一种马属动物冻精的人工授精方法
【专利摘要】本发明公开了一种马属动物冻精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步骤：发情调控步骤；排卵调控步骤；精液采集步骤；精液检测步骤；精液处理步骤；精液冷冻步骤；人工授精步骤。本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本发明实施时选择进口优良公马作为父本，选择进口优良母马作为母本，选择国产母马作为代孕母马，根据母马生理特点、排卵规律，采用人工授精方法使进口母马孕育其与进口公马的后代，然后经胚胎移植使国产母马代孕。本发明可使每匹供体母马年产有效胚胎6~12枚，鲜胚人工授精成功率可达85%，本发明不需要麻醉和手术，极大地提高了进口优良母马的利用率。
【专利说明】一种马属动物冻精的人工授精方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及马属动物人工授精【技术领域】，特别涉及一种马属动物冻精的人工授精方法。
【背景技术】
[0002]人工授精技术是一项应用于哺乳动物的繁育高新技术。利用人工授精，结合胚胎移植技术，可以开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力，较快地扩大良种畜群，在自然情况下，牛、马等母畜通常一年产I胎，一生繁殖后代仅仅16只左右；猪也不过百头。采用人工授精技术，结合胚胎移植技术则使优良母畜免去了冗长的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次发情、配种和授精，从而能在一定时间内产生较多的后代。精液的冷冻处理可实现一次采精多次使用，进一步节省精液使用量，同时提高种公马利用率。目前在许多畜牧业发达国家人工授精和胚胎移植均已进入产业化发展阶段。在我国，这一技术起步较晚，我国从七十年代开始对胚胎生物工程技术进行研究，八十年代后发展迅速。先后采用胚胎人工授精技术成功对奶牛、波尔山羊进行扩繁。由于各种原因，建国以来我国养马业日渐消退，因此国内马的胚胎人工授精技术也鲜有研究。但是随着现代马术运动的兴起，我国养马业开始复苏，应用胚胎人工授精技术进行良种马匹的扩繁成为改良我国马匹品种以适应现代马术运动的一条捷径。
[0003]由于马属动物的卵巢结构有其独特性，因此导致了马属动物的生理特点及排卵规律有别于其他动物。虽然牛羊等人工授精和胚胎移植技术已经成熟化，但并不适用于马属动物。
【发明内容】
[0004]为了提高进口良种马匹的繁育能力，本发明实施例提供了一种马属动物冻精的人工授精方法。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种马属动物冻精的人工授精方法，其中，所述人工授精方法包括以下步骤:
精液采集步骤:利用假台马模拟母马，采精桶模拟阴道的方法进行人工精液采集； 精液检测步骤:通过显微镜检测镜子活率、畸形率及运动方式等指标；
精液处理步骤:用精液稀释液稀释精液，延长精子在体外存活时间，便于人工授精操作和提高成功率。
[0006]精液冷冻步骤:将用精液稀释液稀释后的精液经22°C、4°C、_196°C降温冷冻密封保存。
[0007]所述精液采集步骤之前还可以进一步包括排卵调控步骤，所述排卵调控步骤为:于供体母马和/或受体母马发情期、卵泡直径> 35mm时静脉注射hCG，使用剂量为1200-1800 单位 / 匹。
[0008]所述精液采集步骤之前还可以进一步包括发情调控步骤，所述发情调控步骤为:于供体母马和/或受体母马黄体生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用剂量为
0.15-0.3mg/ 匹。
[0009]所述精液处理步骤之后还可以进一步包括人工授精步骤，所述人工授精步骤为:将经过处理的精液装入人工授精管内，清洗并擦干供体母马外阴后，将人工授精管送入母马子宫内，将精液送入供体母马子宫。
[0010]所述精液处理步骤之后还可以进一步包括胚胎收集步骤，所述胚胎收集步骤为:将胚胎收集用Y型管一端插入供体马子宫，一端接胚胎营养液，另一端接胚胎收集杯，开启开关使胚胎营养液流入子宫至子宫充盈，用手经肛门轻轻按摩子宫后使胚胎营养液流出子宫经集卵杯。
[0011]所述精液处理步骤中的所述精液稀释液为脱脂奶粉、蛋黄和甘油的混合物。
[0012]所述胚胎收集步骤中的所述胚胎营养液包含以下成分:氯化钠6~10g/L，氯化钾
0.1-0.3 g/L，磷酸氢二钠 f 1.5 g/L，磷酸二氢钾 0.1-0.3 g/L，氯化钙 0.05、.15 g/L，氯化镁0.05、.15 g/L，体积百分比为0.3、.6%的牛血清白蛋白或体积百分比为1%~10%的犊牛血清，青霉素90-110万单位/升，链霉素50-100万单位/升。
[0013]本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:本发明实施时选择进口优良公马作为父本，选择进口优良母马作为母本，选择国产母马作为代孕母马，根据母马生理特点、排卵规律，采用人工授精方法使进口母马孕育其与进口公马的后代，然后经胚胎移植使国产母马代孕。本发明可使每匹供体母马年产有效胚胎6~12枚，鲜胚人工授精成功率可达85%，本发明不需要麻醉和手术，极大地提高了进口优良母马的利用率。同时因精液冷冻可实现一次采精多次使用，节省了精液，也提高了种公马的利用率。
【具体实施方式】
[0014]为了提高进口良种马匹的繁育能力，使进口良种马匹可年产胚胎6-12枚，从而达到快速繁育进口优良马种以适应现代马术运动的需要的目的，本发明提供了一种马属动物冻精的人工授精方法。
[0015]实施例1:
一种马属动物冻精的人工授精方法，人工授精方法包括以下步骤:
精液采集步骤:利用假台马模拟母马，采精桶模拟阴道的方法进行人工精液采集； 精液检测步骤:通过显微镜检测镜子活率、畸形率及运动方式等指标；
精液处理步骤:用精液稀释液稀释精液，延长精子在体外存活时间，便于人工授精操作和提高成功率。
[0016]精液冷冻步骤:将用精液稀释液稀释后的精液经22°C、4°C、_196°C降温冷冻密封保存。
[0017]其中，处理精液用精液稀释液为脱脂奶粉、蛋黄和甘油的混合物。
[0018]人工授精试验:
种公马:欧洲进口良种温血马4匹。
[0019]供体母马:欧洲进口良种温血马10匹。
[0020]受体母马:国产母马120匹。
[0021]试验时间及人工授精方法:采用本发明实施例1的人工授精方法进行人工授精试验。人工授精数量按月统计。
[0022]实验地点:青岛即墨鳌山卫马匹繁育基地。
[0023]试验数据见表1。
[0024]表1每月人工授精数量和怀孕数量统计表
【权利要求】
1.一种马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述人工授精方法包括以下步骤: 精液采集步骤:利用假台马模拟母马，采精桶模拟阴道的方法进行人工精液采集； 精液检测步骤:通过显微镜检测镜子活率、畸形率及运动方式等指标； 精液处理步骤:用精液稀释液稀释精液，延长精子在体外存活时间，便于人工授精操作和提高成功率。
2.精液冷冻步骤:将用精液稀释液稀释后的精液经22°C、4°C、_196°C降温冷冻密封保存。
3.根据权利要求1所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步骤之前还可以进一步包括排卵调控步骤，所述排卵调控步骤为:于供体母马和/或受体母马发情期、卵泡直径> 35mm时静脉注射hCG，使用剂量为1200-1800单位/匹。
4.根据权利要求2所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述精液采集步骤之前还可以进一步包括发情调控步骤，所述发情调控步骤为:于供体母马和/或受体母马黄体生成的第5~14天肌肉注射PGF2 α，使用剂量为0.15-0.3mg/匹。
5.根据权利要求1一3任一所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述精液处理步骤之后还可以进一步包括人工授精步骤，所述人工授精步骤为:将经过处理的精液装入人工授精管内，清洗并擦干供体母马外阴后，将人工授精管送入母马子宫内，将精液送入供体母马子宫。
6.根据权利要求1一3任一所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述精液处理步骤之后还可以进一步包括胚胎收集步骤，所述胚胎收集步骤为:将胚胎收集用Y型管一端插入供体马子宫，一端接胚胎营养液，另一端接胚胎收集杯，开启开关使胚胎营养液流入子宫至子宫充盈，用手经肛门轻轻按摩子宫后使胚胎营养液流出子宫经集卵杯。
7.根据权利要求1-4任一所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述精液处理步骤中的所述精液稀释液为脱脂奶粉、蛋黄和甘油的混合物。
8.根据权利要求1一5任一所述的马属动物冻精的人工授精方法，其特征在于，所述胚胎收集步骤中的所述胚胎营养液包含以下成分:氯化钠6~10g/L，氯化钾0.1-0.3 g/L，磷酸氢二钠广1.5 g/L，磷酸二氢钾0.1-0.3 g/L，氯化钙0.05、.15 g/L，氯化镁0.05、.15g/L，体积百分比为0.3、.6%的牛血清白蛋白或体积百分比为1%~10%的犊牛血清，青霉素90-110万单位/升，链霉素50-100万单位/升。
【文档编号】A61D19/02GK103784217SQ201310678166
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2013年12月13日 优先权日:2013年12月13日
【发明者】丛龙晓, 孙吉胜, 张建军 申请人:青岛德瑞骏发生物科技有限公司, 伊犁德瑞骏发生物科技有限公司, 青岛德瑞鳌澜马术有限公司