一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法
【专利摘要】一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取五指毛桃叶片作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽；(3)将所述丛生芽置于MS繁殖培养基中进行繁殖；(4)将丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植到按质量比为泥炭土:珍珠岩＝1:1的基质中，在该基质中生长一个月后移栽大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量五指毛桃的优质种苗，有效解决了五指毛桃的规模化育苗问题。
【专利说明】一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 五指毛桃，又名五爪龙、五指牛奶、土北芪等，来源于桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vahl.的干燥根，为华南地区习用的中药材。五指毛桃味辛、甘，性平，有健脾补肺、利湿舒筋 之功，用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、产后无乳等症，是抗痨丸、喘息 丸、复方川贝止咳糖浆、滋肾宁神丸、脑萎缩丸、宫炎平胶囊、宫炎平分散片、妇炎净片等多 种中成药的重要原料。
[0003] 五指毛桃随着市场需求量的不断增加，自然繁殖缓慢，加上滥采乱挖，致使野生资 源面临枯竭。为确保五指毛桃资源的可持续利用，发展家种是唯一途径。据此，通过现代生 物技术对其进行组织培养快繁技术进行了研究，试图获得大量优质的种苗，为五指毛桃生 产提供种源，以满足生产上的需要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出 大量适合移栽的优良五指毛桃种苗。
[0005] 本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种五指毛桃的组织培养快速繁殖方 法，包括以下步骤：
[0006] (1)外植体的选择与消毒：取五指毛桃叶片作为外植体，依次用5%洗洁精水溶液 浸泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了 2-3滴吐温-20的100毫升0. 1%升汞消 毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，所述无菌水为 经高压灭菌的蒸馏水，
[0007] (2)叶片分化获得丛生芽诱导培养：将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基 中，在培养温度为23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下 培养30天，叶片分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 1-0. 5mg/L 的 NAA、0. 1-0. 5mg/L 的 2, 4-D、25-30g/L 蔗糖和 3. 8-4. 8g/L 的琼脂，培养基的 pH 值为 5. 8，
[0008] (3)丛生芽繁殖培养：将步骤（2)中得到的丛生芽置于MS繁殖培养基中，在培养 温度23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得 到健壮植株，其中MS繁殖培养基中含0. 1-0. 5mg/L的IAA、0. 1-0. 5mg/L的KT、25-30g/L蔗 糖和3. 8-4. 8g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8，
[0009] (4)无菌苗生根培养：将步骤（2)中得到的丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培 养基中，在培养温度23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条 件下培养40天得到带根的完整植株，其中1/2MS生根培养基中含0. 5-1. 5mg/L的IBA、 0· 1-0. 5mg/L 的 NAA、25-30g/L 蔗糖和 3. 8-4. 8g/L 的琼脂，培养基的 pH 值为 5. 8，
[0010] (5)炼苗与移栽：步骤（4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶 盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即 移栽到按质量比为泥炭土：珍珠岩=1:1的基质中，在该基质中生长一个月后移栽大田。移 栽后一个星期内，每天早8点到晚6点喷雾3-5次，每次lOmin，此后每天早8点、晚6点各 喷雾1次，每次l〇min ;移栽时的温度条件为20-28°C，相对湿度75-80%，遮阳率为75%。 [0011] 本发明的突出优点在于：
[0012] (1)通过生物技术对五指毛桃进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可 供大田栽培的五指毛桃幼苗，显著提高了五指毛桃种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模 化生产，满足生产上的需要。
[0013] (2)在MS繁殖培养基中添加0. 1-0. 5mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化；添 加浓度为〇. 1-0. 5mg/L的生长激素吲哚-3-乙酸IAA可促进丛生芽的生长；
[0014] 在1/2MS生根培养基上组合使用浓度为0. 5-1. 5mg/L的吲哚丁酸IBA和 0. 1-0. 5mg/L的生长素萘乙酸NAA，可获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后可直接移栽 到泥炭土 +珍珠岩（1:1)的基质。
[0015] (3)采用本发明所述的培养方法，得到的单芽增殖系数达到5-8倍，获得的组培苗 生根率达到100%，每株平均带6-8个根，移栽泥炭土 +珍珠岩（1:1)的基质中活率在94% 以上；快速、便捷、高效地进行五指毛桃组织培养，实现五指毛桃组培种苗的规模化生产。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0017] -种五指毛桃的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0018] (1)外植体的选择与消毒：取五指毛桃叶片作为外植体，依次用5%洗洁精水溶液 浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了 2-3滴吐温-20的100毫升0. 1%升汞消 毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水 为经高压灭菌的蒸馏水，
[0019] (2)叶片分化获得丛生芽诱导培养：将步骤⑴得到的外植体接种到MS培养 基中，在培养温度为23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条 件下培养30天，叶片分化后获得丛生芽，其中MS培养基中添加不同浓度的6-BA、NAA和 2, 4-D (表1)，30g/L蔗糖和4. Og/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8,数据分析发现，6-BA对 五指毛桃丛生芽诱导具有极显著影响，NAA对五指毛桃丛生芽诱导具有显著影响，2, 4-D对 丛生芽的诱导影响不显著。根据丛芽数确定的最适培养基激素浓度为1. 〇mg/L的6-BA、 0· 3mg/L 的 NAA 和 0· 5mg/L 的 2, 4-D。
[0020] 表1五指毛桃初代诱导培养基筛选结果
[0021]
【权利要求】
1. 一种五指毛桃组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤： (1) 外植体的选择与消毒：取五指毛桃叶片作为外植体，依次用5%洗洁精水溶液浸 泡5-10min、线状自来水冲洗10-15min、添加了 2-3滴吐温-20的100毫升0. 1%升汞消毒 8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，所述无菌水为经 高压灭菌的蒸馏水， (2) 叶片分化获得丛生芽诱导培养：将步骤（1)得到的外植体接种到MS培养基中，在 培养温度为23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养30 天，叶片分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0. 5-1. 5mg/L的6-BA、0. 1-0. 5mg/L的NAA、 0. 1-0. 5mg/L 的 2, 4-D、25-30g/L 蔗糖和 3. 8-4. 8g/L 的琼脂，培养基的 pH 值为 5. 8， (3) 丛生芽繁殖培养：将步骤（2)中得到的丛生芽置于MS繁殖培养基中，在培养温度 23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健 壮植株，其中MS繁殖培养基中含0. 1-0. 5mg/L的IAA、0. 1-0. 5mg/L的KT、25-30g/L蔗糖和 3. 8-4. 8g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8， (4) 无菌苗生根培养：将步骤（3)中得到的丛生芽切成单芽置于1/2MS生根培养基中， 在培养温度23-26°C，光照强度1400-20001ux，光照时间为10-12小时/天的条件下培养40 天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0. 5-1. 5mg/L的IBA、0. 1-0. 5mg/L的NAA、 25-30g/L蔗糖和3. 8-4. 8g/L的琼脂，培养基的pH值为5. 8， (5) 炼苗与移栽：步骤（4)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在 瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基，立即移栽 到按质量比为泥炭土 ：珍珠岩=1:1的基质中，在该基质中生长一个月后移栽大田。
【文档编号】A01H4/00GK104106468SQ201410298080
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年6月26日 优先权日:2014年6月26日
【发明者】李林轩, 韦坤华, 吴庆华, 王晓峰, 李翠, 韦莹, 王一诺, 缪剑华, 林伟 申请人:广西壮族自治区药用植物园