一种猕猴桃的增殖继代培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：（1）选材；（2）茎段消毒及芽启动萌发培养；（3）无菌试管苗增殖培养；（4）生根培养；（5）炼苗移栽。本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。
【专利说明】一种猕猴桃的增殖继代培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种猕猴桃的增殖继代培养方法，属于植物学【技术领域】。
【背景技术】
[0002]猕猴桃的茎枝上容易产生不定根，跟上容易产生不定芽，适于猕猴桃繁殖的方式有很多种，如，扦插繁殖、压条繁殖、嫁接繁殖和种子繁殖等。上述繁殖方法具有繁殖周期长、易感染真菌性病害、良种化程度降低，而劣质种苗的使用又导致猕猴桃的果实质量及营养价值降低，同时口感下降，这在一定程度上约束了猕猴桃的大力发展和推广应用。
【发明内容】
[0003]为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种培育周期短、可有效降低猕猴桃的染病几率，提高其果实质量和营养价值的猕猴桃的增殖继代培养方法。
[0004]为了实现上述发明目的，本发明是通过以下技术方案来实现的:
一种猕猴桃的增 殖继代培养方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)选材:选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2-3h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
(2)茎段消毒及芽启动萌发培养:将步骤(1)处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒10-15s，然后用无菌水清洗3-5次,然后用0.1%的升汞灭菌浸泡5-8min，最后用无菌水冲洗3-5次后，用滤纸吸干水分，剪取l-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种3-5外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22°C，光照强度1500— 2000 lx，光照时间14 h / d的条件下，进行15_20d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40-50d后形成无菌试管苗；
(3)无菌试管苗增殖培养:将步骤(2)所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2-3周继代一次，获得大量无菌试管苗；
(4)生根培养:将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25-30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
(5)炼苗移栽:将步骤(4)得到的试管苗首先在培养室适应ld，然后在温室条件下，清水洗涤3-5次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗10-15d后移栽进行常规管理。
[0005]进一步，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良MS +1.0~2.0mgl^BA+l.0~
1.5mgL 1KT + 0.1 ~0.3mgL 1NAA +3.0 ~3.5gL 1Phytagel + 2-3 mgL 1GA3+ 20gL 1 鹿糖,且pH值为5.8。
[0006]更进一步，所述的改良MS包括常量营养兀素、微量营养兀素和有机试剂。
[0007]其中，所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为:硝酸钾1900mg/L ;硫酸铵1650 mg/L ;七水硫酸镁350 mg/L ;二水氯化韩400mg/L ;无水磷酸二氢钾150mg/L ;乙二胺四乙酸二钠35.6 mg/L ;七水硫酸亚铁25.8 mg/L。[0008]所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为:四水硫酸锰20.5mg/L ;硫酸锌9.0mg/L ;硼酸 6.5 mg/L ;碘化钾 0.5mg/L ;钥酸钠 0.3mg/L ;氯化钴 0.05 mg/L，硫酸铜 0.02mg/L,
而所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为:盐酸硫胺素10.0 mg/L ;烟酸1.5 mg/L ；盐酸批B多醇1.5mg/L ;肌醇80.0 mg/L。
[0009]本发明的有益效果是:本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。
【具体实施方式】
[0010]下面将结合具体实施例，详细说明本发明的【具体实施方式】:
在本实施方式中，所有实施例中米用的改良MS均包括常量营养兀素、微量营养兀素和有机试剂，
且所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为:硝酸钾1900mg/L ;硫酸铵1650 mg/L ;七水硫酸镁350 mg/L ;二水氯化钙400mg/L ;无水磷酸二氢钾150mg/L ;乙二胺四乙酸二钠35.6 mg/L ;七水硫酸亚铁25.8 mg/L。
[0011]所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为:四水硫酸锰20.5mg/L ;硫酸锌 g/L ;碘化钾 0.5mg/L ;钥酸钠 0.3mg/L ;氯化钴 0.05 mg/L，硫酸铜 0.02mg/L,
而所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为:盐酸硫胺素10.0 mg/L ;烟酸1.5 mg/L ；盐酸批B多醇1.5mg/L ;肌醇80.0 mg/L。
[0012]实施例1:
一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤:
(1)选材:选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
(2)茎段消毒及芽启动萌发培养:将步骤(1)处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒10s，然后用无菌水清洗3次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡5min，最后用无菌水冲洗3次后，用滤纸吸干水分，剪取l-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种3个外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22°C，光照强度1500—2000 lx，光照时间14 h / d的条件下，进行15d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40d后形成无菌试管苗；
(3)无菌试管苗增殖培养:将步骤(2)所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良 MS +1.0mgL^1BA+1.0mgL^1KT + 0.1mgL^1NAA +3.0gL^phytagel + 2IiigL-1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值为 5.8 ；
(4)生根培养:将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
(5)炼苗移栽:将步骤(4)得到的试管苗首先在培养室适应ld，然后在温室条件下，清水洗涤3次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗IOd后移栽进行常规管理。
[0013]利用实施例1所述的猕猴桃的增殖继代培养方法对猕猴桃的外植体进行增殖培养，增殖继代培养频率为2周继代一次，其新生苗按1:15-18的比例增长，且成活率为94.2%ο
[0014]实施例2:
一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤:
(1)选材:选取生长健壮的基生枝用清水冲洗3h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
(2)茎段消毒及芽启动萌发培养:将步骤(1)处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒15s，然后用无菌水清洗5次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡8min，最后用无菌水冲洗5次后，用滤纸吸干水分，剪取l-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种5外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22°C，光照强度1500—2000 lx，光照时间14 h / d的条件下，进行20d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长,50d后形成无菌试管苗；
(3)无菌试管苗增殖培养:将步骤(2)所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔3周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良 MS +2.0mgL^1BA+1.5mgL_1KT + 0.3mgL_1NAA +3.SgI^phytagel + 3IiigI^1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值为 5.8 ；
(4)生根培养:将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
(5)炼苗移栽:将步骤(4)得到的试管苗首先在培养室适应ld，然后在温室条件下，清水洗涤5次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗15d后移栽进行常规管理。
[0015]利用实施例2所述的猕猴桃的增殖继代培养方法对猕猴桃的外植体进行增殖培养，增殖继代培养频率为2.5周继代一次，其新生苗按1:16-18的比例增长，且成活率为92.6%。
[0016]实施例3:
一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤:
(1)选材:选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
(2)茎段消毒及芽启动萌发培养:将步骤(1)处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒12s，然后用无菌水清洗4次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡6min，最后用无菌水冲洗4次后，用滤纸吸干水分，剪取l-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种4外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22°C，光照强度1500—2000 lx，光照时间14 h / d的条件下，进行18d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，45d后形成无菌试管苗；
(3)无菌试管苗增殖培养:将步骤(2)所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良 MS +1.SmgL^BA+l.2mgL_1KT + 1.2mgL_1NAA +3.2gr1phytagel + 2.5IiigI^1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值为 5.8 ；
(4)生根培养:将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25-30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
(5)炼苗移栽:将步骤(4)得到的试管苗首先在培养室适应ld，然后在温室条件下，清水洗涤4次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗12d后移栽进行常规管理。
[0017]利用实施例3所述的 猕猴桃的增殖继代培养方法对猕猴桃的外植体进行增殖培养，增殖继代培养频率为3周继代一次，其新生苗按1:18-20的比例增长，且成活率为94.5%ο
[0018]本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高达90%以上，不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。
[0019]以上已以较佳实施例公开了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采用等同替换或者等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)选材:选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2-3h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用； (2)茎段消毒及芽启动萌发培养:将步骤(1)处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒10-15s，然后用无菌水清洗3-5次,然后用0.1%的升汞灭菌浸泡5-8min，最后用无菌水冲洗3-5次后，用滤纸吸干水分，剪取l-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种3-5外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22°C，光照强度1500— 2000 lx，光照时间14 h / d的条件下，进行15_20d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40-50d后形成无菌试管苗； (3)无菌试管苗增殖培养:将步骤(2)所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2-3周继代一次，获得大量无菌试管苗； (4)生根培养:将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25-30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽； (5)炼苗移栽:将步骤 (4)得到的试管苗首先在培养室适应ld，然后在温室条件下，清水洗涤3-5次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗10-15d后移栽进行常规管理。
2.根据权利要求1所述的一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良MS +1.0~2.0mgL^1BA+1.0~1.5mgL_1KT + 0.1~0.3mgL_1NAA+3.0 ~3.5gL_1phytagel + 2-3 mgL_1GA3+ 20gL_1 鹿糖,且 pH 值为 5.8。
3.根据权利要求2所述的一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，所述的改良MS包括常量营养兀素、微量营养兀素和有机试剂。
4.根据权利要求3所述的一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为:硝酸钾1900mg/L ;硫酸铵1650 mg/L ;七水硫酸镁350mg/L ;二水氯化钙400mg/L ;无水磷酸二氢钾150mg/L ;乙二胺四乙酸二钠35.6 mg/L ;七水硫酸亚铁25.8 mg/L ο
5.根据权利要求3所述的一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为:四水硫酸锰20.5mg/L ;硫酸锌9.0mg/L ;硼酸6.5 mg/L ;碘化钾0.5mg/L ;钥酸钠0.3mg/L ;氯化钴0.05 mg/L,硫酸铜0.02 mg/L。
6.根据权利要求3所述的一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为:盐酸硫胺素10.0 mg/L ;烟酸1.5 mg/L ;盐酸吡哆醇1.5mg/L ;肌醇 80.0 mg/L ο
【文档编号】A01H4/00GK104012410SQ201410250424
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2014年6月9日
【发明者】赵兰 申请人:赵兰