一种大叶白蜡的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种大叶白蜡的快速繁殖方法，包括外植体的消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽。本发明的大叶白蜡组培方法操作简便，生长周期短，成活率高，遗传性状稳定，可以短期内获得大量的制药原料。
【专利说明】一种大叶白蜡的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及大叶白蜡组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]大叶白腊/7Taffiericaaa ,又名花曲柳,木犀科柊属,落叶乔木,喜光,耐寒,对土壤要求不严。产黄河流域各省和东北三省。生山坡、河岸、路旁，海拔1500m以下。俄罗斯、朝鲜也有分布。木材硬而致密，为制家具的好材料。树生长较快，可用行道树，种子油供制肥皂用。树皮含有苦芩甙、丁香甙、槲皮素，鞣质等可做药用，清肝明目，收敛止痢。主治风毒赤眼，慢性痢疾。目前市场上对大叶白蜡的需求量很大，大叶白蜡主要采用常规种植方法，使用组培技术对其进行快繁，可以显著缩短周期，保持遗传稳定性，满足市场的需要。
[0003]
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题是提供一种大叶白蜡的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的大叶白蜡增殖系数高，成活率高，遗传性状稳定，可以在短期内大规模提供大叶白蜡幼苗。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍。灭菌处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为WPM +ΝΑΑ0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x，诱导出来的芽放入增殖培养基 WPM+NAA0.2mg/L+TDZ0.3mg/L+ 硫代硫酸钠，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L，培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%。最后将生根试管苗的玻璃瓶置于培养室自然光下打开瓶口练苗5d，然后小心取出试管苗，洗净根部培养基，放入0.2%的多菌灵中浸泡5d，栽植于珍珠岩:泥炭土 =2:1的基质中培养。
[0005]采用本发明制备的大叶白蜡成活率为95%，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0007]实施例1
取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍，灭菌处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为DKW+NAA0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+NAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+ 硫代硫酸钠，附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L，培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%，最后将长约5cm试管苗进行炼苗移栽，大叶白蜡成活率为90%。
[0008]实施例2
取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍，灭菌处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为B5+NAA0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+NAA0.2mg/L+TDZ0.4mg/L+ 硫代硫酸钠，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L，培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%，最后将长约5cm试管苗进行炼苗移栽，大叶白蜡成活率为92%。
[0009]实施例3
取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍，灭菌处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为DKW+NAA0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+NAA0.15mg/L+TDZ0.4mg/L+ 硫代硫酸钠，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L，培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%，最后将长约5cm试管苗进行炼苗移栽，大叶白蜡成活率为93%。
[0010]实施例4
取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍，灭菌处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为B5+NAA0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x，诱导出来的芽放入增殖培养基WPM+NAA0.lmg/L+TDZ0.4mg/L+ 硫代硫酸钠，附加蔗糖 30g/L,琼脂 6.5g/L，PH5.8，光照40001x，增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L，培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%，最后将长约5cm试管苗进行炼苗移栽，大叶白蜡成活率为90%。
【权利要求】
1.一种大叶白蜡的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得、芽的诱导、芽的增殖、生根诱导、野外炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取大叶白蜡的带芽茎段，按照常规的消毒方法对其进行消毒处理； (2)将步骤(1)消毒处理过的大叶白蜡带芽茎段接入培养基配方为DKW/WPM/B5+NAA0.5mg/L+6-BAlmg/l诱导培养基中进行芽诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照 40001x ； (3)取步骤(2)诱导出来的芽接入增殖培养基WPM+NAA0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L+硫代硫酸钠，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照40001x ； (4)取步骤(3)增殖培养出来的丛生芽放入生根培养基WPM+NAA0.lmg/L ； (5)取步骤(4)生根后的大叶白蜡试管苗先进行室内炼苗培养，然后移栽到大田进行培养。
2.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述大叶白蜡无菌芽的获得为，取大叶白蜡带芽茎段，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污溃，流水冲洗lh，超净工作台上75%酒精处理30s，氯化汞处理15min，无菌水冲洗5遍。
3.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)诱导培养基采用了三种培养基DKW、WPM、B5筛选其诱导效果。
4.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)增殖培养基WPM+NAA0.1-0.2mg/L+TDZ0.2-0.4mg/L中附加了硫代硫酸钠，能克服苗在增殖培养过程中褐化现象的出现。
5.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(4)中的生根培养条件为蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光照80001x，湿度70_80%。
6.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中大叶白蜡的炼苗培养方法为将生根试管苗的玻璃瓶置于培养室自然光下打开瓶口练苗5d，然后小心取出试管苗，洗净根部培养基，放入0.2%的多菌灵中浸泡5d,栽植于珍珠岩:泥炭土=2:1的基质中培养。
【文档编号】A01H4/00GK104255452SQ201410449789
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司