一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，包括如下步骤：将土沉香种子置于9010型旋风式微型高速样品粉碎机粉碎1min，重复3次，镜检；将镜检合格的土沉香种子用双氧水原液液泡30-60min后，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份，无菌条件下分离种胚并进行培养，获得无菌种胚苗；切取种胚苗茎段，诱导腋芽成苗，再以该成苗的茎段继续增殖，10～12代扩大繁殖茎段苗数量。本发明通过旋风粉碎法进行破壁，降低成本的同时，可以规模化运作，通过双氧水杀菌，促进了种子的发芽，同时利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液，增强了生根的几率，而椰壳基质的添加，提高了成活率。
【专利说明】一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]土沉香又名牙香树、蜜香树，为瑞香科常绿乔木，渐危种。一般生于海拔400米以下，在海南可达1000米。多生于山地雨林或半常绿季雨林中，是中国特有而珍贵的药用植物。近年(2013年)由于常被采取供药用，损伤林木极为严重，仅有零星散生的残存植株，为中国国家II级重点保护野生植物，因此研制一种土沉香快速繁殖方法迫在眉急。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，通过旋风粉碎法进行破壁，降低成本的同时，可以规模化运作，通过双氧水杀菌，促进了种子的发芽，同时利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液，增强了生根的几率，而椰壳基质的添加，提高了成活率。
[0004]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:
[0005]一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，包括如下步骤:
[0006]S1、将土沉香种子置于9010型旋风式微型高速样品粉碎机粉碎lmin，重复3次，镜检；
[0007]S2、将镜检合格的土沉香种子用双氧水原液液泡30_60min后，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份，无菌条件下分离种胚并进行培养，获得无菌种胚苗；
[0008]S3、切取种胚苗茎段，诱导腋芽成苗，再以该成苗的茎段继续增殖，10~12代扩大
繁殖茎段苗数量；
[0009]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液调节土沉香茎段苗的生理与诱导生根，以获得生根苗；
[0010]S5、生根苗先后经温室炼苗、室外移栽，得到成活的土沉香苗。
[0011]S2步骤中所述种胚培养是将种胚接种于1/2MS+NAA5.0mg/L培养基，培养2天后移至1/2MS+体积百分比10~15%椰子水的培养基上培养，其中培养条件为:白天光照8~15h，光强 2000 ~25001ux，温度 25±1°C。
[0012]S3步骤中所述诱导腋芽成苗是将长成的种胚苗茎段按照2个节剪成一段，添加有椰壳基质的1/2MS+NAA5.0mg/L培养基的培养基上培养，培养条件为:光照3000Lux、光照时间 12 ~14h、温度 25±1°C。
[0013]S5步骤中所述温室炼苗是将生根苗置于自然光下锻炼，光照由遮光90%逐步增强，15天时增强至遮光60 %，此时往培养基上加入自来水，24h后取出生根苗移栽。
[0014] 本发明在土沉香组织培养技术的研究过程中，通过以少量土沉香种子为材料，无菌条件下分离种胚培养，获得无菌种胚苗；然后切取土沉香种胚苗茎段，诱导腋芽成苗，多次继代扩大繁殖种苗数量；通过调节土沉香的生理状态，促进土沉香茎段基部形成层的产生，促进细胞分化，诱导生根，突破了土沉香组织培养瓶颈技术；通过栽培附生植物，提高了土沉香苗的移栽成活率,从而完成土沉香组织培养的全部生产技术路线。
【具体实施方式】
[0015]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0016]实施例1
[0017]一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，包括如下步骤:
[0018]S1、将土沉香种子置于9010型旋风式微型高速样品粉碎机粉碎lmin，重复3次，镜检；
[0019]S2、将镜检合格的土沉香种子用双氧水原液液泡30min后，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份，无菌条件下分离种胚，将种胚接种于1/2MS+NAA5.0mg/L培养基，培养2天后移至1/2MS+体积百分比12%椰子水的培养基上培养，其中培养条件为:白天光照10h，光强2000lux，温度25°C，获得无菌种胚苗；
[0020]S3、将长成的种胚苗茎段按照2个节剪成一段，添加有椰壳基质的1/2MS+NAA5.0mg/L培养基的培养基上培养，培养条件为:光照3000Lux、光照时间13h、温度25°C，再以该成苗的茎段继续增殖，10~12代扩大繁殖茎段苗数量； [0021]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液调节土沉香茎段苗的生理与诱导生根，以获得生根苗；
[0022]S5、生根苗将生根苗置于自然光下锻炼，光照由遮光90%逐步增强，15天时增强至遮光60%，此时往培养基上加入自来水，24h后取出生根苗移栽置室外，得到成活的土沉香苗。
[0023]实施例2
[0024]一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，包括如下步骤:
[0025]S1、将土沉香种子置于9010型旋风式微型高速样品粉碎机粉碎lmin，重复3次，镜检；
[0026]S2、将镜检合格的土沉香种子用双氧水原液液泡45min后，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份，无菌条件下分离种胚，将种胚接种于1/2MS+NAA5.0mg/L培养基，培养2天后移至1/2MS+体积百分比10%椰子水的培养基上培养，其中培养条件为:白天光照10h，光强2000lux，温度24°C，获得无菌种胚苗；
[0027]S3、将长成的种胚苗茎段按照2个节剪成一段，添加有椰壳基质的1/2MS+NAA5.0mg/L培养基的培养基上培养，培养条件为:光照3000Lux、光照时间13h、温度24°C，再以该成苗的茎段继续增殖，10代扩大繁殖茎段苗数量；
[0028]S4、利用MS、IBA2.0mg/L、NAA0.2mg/L溶液调节土沉香茎段苗的生理与诱导生根，以获得生根苗；
[0029]S5、生根苗将生根苗置于自然光下锻炼，光照由遮光90%逐步增强，15天时增强至遮光60%，此时往培养基上加入自来水，24h后取出生根苗移栽置室外，得到成活的土沉香苗。[0030]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员 来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、将土沉香种子置于9010型旋风式微型高速样品粉碎机粉碎lmin，重复3次，镜检； 52、将镜检合格的土沉香种子用双氧水原液液泡30-60min后，用无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干水份，无菌条件下分离种胚并进行培养，获得无菌种胚苗； 53、切取种胚苗茎段，诱导腋芽成苗，再以该成苗的茎段继续增殖，10~12代扩大繁殖茎段苗数量； 54、利用MS、IBA2.0mg/L, NAA0.2mg/L溶液调节土沉香茎段苗的生理与诱导生根，以获得生根苗； 55、生根苗先后经温室炼苗、室外移栽，得到成活的土沉香苗。
2.根据权利要求1所述的一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，其特征在于，S2步骤中所述种胚培养是将种胚接种于1/2MS+NAA5.0mg/L培养基，培养2天后移至1/2MS+体积百分比10~15%椰子水的培养基上培养，其中培养条件为:白天光照8~15h，光强 2000 ~25001ux，温度 25±1°C。
3.根据权利要求1所述的一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，其特征在于，S3步骤中所述诱导腋芽成苗是将长成的种胚苗茎段按照2个节剪成一段，添加有椰壳基质的1/2MS+NAA5.0mg/L培养基的培养基上培养，培养条件为:光照3000Lux、光照时间12~14h、温度 25 ± I。。。
4.根据权利要求 1所述的一种土沉香的种胚苗茎段离体快速繁殖方法，其特征在于，S5步骤中所述温室炼苗是将生根苗置于自然光下锻炼，光照由遮光90%逐步增强，15天时增强至遮光60%，此时往培养基上加入自来水，24h后取出生根苗移栽。
【文档编号】A01H4/00GK104026007SQ201410207202
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年5月16日 优先权日:2014年5月16日
【发明者】张帮其, 韦盛军, 周建民, 潘建山 申请人:广西襟联农林科技有限公司