一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法
【专利摘要】本发明涉及一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，属于藻类繁育【技术领域】；包括种藻的采集和运输、种藻的暂养、种藻的预处理、生殖托的分离、诱导成熟、幼苗培育六个步骤，本发明方法改变传统将生殖托连同藻体一起养殖的方法，将生殖托分离成单个或单丛后再进行促熟培育，针对性更强，有利于生殖托的同步成熟，有利于精卵的大量集中排放，雌、雄生殖托可达到100%成熟、排卵、排精，减少了源于藻体的污染，减少了种藻浪费，提高了受精率和出苗率，幼苗生长速度快，成活率高，且方法简单。
【专利说明】一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，具体涉及一种 将雷州马尾藻未成熟的生殖托分离，在一定条件下培养，实现雷州马尾藻雌雄生殖托同步 成熟，采集受精卵育苗的方法，属于藻类繁育【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 雷州马尾藻/eizAoweflse Tseng et Lu (1987)是我国的褐藻马尾藻 属的特有品种，藻体大型，生长快，主要分布在我国广东和海南海域，生长在低潮带及潮下 带岩石上。雷州马尾藻目前主要投喂给养殖鲍鱼食用，或用于提取褐藻胶、甘露醇和碘等 的原料，藻体干燥处理后还可生产饲料或饲料添加剂；另外该藻还具有开发功能食品、保健 品、化工产品、医药产品，用于生态修复、水质净化等的应用前景。近几年，人类活动对海洋 环境造成了较大破坏，海洋环境质量下降，海藻场日趋衰退，而作为重要工业原料的褐藻胶 需求量不断增加，依靠自然生长的藻场资源，已经不能满足人们的需求。目前，雷州马尾藻 的天然资源也因受到自然或人为因素地影响而逐年减少，开展人工养殖已迫在眉睫。
[0003] 种苗生产是制约规模化人工养殖的关键环节，而集中采集大量健康受精卵是育苗 的第一步。目前对有关羊栖菜、鼠尾藻、铜藻、瓦氏马尾藻、硇洲马尾藻、莫氏马尾藻等马尾 藻属种类的育苗研究较多，国内对雷州马尾藻的研究也已经展开，除了对雷州马尾藻形态 结构、分类地位和分布的研究外，还对其育苗中杂藻防治及雌雄比、密度对其幼孢子体生长 的影响进行了研究，而关于诱导雷州马尾藻生殖托成熟育苗的方法未见报道。
[0004] 生殖托作为雷州马尾藻的有性繁殖器官，其生长发育的好坏，直接关系到精卵排 放的数量与质量，从而影响繁殖的结果。目前马尾藻规模化繁育采集天然成藻进行采苗时， 通常藻体不予处理，容易污染幼苗；此外马尾藻存在多次放散精卵的特点，而生产中往往在 种藻第一次放散后便将种藻捞出，致使单位质量种藻的产苗率低，并造成大量种藻资源的 浪费。所以，开展离体生殖托诱导同步成熟育苗可避免以上弊端，具有重要的实践意义。
[0005] 申请号为201310148775. 9的"一种瓦氏马尾藻人工苗种的繁育方法"的专利解决 的是繁育瓦氏马尾藻的人工苗种的问题。该方法采回的藻体雌、雄体数量难以确定，难以规 模化育苗，同时暂养时间比较长，用水量大，管理不方便，幼体受光不均匀，并容易被污染。 申请号为201310296487. 8的"一种瓦氏马尾藻组织培养育苗的方法"解决的是瓦氏马尾藻 无性繁殖育苗的问题。无性繁殖产生的子代不存在遗传变异或变异较小，而有性繁殖使个 体的基因发生变异。
【发明内容】
[0006] 本发明旨在提供一种诱导雷州马尾藻生殖托同步成熟的育苗方法，将雷州马尾藻 未成熟的生殖托分离，在一定条件下，于过滤海水中培养，实现雷州马尾藻雌雄生殖托同步 发育、成熟及精卵集中排放，促熟、受精率可达100%。收集刚长出乳突状假根、自然脱落的受 精卵，在一定条件下培育，提高幼苗的生长速度及成活率。
[0007] 为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是： 一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮 低潮期间采集已形成生殖托、健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度较一致的雌雄种藻，装入整理 箱，采用湿运法运输至目的地。
[0008] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径 50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温20-22 °C，盐度26-28，光照强度介于0-60 μ mol · nT2s4之间，充气使水呈沸腾、翻滚状，暂养3-7天。
[0009] (3)种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
[0010] (4)生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并 用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛（3-5 个纯生殖托)。
[0011] (5)诱导成熟：在温度23°C?30°C、光照强度6(Γ160 μ--ο? .πιΛ-1、海水盐度26?34 范围内，于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L: 12D， 每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养6-20天，雌、雄 生殖托100%成熟、排卵、排精。
[0012] (6)育苗：收集步骤（5)中自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度 20-30°C，盐度26-34,光照强度80 μ mol · πιΛ-1，光周期12L : 12D的条件下，静置培养，每天 定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得体长达 7. 1-8. 4mm，具有2-3个藻叶的幼苗。
[0013] 与现有技术相比，本发明具有以下优点： (1)本发明方法改变传统将生殖托连同藻体一起养殖的方法，将生殖托分离成单个或 单丛，雌、雄生殖托混合诱导成熟，提高了生殖托的成熟度，使精卵大量集中放散，减少了藻 体给采苗带来的污染，减少了对种藻资源的浪费。
[0014] (2)本发明方法通过诱导离体的雌、雄生殖托成熟、排放精卵，针对性更强，有利于 生殖托的同步成熟，使雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精，排卵量达13个/mm 2,受精率达 100%。提高了受精率与出苗率。
[0015] (3)本发明方法在人工控制条件下收集刚长出乳突状假根、自然脱落的幼孢子 体进行培育，幼孢子体生长迅速，培养18天，幼苗长度达7-8. 5mm ;成活率高，成活率达 92%-100%。
[0016] (4)本发明方法不受自然条件、气候变化的影响，可根据需要控制生殖托的成熟， 获得人工苗种。
[0017] (5)该方法操作简单，成本低廉，适合规模化生产。
【具体实施方式】
[0018] 下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并 不限制本发明的范围。
[0019] 实施例1 一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低 潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿运 法运输至目的地。
[0020] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温20°C，盐度26,光照强度60 μ mol · mlT1之间，充 气使水呈沸腾、翻滚状。
[0021] (3)种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
[0022] (4)生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并 用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛 (5)促熟培育：在温度30°C、光照强度60 μ mol · πΓ2^、海水盐度34范围内，于光照培 养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L: 12D，每天定时更换一 次培养液，并定时摇动培养液3次。培养20天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
[0023] (6)育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度30°C，盐度26,光照 强度80 μ mol ?πΓΥ1，光周期12L :12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定 时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得体长达7. 5mm，具有2个藻叶的幼 苗，幼苗成活率92%。
[0024] 实施例2 一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮 低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿 运法运输至目的地。
[0025] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22°C，盐度28,光照强度10 μ mol ?πΓ2,之间，充气 使水呈沸腾、翻滚状。
[0026] (3)种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
[0027] (4)生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并 用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
[0028] (5)促熟培育：在温度23°C、光照强度120 μ mol 海水盐度26范围内，于 光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L: 12D，每天定时 更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养12天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
[0029] (6)育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度23°C，盐度30,光照 强度80 μ mol ?πΓΥ1，光周期12L :12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定 时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得体长达8. 5mm，具有3个藻叶的幼 苗，幼苗成活率100%。
[0030] 实施例3 一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮 低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿 运法运输至目的地。
[0031] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22°C，盐度28,光照强度50 μ mol · mlT1之间，充 气使水呈沸腾、翻滚状。
[0032] (3)种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
[0033] (4)生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并 用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
[0034] (5)促熟培育：在温度27°C、光照强度80 μ mol 海水盐度30范围内，于光 照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L: 12D，每天定时更 换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养15天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
[0035] (6)育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度27°C，盐度34,光照 强度80 μ mol ?πΓΥ1，光周期12L :12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定 时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得体长达8mm，具有2个藻叶的幼苗， 幼苗成活率98%。
[0036] 实施例4 一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮 低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿 运法运输至目的地。
[0037] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温22°C，盐度28,光照强度60 μ mol · mlT1之间，充 气使水呈沸腾、翻滚状。
[0038] (3)种藻的预处理：用过滤海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物。
[0039] (4)生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并 用洁净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛。
[0040] (5)促熟培育：在温度30°C、光照强度120 μ mol ?πΓ2。1、海水盐度34范围内，于 光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合、静置培养，光周期设定为12L: 12D，每天定时 更换一次培养液，并定时摇动培养液3次。培养6天，雌、雄生殖托100%成熟、排卵、排精。
[0041] (6)育苗：收集自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，在温度20°C，盐度26,光照 强度80 μ mol ?πΓΥ1，光周期12L :12D的条件下，静置培养，每天定时更换一次培养液，并定 时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得体长达7. 8mm，具有2个藻叶的幼 苗，幼苗成活率100%。
[0042] 实施例5 一种诱导雷州马尾藻生殖托成熟的方法，包括如下步骤： (1)雷州马尾藻种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮 低潮期间采集发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度均匀一致的雌雄种藻，装入整理箱，采用湿 运法运输至目的地。
[0043] (2)种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别暂养在用孔径50 μ m滤网过滤的海水中，暂养条件：水温21°C，盐度26,光照强度30 μ mol · mlT1之间，充 气使水呈沸腾、翻滚状。
【权利要求】
1. 一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特征在于：包括如下步 骤： (1) 种藻的采集和运输：在雷州马尾藻尚不成熟的冬季或春季，选择大潮低潮期间采 集种藻，装入整理箱，采用湿运法运输至目的地； (2) 种藻的暂养：运回的雷州马尾藻种藻，先将雌、雄藻体分别在用孔径50 μ m滤网过 滤的海水中暂养； (3) 种藻的预处理：用经过50 μ m滤网过滤的海水清洗藻体表面，除去杂藻和附着物； (4) 生殖托的分离：将预处理后的种藻先用消毒刀片分别切下雌、雄生殖托枝，并用洁 净的毛笔刷除生殖托表面的附着物，再用消毒刀片将生殖托分离成单个或单丛（3-5个纯 生殖托）； (5) 诱导成熟：于光照培养箱中将离体的雌雄生殖托1:1混合，静置培养，光周期设定 为12L: 12D，每天定时更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，培养液采用50 μ m滤网过 滤、煮沸冷却后的海水，每次摇动〇. 5分钟，培养6-20天，雌、雄生殖托成熟、排卵、排精； (6) 育苗：收集步骤（5)中自然脱落、刚长出乳突状假根的受精卵，静置培养，每天定时 更换一次培养液，并定时摇动培养液3次，每次摇动0. 5分钟，培养18天，获得幼苗。
2. 根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其 特征在于：步骤（1)所述的种藻发育健壮、杂藻少、侧枝多、成熟度较一致，并且雄生殖托长 7_15mm，雌生殖托长4_5mm。
3. 根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其 特征在于：步骤（2)所述的暂养条件是指水温20-22°C，盐度26-28,光照强度介于0-60 μ mol · nr2。之间，充气使水呈沸腾、翻滚状，暂养时间为从运回实验室直至进行种藻预处 理，3-7天。
4. 根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特 征在于：步骤（5)所述的静置培养是指在温度23°C?30°C、光照强度6(Γ160 μ mol 海水盐度26?34条件下培养。
5. 根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特 征在于：步骤（5)所述的每天定时更换一次培养液的时间为早上9-10点；每天定时摇动培 养液的时间为11 : 30、15 : 30、19 : 30;雌、雄生殖托成熟、排精、排卵率达100%，排卵量 达13个/mm2,受精率达100%。
6. 根据权利要求1所述的一种诱导雷州马尾藻离体生殖托同步成熟的育苗方法，其特 征在于：步骤（6)所述的每天定时更换一次培养液的时间为早上9-10点；每天定时摇动培 养液的时间为11 : 30、15 : 30、19 : 30;培养条件是指温度20-30°C，盐度26-34,光照强 度40-120 μ mol ιΛ-1，光周期12L:12D，幼苗体长达7. 1-8. 4mm，具有1-3个藻叶。
【文档编号】A01G33/00GK104115738SQ201410365018
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年7月29日 优先权日:2014年7月29日
【发明者】赵素芬, 孙会强 申请人:广东海洋大学