甜叶菊种质保存方法

甜叶菊种质保存方法
【专利摘要】本发明公开了一种甜叶菊种质保存方法，利用本方法可显著延长种质的保存时间，同时节省保存所需的劳力、物力和空间。本发明的主要过程是：将甜叶菊种质的种苗进行消毒灭菌，然后在超净工作台上进行接种，将接种好的种苗放入培养箱中进行培养保存，保存到种苗长满试管空间后进行继代。
【专利说明】甜叶菊种质保存方法
【技术领域】
[0001]本发明是关于植物种质的保存方法，更具体地说，是一种利用组织培养技术延长甜叶菊种质保存时间的方法。
【背景技术】
[0002]甜叶菊是菊科草本植物，原产巴拉圭一带，八十年代初我国引种栽培成功，其叶片中甜菊糖苷的甜度是蔗糖300倍以上，被称为是最有开发价值和前途的健康新糖源。甜叶菊为异花授粉植物，种子带浮毛、易带菌，加上种子体积小、活力低等缺点，用常规的育种方法进行种质保存，种子的发芽率很低且易产生混杂。采用常规组培瓶接种进行甜叶菊苗种质保存，在(25±2) °C，15001x光照12h/d的常规条件下培养，种苗的生长空间较大，生长较快，保存1-2个月种苗就长满组培瓶，需继代后再培养保存。而本发明技术方案将种苗接种到试管中，在10-15°C，100-2001x光照12h/d的培养条件下，限定种苗的生长空间和培养条件，种苗生长较缓慢，培养保存10-12个月才能长满试管空间再进行继代培养保存。此方法可减少保存种苗继代培养的次数，节省继代培养所需培养基原料成本、劳力和培养保存空间。目前，关于甜叶菊种质保存的方法还未见报道。

【发明内容】

[0003]本发明的目的是克服常规种质保存方法的不足，提供一种长时间保存甜叶菊种质方法的技术，节省甜叶菊种质保存所需成本、劳力和空间。
[0004]本发明是这样实现的:
一种甜叶菊种质保存方法包括以下技术环节:
①外植体消毒:将甜叶菊种质的种苗用自来水冲洗5-8min,洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升萊中处理10 min,消毒后用无菌水冲洗3-4次；
②接种:在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的试管中，每个试管接种2个茎段；
③培养基配方:MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培养条件:将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度5-15°C，光照强度50-1000 lx，光照时间 12h/d。
[0005]⑤继代培养保存:培养保存一段时间后，种苗长满至试管顶部，无继续生长空间，需进行继代接种培养保存。
[0006]所述培养箱培养中培养温度最好为10_15°C，所述培养箱光照强度最好为100-200Ix0
[0007]本发明的有益效果:
本发明通过对接种容器的选择和组织培养条件的控制，有效地延缓甜叶菊种苗的生长速度，延长了种质培养保存的时间，减少了保存继代的次数；同时，也节省了继代保存所需培养基成本、劳力和培养空间。
【专利附图】

【附图说明】
[0008]图1为常规组培条件下甜叶菊种质生长I个月的示意图；
图2为10°C、IOOlx光照条件下试管中甜叶菊种质生长6个月的示意图；
图3为10°C、IOOlx光照条件下试管中甜叶菊种质生长12个月的示意图。
【具体实施方式】
[0009]【具体实施方式】举例I，甜叶菊品种BI种质的组培保存
①外植体消毒:将甜叶菊品系BI种苗用自来水冲洗5-8min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升萊中处理10 min,消毒后用无菌水冲洗3-4次；
②接种:在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的100 ml试管中，每个试管接种2个茎段；
③培养基配方:MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培养条件:将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度10°C,光照强度IOOlx,光照时间12h/d ；
⑤继代培养保存:培养保存1 2个月后，种苗长满至试管顶部，需进行继代接种培养保存。
[0010]【具体实施方式】举例2，甜叶菊品种B6种质的组培保存
①外植体消毒:将甜叶菊品系W3种苗用自来水冲洗5-8min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升萊中处理10 min,消毒后用无菌水冲洗3-4次；
②接种:在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的100 ml试管中，每个试管接种2个茎段；
③培养基配方:MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培养条件:将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度15°C,光照强度2001x,光照时间12h/d ；
⑤继代培养保存:培养保存11个月后，种苗长满至试管顶部，需进行继代接种培养保存。
[0011]【具体实施方式】举例3，甜叶菊品种皖甜I号种质的组培保存
①外植体消毒:将甜叶菊品系18号种苗用自来水冲洗5-8min，洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升萊中处理10 min,消毒后用无菌水冲洗3-4次；
②接种:在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的100 ml试管中，每个试管接种2个茎段；③培养基配方:MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ；
④培养条件:将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度10°C,光照强度2001x,光照时间12h/d ； ⑤继代培养保存:培养保存10个月后，种苗长满至试管顶部，需进行继代接种培养保存。
【权利要求】
1.一种甜叶菊种质保存方法，其特征是，它包括以下技术环节: ①外植体消毒:将甜叶菊种质的种苗用自来水冲洗5-8min,洗去表面灰尘和异物，然后在超净工作台上，用75%酒精浸泡处理20 s后转入0.1%升萊中处理10 min,消毒后用无菌水冲洗3-4次； ②接种:在超净工作台上用剪刀将消毒后的种苗剪为±0.5cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的试管中，每个试管接种2个茎段； ③培养基配方:MS培养基加入生长延缓剂甘露醇30g/L和生长激素6-BA 1.0 mg/L、IAA 0.1 mg/L ； ④培养条件:将接种好的试管放入培养箱中培养，培养箱温度5-15°C，光照强度50-1000 lx，光照时间 12h/d ; ⑤继代培养保存:培养保存一段时间后，种苗长满至试管顶部，无继续生长空间，需进行继代接种培养保存。
2.根据权利要求1所述的甜叶菊种质保存方法，其特征是，所述培养箱中培养温度为10-15。。。
3.根据权利要求1所述的甜叶菊种质保存方法，其特征是，所述培养箱光照强度为100-200 lx。
【文档编号】A01H4/00GK103609448SQ201310611039
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月28日 优先权日:2013年11月28日
【发明者】何克勤, 崔然, 胡能兵, 徐昊, 王建功 申请人:何克勤