一种茶树离体再生体系的构建方法
【专利摘要】本发明公开了一种茶树离体再生体系的构建方法，其离体再生体系的构建是采用带腋芽的茎段作为外植体，经培养后腋芽萌发，向上长叶，向下生根，而不经过诱导愈伤组织直接成苗。本发明以福鼎大白茶茎段为外植体，研究其再生体系的建立方法，不仅有利于保持茶树品种的遗传稳定性，还可促进茶树种质资源的保存。
【专利说明】一种茶树离体再生体系的构建方法
【技术领域】
[0001]本发明属于茶树组织培养【技术领域】，具体涉及一种茶树离体再生体系的构建方法。
【背景技术】 [0002]茶饿{Camellia sinensis L.Kuntze.)属山茶科，山茶属，是一种多年生的木本、常绿植物。茶树组织培养开始于上个世纪60年代，我国关于茶树组织培养的研究起步较晚，但近年来在科研人员的共同努力下也取得了显著性的进展，已经通过对茶树的种子、茎段、腋芽、花药等进行培养获得了完整的再生植株。但茶树组织培养中存在一些问题，使组织培养技术在茶树中的应用受到了很大的限制，其主要问题表现在以下几个方面:①将快速繁殖技术应用于茶树生产性育苗，以试管苗的不定芽或腋芽作外植体时，成梢率低，生长慢，培养周期长，无根茶苗生根相对较难，移栽大田成活率低对于不同茶树品种，组织培养结果差异较大，可比性小，甚至于同一茶树品种的组织培养结果也难以重复，稳定性较差，无法形成一套完整可靠的方法体系基因工程已成为植物遗传改良的有力手段，基因操作的成败取决于离体植物的再生，但茶树的再生技术还不够成熟，无法建立高频率、稳定的再生体系。福鼎大白茶是一个综合性状优良、全国推广和引种面积最大的茶树品种，是茶树育种工作中的一个骨干亲本，本发明以福鼎大白茶茎段为外植体，研究其再生体系的建立方法，不仅有利于保持茶树品种的遗传稳定性，还可促进茶树种质资源的保存。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种茶树离体再生体系的构建方法，本方法以性状优良的福鼎大白茶的茎段为外植体，建立其再生体系，不仅有利于保持茶树品种的遗传稳定性，还可促进茶树种质资源的保存。
[0004]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案:
一种茶树离体再生体系的构建方法，其特征在于:所述茶树离体再生体系的构建是采用带腋芽茎段作为外植体进行培养，而不经过诱导愈伤组织直接成苗；
其建立方法包括步骤如下:
1)、将带饱满腋芽的茶树茎段灭菌后，在MS+1.5 mg/L 6-BA +0.3mg/L NAA培养基上培养 30-35d ；
2)、当芽长至3-5cm时，将其切成长1-1.5cm的茎段接入MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1mg/LNAA培养基上进行增殖；
3)、当增殖的芽苗长至4-5片叶时，在1/2MS+0.2 mg/L NAA培养基上进行生根培养；
4)、当生根培养的组培苗根长至5-6cm，平均4-5条根时，进行炼苗移栽，在室外培养茶树植株。
[0005]所述的带腋芽茎段为福鼎大白茶茎段，将所述带腋芽茎段进行培养，腋芽萌发后，向上长叶，向下生根。[0006]本发明的显著优点在于:
(I)、本发明提供的茶树离体再生体系的构建方法，以综合性状优良、全国推广和引种面积最大的茶树品种福鼎大白茶的茎段作为外植体，不仅有利于保持茶树品种的遗传稳定性，还可促进茶树种质资源的保存，并可为日后茶树的提纯复壮提供理论基础。
[0007](2)、本发明所建立的茶树离体再生体系的构建方法，可不经诱导愈伤组织直接成苗，培养周期短，成梢率高，移栽大田成活率高，且方法稳定、可靠，经反复实验均能得到较好的结果。
【具体实施方式】
[0008]实施例1
一种茶树离体再生体系的建立方法，具体包括步骤如下:
1)、将带饱满腋芽的茶树茎段灭菌后，在MS+1.5 mg/L 6-BA +0.3mg/L NAA培养基上培养 30d ；
2)、当芽长至3cm时，将其切成长I cm的茎段接入MS+1.0mg/L 6-BA + 0.lmg/LNAA培养基上进行增殖；
3)、当增殖的芽苗长至4片叶时，在1/2MS+0.2 mg/L NAA培养基上进行生根培养；
4)、当生根培养的组培苗根长至5cm，平均5条根时，进行炼苗移栽，将组培苗移栽至室外培养30d后，植株成活率为67 %，且植株生长状况较好，叶片翠绿。
[0009]实施例2
一种茶树离体再生体系的建立方法，具体包括步骤如下:
1)、将带饱满腋芽的茶树茎段灭菌后，在MS+1.5 mg/L 6-BA +0.3mg/L NAA培养基上培养 32 d ;
2)、当芽长至4cm时，将其切成长I cm的茎段接入MS+1.0mg/L 6-BA + 0.lmg/LNAA培养基上进行增殖；
3)、当增殖的芽苗长至5片叶时，在1/2MS+0.2 mg/L NAA培养基上进行生根培养；
4)、当生根培养的组培苗根长至5.4 cm，平均5条根时，进行炼苗移栽。将组培苗移栽至室外培养30d后，植株成活率为65 %，且植株生长状况较好，叶片翠绿。
[0010]实施例3
一种茶树离体再生体系的建立方法，具体包括步骤如下:
1)、将带饱满腋芽的茶树茎段灭菌后，在MS+1.5 mg/L 6-BA +0.3mg/L NAA培养基上培养 35d ；
2)、当芽长至5cm时，将其切成长1.5cm的茎段接入MS+1.0mg/L 6-BA + 0.lmg/LNAA培养基上进行增殖；
3)、当增殖的芽苗长至4片叶时，在1/2MS+0.2 mg/L NAA培养基上进行生根培养；
4)、当生根培养的组培苗根长至6cm，平均4条根时，进行炼苗移栽。将组培苗移栽至室外培养30d后，植株成活率为68 %，且植株生长状况较好，叶片翠绿。
[0011]利用本发明的方法构建茶树离体再生体系，组培苗的室外移栽成活率较高，平均达 66.7%o
[0012]以上所述仅为本发明的较佳实施例， 凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵 盖范围。
【权利要求】
1.一种茶树离体再生体系的构建方法，其特征在于:所述茶树离体再生体系的构建是采用带腋芽茎段作为外植体进行培养，而不经过诱导愈伤组织直接成苗；其建立方法具体步骤如下: 1)、将带饱满腋芽的茶树茎段灭菌后，在MS培养基上培养30-35d； 2)、当芽长至3-5cm时，将其切成长1-1.5cm的茎段接入MS增殖培养基上进行增殖； 3)、当增殖的芽苗长至4-5片叶时，在1/2MS生根培养基上进行生根培养； 4)、当生根培养的组培苗根长至5-6cm，平均4-5条根时，进行炼苗移栽。
2.根据权利要求1所述的茶树离体再生体系的构建方法，其特征在于:所述的带腋芽茎段为福鼎大白茶茎段，将其进行培养，腋芽萌发后，向上长叶，向下生根。
【文档编号】A01H4/00GK103609453SQ201310639259
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年12月4日 优先权日:2013年12月4日
【发明者】孙威江, 吴婉婉, 陈志丹, 何碧珠 申请人:福建农林大学