一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种大叶白蜡植株再生的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养、炼苗移栽。采用本发明的大叶白蜡组培诱导率高，再生率高，且生长快速，遗传稳定性好，可以短期内获得大量的大叶白蜡幼苗。
【专利说明】 一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及大叶白蜡组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]大叶白腊/7Tarizw1Samericana L var juglandifolia 又名花曲柳,木犀科涔属，落叶乔木，喜光，耐寒。对土壤要求不严。产黄河流域各省和东北三省。生山坡、河岸、路旁，海拔1500m以下。俄罗斯、朝鲜也有分布。木材硬而致密，为制家具的好材料。树生长较快，可用行道树；种子油供制肥皂用。树皮含有苦芩甙、丁香甙、槲皮素，鞣质等可做药用，清肝明目，收敛止痢。主治风毒赤眼，慢性痢疾。目前市场上对大叶白蜡的需求量很大，大叶白蜡主要采用常规种植方法，使用组培技术对其进行快繁，可以显著缩短周期，保持遗传稳定性，满足市场的需要。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种大叶白蜡的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的大叶白蜡组培诱导率高，再生率高，且生长快速，遗传稳定性好，可以短期内获得大量的大叶白蜡幼苗。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取大叶白蜡幼嫩叶片，在含抑菌剂的洗洁精中浸泡15min，流水冲洗20min，超净工作台上1%高锰酸钾处理lOmin，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的大叶白蜡叶片接入培养基为PDA+2，4-D4.0mg/L+6-BA0.2mg/l+VC5.0mg/1诱导培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照15001x，温度21 ± I °C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基改良PDA+6-BA0.3-0.5mg/L+TDZ0.1-0.5mg/L,附加蔗糖40g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照30001x，温度23土 1°C，分化培养出来的大叶白蜡芽苗放入生根培养基 1/2⑶+ΝΑΑ0.01-0.02mg/L,附加蔗糖 20g/L,琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照 60001x,温度
23± 1°C,将生长良好、植株健壮根系发达的试管苗，打开瓶盖，洗去根部培养基，栽植于泥炭土:锯末=2:1的基质中，基质使用高压灭菌锅121°C高压灭菌20min，浇足水后覆盖聚乙烯膜小拱棚，放入温室，湿度保持在90%。
[0005]采用本发明制备的大叶白蜡成活率高，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取大叶白蜡幼嫩叶片，在含抑菌剂的洗洁精中浸泡15min，流水冲洗20min，超净工作台上1%高锰酸钾处理lOmin，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的大叶白蜡叶片接入培养基为PDA+2，4-D4.0mg/L+6-BA0.2mg/l+VC5.0mg/l诱导培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照15001x，温度21 土 1°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基改良 PDA+6-BA0.3mg/L+TDZ0.lmg/L,附加蔗糖 40g/L，琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照30001x，温度23土1°C，分化培养出来的大叶白蜡芽苗放入生根培养基1/2⑶+NAA0.0lmg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照60001x，温度23± I°C，将生长良好、植株健壮根系发达的试管苗，打开瓶盖，洗去根部培养基，栽植于泥炭土:锯末=2:1的基质中，基质使用高压灭菌锅121°C高压灭菌20min，浇足水后覆盖聚乙烯膜小拱棚，放入温室，湿度保持在90%，成活率89%。
[0008]实施例2
取大叶白蜡幼嫩叶片，在含抑菌剂的洗洁精中浸泡15min，流水冲洗20min，超净工作台上1%高锰酸钾处理lOmin，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的大叶白蜡叶片接入培养基为PDA+2，4-D4.0mg/L+6-BA0.2mg/l+VC5.0mg/1诱导培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照15001x，温度21 ± I °C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基改良 PDA+6-BA0.4mg/L+TDZ0.3mg/L,附加蔗糖 40g/L，琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照30001x，温度23土 1°C，分化培养出来的大叶白蜡芽苗放入生根培养基1/2⑶+ΝΑΑ0.02mg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照60001x，温度23土 1°C，将生长良好、植株健壮根系发达的试管苗，打开瓶盖，洗去根部培养基，栽植于泥炭土:锯末=2:1的基质中，基质使用高压灭菌锅121°C高压灭菌20min，浇足水后覆盖聚乙烯膜小拱棚，放入温室，湿度保持在90%，成活率90%。
[0009]实施例3
取大叶白蜡幼嫩叶片，在含抑菌剂的洗洁精中浸泡15min，流水冲洗20min，超净工作台上1%高锰酸钾处理lOmin，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的大叶白蜡叶片接入培养基为PDA+2，4-D4.0mg/L+6-BA0.2mg/l+VC5.0mg/l诱导培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照15001x，温度21 土 1°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基改良 PDA+6-BA0.5mg/L+TDZ0.5mg/L,附加蔗糖 40g/L，琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照30001x，温度23土1°C，分化培养出来的大叶白蜡芽苗放入生根培养基1/2⑶+ΝΑΑ0.02mg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照60001x，温度23± I°C，将生长良好、植株健壮根系发达的试管苗，打开瓶盖，洗去根部培养基，栽植于泥炭土:锯末=2:1的基质中，基质使用高压灭菌锅121°C高压灭菌20min，浇足水后覆盖聚乙烯膜小拱棚，放入温室，湿度保持在90%，成活率88%。
【权利要求】
1.一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取大叶白蜡的幼嫩叶片，对其进行消毒处理； (2)将步骤(I)消毒处理过的大叶白蜡叶片接入培养基为PDA+2，4-D4.0mg/L+6-BA0.2mg/l+VC5.0mg/1诱导培养基中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂6.0g/L, PH5.83，光照 15001x，温度 21±1°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入分化培养基改良PDA+6-BA0.3-0.5mg/L+TDZ0.1-0.5mg/L，附加蔗糖 40g/L，琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照 30001x，温度 23±1°C ; (4)取步骤(3)分化培养出来的大叶白蜡芽苗放入生根培养基1/2⑶+ΝΑΑ0.01-0.02mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 6.0g/L, PH5.83，光照 60001x，温度 23±1°C ; (5)取步骤(4)生根后的大叶白蜡试管苗进行炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述大叶白蜡无菌叶片的获得为，取大叶白蜡幼嫩叶片，在含抑菌剂的洗洁精中浸泡15min,流水冲洗20min,超净工作台上1%高猛酸钾处理1min,无菌水冲洗5遍。
3.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)诱导培养基加入了VC，可以防止愈伤组织的褐化。
4.按照权利要求1所述的一种大叶白蜡再生植株的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中大叶白蜡的炼苗方法为将生长良好、植株健壮根系发达的试管苗，打开瓶盖，洗去根部培养基，栽植于泥炭土:锯末=2:1的基质中，基质使用高压灭菌锅121 °C高压灭菌20min，浇足水后覆盖聚乙烯膜小拱棚，放入温室，湿度保持在90%。
【文档编号】A01H4/00GK104255469SQ201410463155
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司