专利名称：一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法
技术领域：
本发明涉及一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，属于生物技术技术领域。
背景技术：
近几年，我国白酒年产量约为900万吨，随之而来的副产品酒糟的年产量约为1500万吨。白酒酒糟是白酒生产最大的副产品，其中残存未能完全利用的淀粉、被富集的蛋白质、代谢产物氨基酸、维生素、矿物元素、微生物菌体等营养物质，如表I所示，这些营养成分可进行多方面的综合利用。
表I白酒酒糟成分
.1 11成分ii+Aj埤 11成分 水份01.U5灰分IHftii 粉7, 总 ft* AfiIH H2.SIHUKilH.m 发酸 乙in 77WiO, On IHfTffLItL 4 ο.15 HUItilJj2.s;ifta i a
现在全国一年的饲料用粮大概占全国粮食总产量的23%左右，白酒酿造行业每年耗粮达2000多万吨，而酒糟生产干饲料所节省的饲料用粮，相当于酿酒的30%。一个年产万吨的白酒厂年产酒糟3万吨，可生产干饲料7000吨，所节省的饲料用粮，相当于酿酒耗粮的30%。
目前，处理酒糟的传统方法是用做家畜饲料，酒糟中虽然含有丰富的蛋白质、维生素、微量元素、无氮浸出物、糖类、丰富的磷、钾等营养成分，但是酒糟适口性差、消化率较低、严重地影响了酒糟的饲用价值和饲养效果。
我国养殖业规模世界第一、同时各种抗生药物大量使用，对人类健康造成的危害日益严重。随着世界上许多国家对抗生素使用的限制，抗生素在动物养殖饲料中大量使用的行为将被禁止。益生菌具有改善饲养动物消化系统生态环境、抵抗病原菌的作用，是目前替代抗生药物的理想选择。
中国专利文献CN102715342A (申请号201210178380.9)公开了一种基于白酒糟和杂柏的微生物饲料的加工方法，其以白酒糟为原料经过脉孢菌、曲霉一期发酵预处理，充分降解白酒糟的木质素、纤维素和淀粉，再添加部分棉柏经芽孢杆菌和酵母菌二期发酵，吸收霉菌降解废弃物产生的营养物质及霉菌本身解体的营养物质。然后添加豆柏和菜子柏，接种乳酸菌、双歧杆菌经三期厌氧发酵成成品。该方法需要进行三期发酵，耗费时间长，并且生产工艺过长，容易沾染杂菌， 从而导致生产成本高。发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法。
本发明的技术方案如下:
一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，步骤如下:
(I)向酒糟中加入2 5倍重量的水，在室温搅拌条件下浸泡15 30min，过20目筛，向滤液中加入滤液重量0.01 0.1%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活为50000U/ml，在40 55°C下水解2 4h，然后调节pH至4.0 5.0，加入滤液重量0.1 0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活为100000U/ml，在60 65°C下水解4 6h，制得水解液，然后将水解液浓缩至原体积的20% 50%，制得酒糟提取液；
(2)取活菌浓度为1.0 1.5X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii)发酵液50 60份，活菌浓度为3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液 20 30 份，活菌浓度为 1.0 1.2X 109CFU/ml 的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液20 30份,混合后,制得混合液,混合液经分离菌体，制得混合湿菌体；
(3)配制海藻糖质量浓度为5 8%、维生素C质量浓度为0.05 1%、乳糖质量浓度为I 5%的保护液；
将玉米淀粉和沸石粉按质量比(I 2): (I 2)的比例混合均匀，制得复合载体；
(4)将步骤(2)制得的混合湿菌体与步骤(3)制得的保护液按质量比(I 2):(I 2)的比例混合均匀，然后分别按步骤(2)制得的混合液重量的40 60%各加入步骤(O制得的酒糟提取液和步骤(3)制得的复合载体，混合均匀后经40 50°C干燥，制得微生物饲料益生菌剂。制得的微生物饲料益生菌剂中活菌总数> 109eFU/g。
根据本发明优选的，所述步骤(I)中的酒糟中，总糖8 10wt%，还原糖0.2 0.5wt%,总氮I 1.5wt%,纤维素10 15wt%，含水量60 65wt%，酸度2 2.5wt%,余量为粗脂肪和无机盐及杂质。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)为保藏号ATCC MYA796的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii) Sb48或保藏号CICC31992的博拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)(注:布拉德酵母与博拉迪酵母均为boulardii的中文音译，菌株分类名称以拉丁名称为准)。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号CICC22696 ；
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为保藏号为CFCC2698的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或保藏号为CFCC2741的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中的分离为经15000rpm连续离心分离或加入絮凝剂沉淀过夜分离。
根据本发明优选的,所述步骤(2)中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液按如下方法制备:
a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌种接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速180rpm的条件下,摇瓶培养24 30小时,制得种子液；
b、按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下，培养24 30小时，制得二级种子液；
C、按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下，培养30 36小时，制得活菌浓度为1.0 1.5 X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液。
根据本发明进一步优选的，所述步骤a中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至1L，pH5.5，121°C灭菌20分钟。
根据本发明进一步优选的，所述步骤b和c中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:1 2%的葡萄糖或废糖蜜，0.5 1%的硫酸铵，0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节PH为5.5，121°C灭菌20分钟。
根据本发明优选的,所述步骤(2)中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液按如下方法制备:
(i)取半固体穿刺活化的植物乳杆菌菌种接入种子培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养12 24小时，制得种子液；
(ii)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养12 24小时，制得二级种子液。
(iii)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧发酵培养24 36小时，制得活菌浓度为3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液。
根据本发明进一步优选的，所述步骤(i)中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g，柠檬酸二胺2g，磷酸氢二钾2g,MgSO4.7Η200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐温 801ml,乙酸钠 5g，水定容至 1L，ρΗ6.8，121°C灭菌20分钟。
根据本发明进一步优选的，所述步骤(i i )和(i i i )中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.5 1%的葡萄糖或废糖蜜，0.2 0.5%的硫酸铵，I 2%的碳酸钙，0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节PH为6.8，121°C灭菌20分钟。
根据本发明优选的,所述步骤(2)中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液按如下方法制备:
(I)取斜面活化的地衣芽孢杆菌菌种I环接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速160rpm的条件下,摇瓶培养8 12小时,制得种子液；
(II)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下,培养8 12小时,制得二级种子液；
(III)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下，培养12 24小时，制得活菌浓度为1.0 1.2X IO9CFU/ml的地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液。
根据本发明进一步优选的，所述步骤(I)中，种子培养基每升含有如下组分:蛋白胨10g，氯化钠IOg,酵母粉5g，葡萄糖10g，水定容至1L，ρΗ7.5，121°C灭菌20分钟。
根据本发明进一步优选的，所述步骤(I I)和(I II)中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.2 0.5%的葡萄糖或废糖蜜，0.2 0.5%的硫酸铵，0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节PH为7.5，121°C灭菌20分钟。
上述酸性蛋白酶的添加目的是将酒糟中的蛋白分解为小分子物质，从而有利于后续微生物的利用，因此本领域可以根据需要选择相应的现有酸性蛋白酶。
糖化酶的添加目的是将酒糟中的淀粉水解为微生物可以利用的葡萄糖，因此本领域可以根据需要选择相应的现有糖化酶。
有益效果
1、本发明制得的微生物饲料益生菌剂中含有布拉德酵母菌，从而可以强化肠黏膜组织，吸附病原菌和降解病原菌毒素，平衡菌群，提高动物营养素的吸收和利用，减少营养性腹泻，提高生长速度，调节机体局部免疫功能等；
2、本发明制得的微生物饲料益生菌剂中含有植物乳杆菌，从而可以拮抗病原微生物，调节动物消化道微生物区系平衡，活化免疫系统，增强免疫力等功能；
3、本发明制得的微生物饲料益生菌剂中含有地衣芽孢杆菌，从而可以拮抗病源菌，产生丰富酶类，提高饲养动物消化吸收，促进动物免疫功能等。
4、本发明通过加入保护液，保护液具有益生菌细胞在脱水及贮藏过程中保护细胞活性的作用；同样条件下，使用保护液可以提高细胞活性8 15%。37°C恒温贮藏7天，活细胞损失小于7%。
5、本发明制得的微生物饲料益生菌剂以酒糟为主要原料，通过添加适量的营养物质，以液态形式培养三种益生菌，制备复合微生物饲料益生菌剂，提高了酒糟的附加值，利用微生物发酵的方法处理酒糟，解决了酒糟利用的难题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明技术方案做进一步阐述，这些实施例不得用于解释对本发明保护范围的限制。'
实施例1和3中所述布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)为保藏号ATCCMYA796的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii) Sb48 ;实施例2所述布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)为保藏号 CICC31992 的博拉迪酵母菌(Saccharomycesboulardii)；
实施例3中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液按现有常规技术制备；实施例1 2中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液按如下方法制备:
a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌种I环接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速180rpm的条件下,摇瓶培养24小时,制得种子液；
b、按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下,培养24小时,制得二级种子液；
C、按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下，培养34小时，制得1.0 1.5X 109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液。
所述步骤a中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至1L, ρΗ5.5，121°C灭菌 20 分钟。
所述步骤b和c中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:1%的葡萄糖，0.5%的硫酸铵，0.5%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为5.5，121°C灭菌20分钟。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号CICC22696 ；
实施例3中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液按现有常规技术制备；实施例1 2中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液按如下方法制备:
(i)取半固体穿刺活化的植物乳杆菌菌种I环接入种子培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养18小时，制得种子液；
(ii)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养18小时，制得二级种子液。
(iii)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧发酵培养24小时，制得活菌浓度为3.0 3.5 X 109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液。
所述步骤(i)中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏IOg,酵母提取物 5g，柠檬酸二胺 2g，磷酸氢二钾 2g，MgSO4.7H200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐温801ml,乙酸钠5g，水定容至1L，ρΗ6.8，121°C灭菌20分钟。
所述步骤(ii)和(iii)中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.5%的葡萄糖，0.5%的硫酸铵，2%的碳酸钙，1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为6.8，121°C灭菌20分钟。
实施例1 2的地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)为保藏号CFCC2698的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis);实施例3的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)为保藏号 CFCC2741 的地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)；
实施例3中的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液按现有常规技术制备；实施例1 2中地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液按如下方法制备:
(I)取斜面活化的地衣芽孢杆菌菌种I环接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速160rpm的条件下,摇瓶培养12小时,制得种子液；
(II)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下,培养12小时,制得二级种子液；
(III)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下，培养18小时，制得活菌浓度为1.0 1.2X109CFU/ml的地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液。
所述步骤(I)中，种子培养基每升含有如下组分:蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母粉5g，葡萄糖IOg,水定容至1L, pH7.5,121°C灭菌20分钟。
所述步骤(II)和(III)中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.5%的葡萄糖，0.5%的硫酸铵，1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为7.5，121°C灭菌20分钟。
酸性蛋白酶购自山东隆大生物工程有限公司，酸性蛋白酶溶液酶活为50000U/ml ；
糖化酶购自山东隆大生物工程有限公司，糖化酶溶液酶活为100000U/ml ；
酒糟购自济南趵突泉酿酒有限责任公司，经检测，成分如下:
总糖9.2%，还原糖0.41wt%，总氮1.33t%，纤维素14.6wt%，含水量64wt%，酸度4.5wt%,余量为粗脂肪和无机盐及杂质。
实施例1
一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，步骤如下:
(I)向酒糟中加入4倍重量的水，在室温搅拌条件下浸泡15min，过20目筛，向滤液中加入滤液重量0.05%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活为50000U/ml，在45 °C下水解4h，然后调节pH至4.0，加入滤液重量0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活为100000U/ml，在60°C下水解4h，制得水解液，然后将水解液浓缩至原体积的25%，制得酒糟提取液；
(2)取 1.5X 109CFU/ml 的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液 60份，活菌浓度为3.0X 109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液20份，活菌浓度为1.2X109CFU/ml的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液20份，混合后，制得混合液，混合液经15000rpm的连续式离心机分离菌体,制得混合湿菌体；
(3)配制海藻糖质量浓度为5%、维生素C质量浓度为1%、乳糖质量浓度为2%的保护液；
将玉米淀粉和沸石粉按质量比1:1的比例混合均匀，制得复合载体；
(4)将步骤(2)制得的混合湿菌体与步骤(3)制得的保护液按质量比1:1的比例混合均匀，然后分别按步骤(2)制得的混合液重量的50%加入步骤(I)制得的酒糟提取液和步骤(3)制得的复合载体，混合均匀后经50°C干燥，制得微生物饲料益生菌剂。
经检测，布拉德酵母菌活菌数〉1.5X 109eFU/g，植物乳杆菌〉1.25X 109eFU/g，地衣芽孢杆菌〉6.0X 108CFU/go
实施例2
如实施例1所述的利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，不同之处在于，
步骤(2)中，布拉德酵母菌发酵液50份，植物乳杆菌发酵液30份，地衣芽孢杆菌发酵液20份。
制得微生物饲料益生菌剂经检测，布拉德酵母菌活菌数> 1.0X 109CTU/g，植物乳杆菌〉1.6X 109CFU/g，地衣芽孢杆菌〉6.0X 108CFU/g。
实施例3
如实施例1所述的利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，不同之处在于，
步骤(2)中，布拉德酵母菌发酵液50份，植物乳杆菌发酵液25份，地衣芽孢杆菌发酵液25份。
制得微生物饲料益生菌剂经检测，布拉德酵母菌活菌数> 1.0X 109CTU/g，植物乳杆菌〉1.25X 109CFU/g，地衣芽孢杆菌〉6.0X 108CFU/g。
对比例
如实施例1所述的方法，不同之处在于，不加入步骤(3)制得的保护液。
制得微生物饲料益生菌剂经检测，布拉德酵母菌活菌数为1.48 X 109CTU/g，植物乳杆菌为1.15X 109CFU/g，地衣芽孢杆菌为5.6X 108CFU/g。
试验例
如实施例1所述的利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，不同之处在于，
不加入步骤(3)制得的保护液。制得微生物饲料益生菌剂，密封，放置于37°C恒温箱中7天，经检测，布拉德酵母菌活菌数为1.45X 109eFU/g，植物乳杆菌为1.0X 109eFU/g，地衣芽孢杆菌数为5.3X 108eFU/g。活细胞总量:2.98X 109eFU/g，不加入保护剂活细胞损失11.04%ο
与实施例1制得微生物饲料益生菌剂，经检测，布拉德酵母菌活菌数:1.52 X 109eFU/g，植物乳杆菌:1.21 X 109CFU/g,地衣芽孢杆菌:6.2 X 108CFU/g.活性细胞总量:3.35X 109CFU/g。
将实施例1制得微生物饲料益生菌剂，密封，放置于37°C恒温箱中7天(注:该方法为本领域检验活细胞贮藏期的常规的强化方法)，经检测，布拉德酵母菌活菌数为1.46X 109eFU/g，植物乳杆菌为1.12X 109eFU/g，地衣芽孢杆菌为5.5X108CFU/g.细胞总量为:3.13X109CFU/go活细胞损失率为6.6%。不加入保护剂的对比例为11.04%。
权利要求
1.一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，其特征在于，步骤如下: (1)向酒糟中加入2 5倍重量的水，在室温搅拌条件下浸泡15 30min，过20目筛，向滤液中加入滤液重量0.01 0.1%的酸性蛋白酶溶液，酸性蛋白酶溶液酶活为50000U/ml，在40 55°C下水解2 4h，然后调节pH至4.0 5.0，加入滤液重量0.1 0.5%的糖化酶溶液，糖化酶溶液酶活为100000U/ml，在60 65°C下水解4 6h，制得水解液，然后将水解液浓缩至原体积的20% 50%，制得酒糟提取液； (2)取活菌浓度为1.0 1.5X109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii)发酵液50 60份，活菌浓度为3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液 20 30 份，活菌浓度为 1.0 1.2X 109CFU/ml 的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液20 30份,混合后,制得混合液,混合液经分离菌体，制得混合湿菌体； (3)配制海藻糖质量浓度为5 8%、维生素C质量浓度为0.05 1%、乳糖质量浓度为I 5%的保护液； 将玉米淀粉和沸石粉 按质量比(I 2): (I 2)的比例混合均匀，制得复合载体； (4)将步骤(2)制得的混合湿菌体与步骤(3)制得的保护液按质量比(I 2): (I 2)的比例混合均匀，然后分别按步骤(2)制得的混合液重量的40 60%各加入步骤(I)制得的酒糟提取液和步骤(3)制得的复合载体，混合均匀后经40 50°C干燥，制得微生物饲料益生菌剂。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中的酒糟中，总糖8 10wt%，还原糖0.2 0.5wt%,总氮I 1.5wt%,纤维素10 15wt%，含水量60 65wt%，酸度2 2.5wt%,余量为粗脂肪和无机盐及杂质。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)为保藏号 ATCC MYA796 的布拉德酵母菌(Saccharomycesboulardii) Sb48 或保藏号 CICC31992 的博拉迪酵母菌(Saccharomyces boulardii)； 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)为保藏号CICC22696的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)； 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为保藏号为CFCC2698的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)或保藏号为CFCC2741的地衣芽抱杆菌(Bacilluslicheniformis)。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的分离为经15000rpm连续离心分离或加入絮凝剂沉淀过夜分离。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液按如下方法制备: a、取斜面活化的布拉德酵母菌菌种接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速180rpm的条件下，摇瓶培养24 30小时，制得种子液； b、按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下，培养24 30小时，制得二级种子液； C、按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度30°C、转速200rpm的条件下，培养30 36小时，制得活菌浓度为1.0 1.5X109CFU/ml的布拉德酵母菌(Saccharomyces boulardii)发酵液。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤a中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖40g，蛋白胨lg，水定容至lL，pH5.5，121°C灭菌20分钟； 所述步骤b和c中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:I 2%的葡萄糖或废糖蜜，0.5 1%的硫酸铵，0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为5.5，121°C灭菌20分钟。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)发酵液按如下方法制备: (i)取半固体穿刺活化的植物乳杆菌菌种接入种子培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养12 24小时，制得种子液； (ii)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧培养12 24小时，制得二级种子液。
(iii)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C条件下，静置厌氧发酵培养24 36小时，制得活菌浓度为3.0 3.5X109CFU/ml的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)发酵液。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(i)中，种子培养基每升含有如下组分:葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母提取物5g，柠檬酸二胺2g，磷酸氢二钾2g,MgSO4.7Η200.58g，MnSO4.H2O0.25g，吐温 801ml,乙酸钠 5g，水定容至 1L，ρΗ6.8，121°C灭菌20分钟； 所述步骤(ii)和(iii)中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.5 1%的葡萄糖或废糖蜜，0.2 0.5%的硫酸铵，I 2%的碳酸钙，0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为6.8，121°C灭菌20分钟。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)发酵液按如下方法制备: (I)取斜面活化的地衣芽孢杆菌菌种I环接入种子培养基中，在温度30°C、摇瓶转速160rpm的条件下,摇瓶培养8 12小时,制得种子液； (II)按重量百分比5%的接种量将种子液接种于发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下,培养8 12小时,制得二级种子液； (III)按重量百分比10%的接种量将二级种子液流加接种至发酵培养基中，在温度37°C、转速180rpm的条件下，培养12 24小时，制得活菌浓度为1.0 1.2 X 109CFU/ml的地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)发酵液。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中，种子培养基每升含有如下组分:蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母粉5g，葡萄糖10g，水定容至lL，pH7.5，121 °C灭菌20分钟。
所述步骤(II)和(III)中，发酵培养基组分如下，均为重量百分比:0.2 0.5%的葡萄糖或废糖蜜，0.2 0.5%的硫酸铵， 0.5 1%的玉米浆，余量为酒糟提取液，调节pH为7.5，121°C灭菌20分钟。
全文摘要
一种利用白酒酒糟生产微生物饲料益生菌剂的方法，步骤如下(1)向酒糟中加入水，过筛，加入酸性蛋白酶溶液，水解，调节pH，再加入糖化酶溶液，水解，经浓缩，制得酒糟提取液；(2)取布拉德酵母菌发酵液，植物乳杆菌，地衣芽孢杆菌发酵液，混合后，制得混合液，混合液经分离菌体，制得混合湿菌体；(3)配制保护液和复合载体；(4)将混合湿菌体与保护液混合均匀，然后分别加入酒糟提取液和复合载体，混合均匀后干燥，制得微生物饲料益生菌剂。本发明以酒糟为主要原料，通过添加适量的营养物质，以液态形式培养三种益生菌，制备复合微生物饲料益生菌剂，提高了酒糟的附加值，利用微生物发酵的方法处理酒糟，解决了酒糟利用的难题。
文档编号A23K1/06GK103141666SQ201310104568
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月28日 优先权日2013年3月28日
发明者王瑞明, 赵殿臣, 杜新勇, 王腾飞, 李丕武, 范志勇 申请人:山东轻工业学院, 古贝春集团有限公司