一种蝉花仿生的培养方法
【专利摘要】本发明提出了一种蝉花仿生的培养方法，以蝉花的生态环境和生长规律为依据，采用微生物工程技术、生态学和栽培学的方法，进行蝉花仿生培养栽培技术系统研究，确立蝉花在天然竹林下仿生栽培技术操作规程，建立仿生态体系，从而获得优质蝉花原料。本发明的有益效果是，采用本发明的技术栽培出来的蝉花，蝉花品质与野生蝉花一样，比野生蝉花产量高，同时解决了传统的采用自然基物上培养蝉花只有子座而无虫体的问题，降低了成本，经济效益好。
【专利说明】一种蝉花仿生的培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物领域，特别涉及一种蝉花仿生的培养方法。
【背景技术】
[0002]蝉花是麦角菌科真菌寄生于竹蝉若虫体内形成的复合体，是我国传统的中药材之一。蝉花的研究一直受到人们的关注，国内外对蝉花仅作过一些药物化学和药理研究，尚无人工培养的高科技产品面市。近年来，自然基物上培养蝉花虽已取得成功，但因天然蝉花感染真菌的复杂性，以蝉拟青霉人工培养的孢梗束与天然蝉花可能因菌种数量不同而疗效有差异，即人工培养蝉花缺少虫体而不能完全代替野生蝉花。因此提供一种蝉花培养方法，在提高产量的同时，提高人工培养的蝉花品质就显得尤为重要。
【发明内容】
[0003]为解决上述现有技术的不足，本发明提出了一种蝉花仿生的培养方法，以蝉花的生态环境和生长规律为依据，采用微生物工程技术、生态学和栽培学的方法，进行蝉花仿生培养栽培技术系统研究，确立蝉花在天然竹林下仿生栽培技术操作规程，建立仿生态体系，从而获得优质蝉花原料。解决了传统的采用自然基物上培养蝉花只有子座而无虫体的问题。
[0004]为达到上述目的，本发明的技术方案为:
[0005]一种蝉花仿生的培养方法，包括如下步骤:
[0006]步骤一、采集蝉花:采挖子实体粗壮饱满、可妊部发育明显的野生蝉花完整菌虫复合体，清除子实体表面杂质，备用；
[0007]步骤二、菌种分离、培养:无菌条件下，将步骤一所得子实体先用75%的乙醇进行表面消毒，然后用无菌水冲洗，无菌滤纸吸水，盖朝下，悬挂于广口瓶中，经20_25°C培养，收集孢子后，取出子实体；将孢子和组织块无菌操作接种于由去皮马铃薯150_200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蝉蜕IOgjK 1000ml制成的改良PDA固体培养基上，接种后的广口瓶和培养皿均置于20-25°C室内避光培养；待孢子萌发并形成絮状菌丝体后，无菌条件下用接种锄挑取广口瓶内无污染的菌丝体与培养基一起接种于培养皿内进行纯化培养，得蝉拟青霉菌种；
[0008]步骤三、液体种培养:将纯化菌种接种于改良PDA液体培养基，具体配制方法同PDA固体培养基配制，不加琼脂，于温度25°C，，转速150r/min条件下进行摇床培养5天；
[0009]步骤四、栽培菌种制备:液体菌种+辅助剂，辅助剂为微量元素+水；清水对照；每处理设3个重复；
[0010]步骤五、接种:将步骤四所得菌种接种于自然生长蝉或人工养殖蝉实验区；
[0011]步骤六、栽培管理:接种后定期观察、记录，并进行水、病虫害等其它栽培管理；
[0012]步骤七、采收:当形成棒状子座后进行适时采收。采收蝉花，以子囊果的成熟以菌柄淡黄色为宜，菌柄初变褐为标志，在一般的生产中采收的子囊果要以八分成熟为宜。[0013]进一步的，所述步骤五中，自然生长蝉试验区接种的具体操作为:接种时间4-5月份和8-9月份，在市郊选择蝉多的竹林作为蝉花栽培地，栽培地坡向东南，坡度50-200，郁闭度约0.8，地被有枯枝落叶，腐殖层厚度l_2cm，林中有少量灌木和草本植物混交；将试验区划分成50m2的30个小区进行试验；接种时轻轻拂去林间落叶及表层土，将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在表面，后覆土及落叶，做好时间、数量的记录。
[0014]进一步的，所述步骤五中，人工养殖蝉试验区接种具体操作为:在室内将蝉卵进行孵化，发现有若虫活动时，即可将枝条连同细沙殖放于试验区；在选择市郊蝉少的竹林作为蝉花栽培地，将试验区划分成50m2的30小区进行试验；殖种时间:2年卵一般在9-10月份；当年口一般在6-7月份；在竹林下挖掘深约40-50cm有规律的窄沟；殖完种蝉若虫后盖土20-30cm压实，然后将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在上面后，再覆土 20cm压实，最后在表面覆一层表土及落叶。
[0015]进一步的，所述窄沟的形状为环型、方型、三角型、平行或辐射状。
[0016]相对于现有技术，本发明的有益效果为:
[0017]采用本发明的仿生栽培技术培养出来的蝉花与野生蝉花产品质量相当，但产量高，在自然生长蝉试验区接种蝉花菌种产量为30个/m2 ;在人工养殖蝉试验区接种蝉花菌种产量为70个/m2，而野生蝉花产量为10个/m2。与以自然基物上培养蝉花只有子座而无虫体相比，本发明方法不但产品质量好，而且降低了成本，经济效益好。 【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1为本发明流程框图。
【具体实施方式】
[0019]下面结合附图及【具体实施方式】对本发明方案做进一步详细描述:
[0020]如图1所示，一种蝉花仿生的培养方法，包括如下步骤:
[0021]一、采集蝉花采挖子实体粗壮饱满、可妊部发育明显的野生蝉花完整菌虫复合体，清除子实体表面杂质，备用。
[0022]二、菌种分离、培养子实体表面先用75%的乙醇进行表面消毒，然后用无菌水冲洗，无菌滤纸吸水，无菌条件下操作，盖朝下，悬挂于广口瓶中，经适温培养，收集孢子后，取出子实体；将孢子和组织块无菌操作接种于改良PDA固体培养基(去皮马铃薯150-200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蝉蜕10g，水1000ml)，上，接种后的广口瓶和培养皿均置于20-25°C室内避光培养；观察孢子和组织块中菌丝萌发情况、污染情况和菌落大小；待孢子萌发并形成絮状菌丝体后，无菌条件下用接种锄挑取广口瓶内无污染的菌丝体与少量培养基一起接种于培养皿内进行纯化培养，得蝉拟青霉菌种。见附图1
[0023]三、液体种培养将纯化菌种接种于改良PDA液体培养基上，进行摇床培养。
[0024]四、栽培菌种制备液体菌种+辅助剂。清水对照。每处理设3个重复。
[0025]五、接种
[0026]①自然生长蝉试验区接种技术接种时间4-5月份和8-9份，在市郊选择蝉多的竹林作为蝉花栽培地，栽培地坡向东南，坡度50-200，郁闭度约0.8，地被有枯枝落叶，腐殖层厚度l-2cm，林中有少量灌木和草本植物混交；将试验区划分成50m2的30个小区进行试验。接种时轻轻拂去林间落叶及表层土，将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在表面，后覆土及落叶，做好时间、数量等的记录。
[0027]②人工养殖蝉试验区接种技术
[0028]养殖蝉技术按张志英等[张志英，徐兰玲.金蝉养殖技术.河南农业，2009, (11):53]方法进行蝉的养殖；在室内将蝉卵进行孵化，发现有若虫活动时，即可将枝条连同细沙殖放于试验区；在市郊选择蝉少的竹林作为蝉花栽培地，将试验区划分成50m2的30个小区进行试验。殖种时间一般在9-10月份(2年卵)或6-7月份(当年口)。在竹林下挖掘深约40-50cm有规律的窄沟，如环、方、三角、平行或辐射等形状。殖完种蝉若虫后盖土 20-30cm压实，然后将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在上面后，再覆土 20cm压实，最后在表面覆一层表土及落叶。
[0029]六、栽培管理接种后定期观察、记录，并进行其它栽培管理(水、病虫害等)。
[0030]七、采收当形成棒状子座后进行适时采收。采收蝉花，以子囊果的成熟以菌柄淡黄色为宜，菌柄初变褐为标志，在一般的生产中采收的子囊果要以八分成熟为宜。产量统计结果:
[0031]在自然生长蝉试验区接种蝉花菌种产量为30个/m2 ;在人工养殖蝉试验区接种蝉花菌种产量为70个/m2，而野生蝉花产量为10个/m2。
[0032]以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要 求书所限定的保护范围为准。
【权利要求】
1.一种蝉花仿生的培养方法，其特征在于，包括如下步骤: 步骤一、采集蝉花:采挖子实体粗壮饱满、可妊部发育明显的野生蝉花完整菌虫复合体，清除子实体表面杂质，备用； 步骤二、菌种分离、培养:无菌条件下，将步骤一所得子实体先用75%的乙醇进行表面消毒，然后用无菌水冲洗，无菌滤纸吸水，盖朝下，悬挂于广口瓶中，经20-25°C培养，收集孢子后，取出子实体；将孢子和组织块无菌操作接种于由去皮马铃薯150-200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蝉蜕IOgjK 1000ml制成的改良PDA固体培养基上，接种后的广口瓶和培养皿均置于20-25°C室内避光培养；待孢子萌发并形成絮状菌丝体后，无菌条件下用接种锄挑取广口瓶内无污染的菌丝体与培养基一起接种于培养皿内进行纯化培养，得蝉拟青霉菌种；步骤三、液体种培养:将纯化菌种接种于改良PDA液体培养基，具体配制方法同PDA固体培养基配制，不加琼脂，于温度25°C，，转速150r/min条件下进行摇床培养5天； 步骤四、栽培菌种制备:液体菌种+辅助剂，辅助剂为微量元素+水；清水对照；每处理设3个重复； 步骤五、接种:将步骤四所得菌种接种于自然生长蝉或人工养殖蝉实验区； 步骤六、栽培管理:接种后定期观察、记录，并进行水、病虫害等其它栽培管理； 步骤七、采收:当形成棒状子座后进行适时采收，采收蝉花，以子囊果的成熟以菌柄淡黄色为宜，菌柄初变褐为标志，在一般的生产中采收的子囊果要以八分成熟为宜。
2.如权利要求1所述方法，其特征在于:所述步骤五中，自然生长蝉试验区接种的具体操作为:接种时间4-5月份和8-9月份，在市郊选择蝉多的竹林作为蝉花栽培地，栽培地坡向东南，坡度50-200，郁闭度约0.8，地被有枯枝落叶，腐殖层厚度l-2cm，林中有少量灌木和草本植物混交；将试验区划分成50m2的30个小区进行试验；接种时轻轻拂去林间落叶及表层土，将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在表面，后覆土及落叶，做好时间、数量的记录。
3.如权利要求1所述方法，其特征在于:所述步骤五中，人工养殖蝉试验区接种具体操作为:在室内将蝉卵进行孵化，发现有若虫活动时，即可将枝条连同细沙殖放于试验区；在选择市郊蝉少的竹林作为蝉花栽培地，将试验区划分成50m2的30小区进行试验；殖种时间:2年卵一般在9-10月份；当年口一般在6-7月份；在竹林下挖掘深约40-50cm有规律的窄沟；殖完种蝉若虫后盖土 20-30cm压实，然后将蝉花供试菌+辅助剂均匀洒在上面后，再覆土 20cm压实，最后在表面覆一层表土及落叶。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述窄沟的形状为环型、方型、三角型、平行或辐射状。
【文档编号】A01G1/04GK103975765SQ201410216980
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月22日 优先权日:2014年5月22日
【发明者】陈晔, 樊有赋 申请人:陈晔