁的初始菌种包括蜜色无梗囊霉(A caulospora mellea)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices);扩繁后的蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices)的混合比例为 0.5 1:1:1,以重量比计。初始菌种的接种量是扩繁基质的3% 5%，以重量比计。所述丛枝菌根真菌菌剂形成的群落接近于自然状态，菌种间协同配合更好的发挥提高烟草青枯病抗性的作用。为了提高菌群质量，并提高丛枝菌根真菌的侵染效率，上述混合丛枝菌根真菌菌剂的密度为:孢子密度>20个/克干土。为了有利于菌群各种菌种的共同生长发育，并保有良好的健康状态，上述丛枝菌根真菌扩繁基质包括3:1的河沙和土壤。进一步地，所述丛枝菌根真菌扩繁基质还包括尿素和过磷酸I丐,按每IOOkg河沙混入5 IOg尿素和20 40g过磷酸I丐的配比量配成基质。为了保证营养的充分有效利用，上述河沙和土壤过Imm筛，121° C高压蒸汽灭菌或160 170°C干热灭菌，2小时(h)。上述每种丛枝菌根真菌初始菌种单独扩繁包括以下步骤:以三叶草或玉米为宿主植物；3:1的河沙和土壤过Imm筛，121° C高压蒸汽灭菌或160 170° C干热灭菌2h，每IOOkg河沙再加入5 IOg尿素和20 40g过磷酸|丐配成基质；在基质中分别接种上述丛枝菌根真菌初始菌种进行每种菌种的单独扩繁，接种量为3% 5%，用层施法或混施法拌匀，然后在基质中加入18% 22%的水，播种宿主植物的种子，常规管理，3 4个月后即可收获扩繁后的丛枝菌根真菌，收获的方法是把宿主植物的地上部剪去，剪碎根段混匀，含有宿主植物根段、丛枝菌根真菌孢子、根外菌丝的风干基质即为扩繁后的丛枝菌根真菌。上述提高烟草青枯病抗性的方法，包括下列步骤:( 1)扩繁丛枝囷根真囷，制备混合丛枝囷根真囷囷剂:丛枝囷根真囷初始囷种为蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)、根内球囊霉(Glomusintraradices);以三叶草或玉米为宿主植物；3:1的河沙和土壤过Imm筛，121°C高压蒸汽灭菌或160 170°C干热灭菌2h,每IOOkg河沙再加入5 IOg尿素和20 40g过磷酸钙配成基质，在基质中接入3% 5%的所述丛枝菌根真菌初始菌种，用层施法或混施法拌匀，然后在基质中加入18% 22%的水，播种宿主植物的种子，常规管理，3 4个月后即可收获扩繁后的丛枝菌根真菌，收获的方法是把宿主植物的地上部剪去，剪碎根段混匀，含有宿主植物根段、丛枝菌根真菌孢子、根外菌丝的风干基质即为扩繁后的丛枝菌根真菌；然后混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草，混合比例为蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea):摩西球囊霉(Glomus mosseae):根内球囊霉(Glomusintraradices) =0.5 1:1:1,以重量比计,含有丛枝菌根真菌孢子、菌丝及被侵染根段。(2)菌根化烟苗的培养:在泡沫漂浮孔穴育苗盘中加入步骤(I)制得的混合丛枝菌根真菌菌剂，其中，以过Imm筛，121° C高压蒸汽灭菌或160-170° C干热灭菌2h的河沙作为育苗基质，每100 g育苗基质加入10 g混合丛枝菌根真菌菌剂，播种烟草种子，使育苗盘下半部分浸入自来水中，待种子出苗后间苗，每孔留苗I棵，并把自来水更换成1/5 1/2质量浓度的霍格兰 (Hoagland)营养液，每天补足减少的水分，每2 3周更换一次营养液；生长60 70天取烟苗，当根系菌根侵染率大于30%时即可用于移栽；为了混合丛枝菌根真菌与烟草能更好的和谐共生，每IOOg育苗基质加入10 g混合丛枝菌根真菌菌剂。(3)将步骤(2)得到的菌根化烟苗在田间进行移栽。根据土壤肥力进行施肥管理，同时进行水分、杂草等田间管理，使植物正常生长。所述的丛枝菌根真菌菌剂的使用方法是采用育苗器育苗的方法施用于植物。所述扩繁后侵染烟草的丛枝菌根真菌的密度为:孢子密度>20个/克干土。密度过低时，通过延长收获期或在菌剂中再次播种宿主植物以使丛枝菌根真菌的繁殖体扩增；在冬季温度低时，扩繁过程在温室内进行。本发明的有益效果1.本发明的丛枝菌根真菌在自然状态下能够与烟草共生，通过改善烟草的营养状况尤其是磷营养来提高烟草的产量和品质，可有效提高烟草的抗旱性、抗盐碱、抗重金属等。本发明通过试验证实,丛枝菌根真菌和烟草形成丛枝菌根共生体后,所述共生体可以改善烟草的矿质营养状况，促进烟草生长，提高烟草抗病有关酶的活性，烟草的青枯病的发病率减少了 50%以上，病情指数减少了 34%以上，从而提高了烟草对青枯病的抗性。2.本发明采用纯天然的方法，几乎未使用化学药剂，简单实用，绿色环保。
具体实施方式
下面结合实施例与具体实施方式
对本发明作进一步详细说明:实施例1:( I)扩繁丛枝菌根真菌，制备混合丛枝菌根真菌菌剂:丛枝菌根真菌初始菌种为蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea)、摩西球囊霉(Glomus mosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices);以三叶草或玉米为宿主植物；3:1的河沙和土壤过Imm筛，121°C高压蒸汽灭菌2h，每IOOkg河沙再加入IOg尿素和40g过磷酸钙配成基质，在基质中接入5%的所述丛枝菌根真菌初始菌种，用层施法或混施法拌匀，然后在基质中加入22%的水，播种宿主植物的种子，常规管理，3个月后即可收获扩繁后的丛枝菌根真菌，收获的方法是把宿主植物的地上部剪去，剪碎根段混匀，含有宿主植物根段、丛枝菌根真菌孢子、根外菌丝的风干基质即为扩繁后的丛枝菌根真菌；然后混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草，混合比例为蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea):摩西球囊霉(Glomus mosseae):根内球囊霉(Glomusintraradices) =0.5:1:1,以重量比计,含有丛枝菌根真菌孢子、菌丝及被侵染根段。(2)菌根化烟苗的培养:在泡沫漂浮孔穴育苗盘中加入步骤⑴制得的混合丛枝菌根真菌菌剂，其中，以过Imm筛，121° C高压蒸汽灭菌，每100 g育苗基质加入10 g混合丛枝菌根真菌菌剂，播种烟草种子，使育苗盘下半部分浸入自来水中，待种子出苗后间苗，每孔留苗I棵，并把自来水更换成1/5强度的霍格兰(Hoagland)营养液，每天补足减少的水分，每2周更换一次营养液；生长60天取烟苗，当根系菌根侵染率大于30%时即可用于移栽；(3)试验处理:把120 0g风干的农田土壤进行粉碎，过Icm筛，装入IL的陶瓷盆中。每盆移栽一株菌根化烟草幼苗，同时移栽一株不接种丛枝菌根真菌的烟苗，共2个处理。每个处理重复20次。对照处理接种60g不含有菌根结构的灭菌菌剂和菌剂滤液。生长40天后接种青枯病原菌，采用灌根法，将浓度为107cfu/ml的孢子悬液I mL稀释100倍浇灌到植株根部。10天后收获植物，进行测定分析。本发明使用的蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea)、摩西球囊霉(Glomusmosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices)分别购买于北京市农林科学研究院“丛枝菌根真菌种质在资源库”、中国农业大学科研机构。本发明的病情指数按照Garabedian的标准方法计算(Garabedian S, Grund S DV.Use of Avermectins for the control of Meloidogyne incognita on tomatoes.Journal of Nematology, 1983,15 (4): 503 — 509)。过氧化物酶的测定按照陈建励的方法进行测定(陈建勋，王晓峰.植物生理学实验指导(第二版)[M].广州:华南理工大学出版社.2006.72-74.)结果表明，接种处理的植物菌根侵染率远高于对照处理的植物菌根侵染率，植物生物量显著增加，病情指数和发病率(见表I)显著降低。过氧化物酶酶活性显著高于对照植株(表2)。这意味着接种丛枝菌根真菌可以有效促进烟苗生长，提闻抗病有关酶活性，提高烟草对青枯病的抗性。表I植物收获后不同接种处理烟草青枯病的发病情况(单位:％)
权利要求
1.一种提高烟草青枯病抗性的方法，包括每种丛枝菌根真菌初始菌种单独扩繁，混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草；所述丛枝菌根真菌扩繁的初始菌种包括蜜色无梗囊霉( eBea)、摩西球囊霉(Glomus fflosseae)、根内球囊霉(Glomus in traradices);扩繁后的蜜色无梗囊霉摩西球囊霉(Glomus fflosseae)、根内球囊霉(Glomus intraradices)的混合比例为 0.5 1:1:1,以重量比计。
2.如权利要求1所述的提高烟草青枯病抗性的方法，其特征在于所述初始菌种的接种量是扩繁基质的3% 5%。
3.如权利要求1或2所述的提高烟草青枯病抗性的方法，其特征在于所述扩繁后侵染烟草的丛枝菌根真菌的密度为:孢子密度>20个/克干土。
4.如权利要求1 3所述的提高烟草青枯病抗性的方法，所述丛枝菌根真菌扩繁基质包括3:1的河沙和土壤。
5.如权利要求4所述的提高烟草青枯病抗性的方法，所述丛枝菌根真菌扩繁基质还包括尿素和过磷酸韩，每IOOkg河沙加入5 IOg尿素和20 40g过磷酸隹丐。
6.如权利要求4或5所述的提高烟草青枯病抗性的方法，所述河沙和土壤过Imm筛，121°C高压蒸汽灭菌2h或160 170°C干热灭菌2h。
7.如权利要求1 6任一所述的提高烟草青枯病抗性的方法，所述每种丛枝菌根真菌初始菌种单独扩繁包括以下步骤:以三叶草或玉米为宿主植物；3:1的河沙和土壤过Imm筛，121°C高压蒸汽灭菌或160 170°C干热灭菌2h，每IOOkg河沙再加入5 IOg尿素和20 40g过磷酸钙配成基质；在基质中分别接种上述丛枝菌根真菌初始菌种进行每种菌种的单独扩繁，接种量为3% 5%，用层施法或混施法拌匀，然后在基质中加入18% 22%的水，播种宿主植物的种子，常规管理，3 4个月后即可收获扩繁后的丛枝菌根真菌，收获的方法是把宿主植物的地上部剪去,剪碎根段混匀。
8.如权利要求1 7任一所述的提高烟草青枯病抗性的方法，所述提高烟草青枯病抗性的方法，包括下列步骤: (1)扩繁丛枝囷根真囷，制备混合丛枝囷根真囷囷剂:丛枝囷根真囷初始囷种为蜜色无梗囊霉i Acaulospora eBea)、摩西球囊霉(Glomus fflosseae)、根内球囊霉(Glomusintraradices);以三叶草或玉米为宿主植物；3:1的河沙和土壤过Imm筛，121 °C高压蒸汽灭菌或160 170°C干热灭菌2h,每IOOkg河沙再加入5 IOg尿素和20 40g过磷酸钙配成基质，在基质中接入3% 5%的所述丛枝菌根真菌初始菌种，用层施法或混施法拌匀，然后在基质中加入18% 22%的水，播种宿主植物的种子，常规管理，3 4个月后即可收获扩繁后的丛枝菌根真菌，收获的方法是把宿主植物的地上部剪去，剪碎根段混匀，含有宿主植物根段、丛枝菌根真菌孢子、根外菌丝的风干基质即为扩繁后的丛枝菌根真菌；然后混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草，混合比例为蜜色无梗囊霉(me I lea):摩西球囊霉(Glomus mosseae):根内球囊霉(Glomusintraradices") =0.5 1:1:1,以重量比计,含有丛枝菌根真菌孢子、菌丝及被侵染根段； (2)菌根化烟苗的培养:在泡沫漂浮孔穴育苗盘中加入步骤(I)制得的混合丛枝菌根真菌菌剂，以过Imm筛，121°C高压蒸汽灭菌或160-170°C干热灭菌2h的河沙作为育苗基质，每100 g育苗基质加入 10 g混合丛枝菌根真菌菌剂，播种烟草种子，使育苗盘下半部分浸入自来水中，待种子出苗后间苗，每孔留苗I棵，并把自来水更换成1/5 1/2质量浓度的霍格兰(Hoagland)营养液,每天补足减少的水分，每2 3周更换一次营养液；生长60 70天取烟苗，当根系菌根侵染率大于30%时即可用于移栽； (3)将步骤(2)得到的菌根化烟苗在田间进行移栽；根据土壤肥力进行施肥管理，同时进行水分、杂草等田间 管理，使植物正常生长。
全文摘要
本发明提供了一种提高烟草青枯病抗性的方法，包括每种丛枝菌根真菌初始菌种单独扩繁，混合扩繁后的丛枝菌根真菌制备混合丛枝菌根真菌菌剂侵染烟草；所述丛枝菌根真菌扩繁的初始菌种包括蜜色无梗囊霉(Acaulosporamellea)、摩西球囊霉(Glomusmosseae)、根内球囊霉(Glomusintraradices)；扩繁后的蜜色无梗囊霉(Acaulosporamellea)、摩西球囊霉(Glomusmosseae)、根内球囊霉(Glomusintraradices)的混合比例为0.5～1:1:1，以重量比计。本发明促进烟草生长，有效降低烟草的青枯病的发病率和病情指数，从而提高了烟草对青枯病的抗性。
文档编号A01G1/00GK103155815SQ20131008611
公开日2013年6月19日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者郭涛, 习向银 申请人:西南大学