一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法
【专利摘要】一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体黄粉虫上经人工培育而成人工虫草。包括以下步骤：(1)虫草菌菌株的筛选；(2)黄粉虫的准备；(3)菌悬液的制作；(4)接种；(5)子座的培育；(6)虫草的收集保存。本发明以黄粉虫为宿主，人工接种冬虫夏草菌株菌悬液，培育而成。接种成功率、接种后的僵化率达65％以上，子实体的长出率达70％以上。从接种到子实体的成熟约55-65天。
【专利说明】一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药用菌栽培【技术领域】，具体涉及一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，尤其涉及一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株制备菌悬液接种到活体黄粉虫上经人工培育而成人工虫草的培育方法。
【背景技术】
[0002]随着人们生活水平的提高和对健康的重视，冬虫夏草及其附属产品成为一个发展迅速的产业。冬虫夏草列为国家二级保护物种，各地政府也出台政策禁挖、限挖，但对冬虫夏草的采挖并未得到遏制。冬虫夏草是我国的一种名贵中药，由于它需要特殊的生长条件，生长期较长，因而在自然界中数量十分稀少，随着环境条件的改变，产量呈逐渐下降趋势，而社会需求越来越大，故十分名贵，价格也不菲，目前市场上达到每千克4万元左右。[0003]虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草(Cordyceps)比较:虫草是名贵的中药材，具有很高的滋补保健价值和药用价值。在我国虫草的种类有200多种，其中应用价值最高的是产于西藏的冬虫夏草和产于长白山的虫草。二者在生物分类上同属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草属。冬虫夏草产自天然，是冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫而形成。黄粉虫虫草是将虫草菌接种于黄粉虫体，经人工培育而成。目前黄粉虫虫草的栽培己经形成规模化。黄粉虫虫草和冬虫夏草药化成分及药理功能都非常相近。研究表明，黄粉虫虫草和冬虫夏草中无机元素种类基本一致，二者硒的含量均较高，分别比富硒抗癌中药黄茂高3.3倍和5.8倍。
[0004]目前，国内北华大学的潘丽梅将黄粉虫幼虫通过接种虫草菌，在一定的温度、湿度、光照等条件下，经过数天的精心培育，成功培育出了黄粉虫虫草，但感染率近为30%，达不到大生产的需求。
[0005]安徽农业大学微生物防治省重点实验室的李春如教授等人利用台湾虫草(Cordyceps formosana)对饲喂昆虫黄粉虫进行感染试验,结果表明:黄粉虫在菌落接触感染、刚蜕皮幼虫的穿刺接种和孢子浓度IXlO5个/ml浸蘸处理下，获得了相对较高的侵染率，分别达到30%，25%和25%，刚蜕皮幼虫一般比深色幼虫组其侵染率较高。
[0006]申请号为200510101348.0，发明名称为“以黄粉虫为寄主的虫草子实体及其培育方法”的专利，其方法是包括菌种制备、对黄粉虫接种感染和出草等培养步骤。本发明以家黄粉虫为宿主，人工接种虫草菌，模拟虫草自然生态环境，人工培育而成。而此发明的菌种是孢子悬浊液，后期的培养是在自然环境下培养，烘干处理采用高温处理，这对虫草的质量和有效成分的影响很大。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种用原产于青藏高原的野生天然冬虫夏草菌株孢子接种到活体黄粉虫上人工培育而成人工虫草的培育方法。
[0008]为实现上述目的，本发明一种人工虫草的培育方法，其特征在于，包括以下步骤:[0009]I)虫草菌菌株的筛选
[0010]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于黄粉虫粉末作为氮源的培养基平板上，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0011]2)黄粉虫的准备
[0012]在无菌操作台内，将10-15龄黄粉虫幼虫用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，置于无菌的容易内通风晾干，作宿主备用；
[0013]3)菌悬液的制作
[0014]将筛选的虫草菌株接种于以黄粉虫粉末作为主要氮源制成的液体培养基中，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天，用高速离散器，以10000r/min，匀浆Imin既得菌悬液；
[0015]4)接种
[0016]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述黄粉虫尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌液；
[0017]5)子座的培育
[0018]将处理后的黄粉虫放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保护至体僵硬；然后将培养僵硬的体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中`培养；
[0019]6)虫草的收集保存
[0020]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
[0021]本发明虫草以黄粉虫为宿主，人工接种菌悬液。接种成功率、接种后的僵化率达85%以上，子实体的长出率达100%以上。从接种到子实体的成熟约50-60天。
【具体实施方式】
[0022]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明:
[0023]本发明中的活体黄粉虫为本公司实验室自主提供。
[0024]本发明黄粉虫虫草培育技术方案:人工培育黄粉虫虫草时，将筛选的虫草菌株接种于以黄粉虫粉末作为主要氮源有机培养基上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分放在液体培养基内制成培养，培养4-5天，用高速离散器打碎菌丝球既得菌悬液，将菌悬液接种于上述黄粉虫尾部或口器，至体直至僵硬。然后将僵硬的黄粉虫体放在适合虫草培养的条件下培养。技术具体方案如下:
[0025]I)虫草菌菌株的筛选
[0026]将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于黄粉虫粉末作为氮源平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫夏草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株；
[0027]2)黄粉虫的准备
[0028]将黄粉虫幼虫于室内培养得虫，用于培育虫草子实体。在无菌操作台内，将活体用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，晾干作宿主；[0029]3)菌悬液的制作
[0030]将筛选的虫草菌株接种于以黄粉虫粉末作为主要作为氮源的培养基平板上，置20°C下培养，待出现大量菌丝后，挑取一部分接种于上述液体培养基内培养，培养4-5天，用高速离散器，以10000r/min，匀浆Imin既得菌悬液；
[0031]4)接种
[0032]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述黄粉虫尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌液；
[0033]5)子座的培育
[0034]将处理后的黄粉虫放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保护至体僵硬；然后将培养僵硬的体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中
培养；
[0035]6)虫草的收集保存
[0036]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温 贮存。
[0037]实施例一:
[0038]以活体黄粉虫为培养基的人工虫草培育方法。
[0039]具体技术方案如下:
[0040](一 )虫草菌菌株的筛选
[0041]1、菌种制作
[0042]选取高产、优质、早熟、原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草子实体，用75%的酒精进行表面消毒，用无菌水清洗数次(一般5-6次)，将冬虫夏草中的虫体去掉，剩余部分放置于培养基中培养。待菌丝布满平板后再纯化。经反复纯化后获得数株母种。
[0043]将母种扩大培养后，置于以黄粉虫粉末作为氮源有机培养基上，于18°C -25°C下培养20-30d，观察生长情况，若见有杂菌污染，应对母种进一步纯化；若无杂菌污染，可继续培养，一个月后即有橙红色子实体产生，说明母种可靠。
[0044]将液体培养基分装于500ml三角瓶中，121 °C，灭菌20分钟，将母种在无菌条件下用接种环接到三角瓶中。接种后置于18_22°C条件下，摇种培养6d左右，待形成均匀小球后用高速分散器高速1000Or/min，处理Imin既得菌悬液。
[0045]2、宿主准备
[0046]将黄粉虫幼虫于室内培养得虫，用于培育虫草子实体。在无菌操作台内，将活体用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗I分钟，晾干作宿主；
[0047]3、接种
[0048]在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述黄粉虫尾部或口器，按
0.1-0.15毫升/只注入菌悬液；
[0049]4、子座的培育
[0050]将处理后的黄粉虫放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保护至体僵硬；然后将培养僵硬的体置于15_25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中
培养；
[0051]5、黄粉虫虫草的收集保存[0052]子座成熟后，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或者为了防止高温破坏虫草中的部分营养物，可采用真空冷冻`干燥后，低温贮存。
【权利要求】
1.一种以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于，包括以下步骡:虫草菌菌株的筛选，黄粉虫的准备，菌悬液的制作，接种，子座的培育，虫草的收集保存等步骤。
2.基于权利要求1所述的以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的虫草菌菌株的筛选，是将原产于青藏高原的野生新鲜冬虫夏草菌株，先接种于黄粉虫粉末作为主要氮源制成的平板生长，待菌丝体长满平板，反复筛选直至获得长势比较快、性状稳定的冬虫复草纯菌株数株，以上述菌株作为本发明的目的菌株。
3.基于权利要求1所述的以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的黄粉虫的准备，是在在无菌操作台内，将10-15龄黄粉虫幼虫用75%酒精消毒6-9分钟左右，用无菌水冲洗5-6次，置于无菌的容易内通风晾干，作宿主备用。
4.基于权利要求1所述的以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的菌悬液的制作:是将筛选的虫草菌株接种于以黄粉虫粉末作为主要氮源制成的培养基平板上，置20°C下培养,待出现大量菌丝后,挑取一部分接种于上述液体培养基内培养,培养4-5天,用高速离散器，以10000r/min,匀衆Imin既得菌悬液。
5.基于权利要求1所述的以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的接种:是在无菌操作台内，用无菌注射器吸取菌悬液注入上述黄粉虫尾部或口器，按0.1-0.15毫升/只注入菌液。
6.基于权利要求1所述的以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的子座的培育:是将处理后的黄粉虫放于无菌的玻璃瓶或者大的玻璃平皿，23°C下保护至体僵硬；然后将培养僵硬的体置于15-25°C、空气相对湿度为85-95%的自然光照的无菌培养室中培养。
7.基于权利要求1所述的`以黄粉虫为载体培养人工虫草的方法，其特征在于所述的虫草的收集保存:是将成熟后子座，放在60°C环境下烘干1-5小时，置阴凉干燥处密封保存，或采用真空冷冻干燥后进行低温贮存。
【文档编号】A01G1/04GK103688760SQ201310728839
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月20日 优先权日:2013年12月20日
【发明者】凌中鑫 申请人:凌中鑫