一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法
【专利摘要】本发明公开了一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下：（1）选取苗龄28-35d、苗高3-6cm的沼泽小叶桦组培生根苗；（2）将组培生根苗的茎段切成0.2-0.3cm的小段得到外植体；（3）将外植体接种于脱分化培养基中培养4-7d进行脱分化，形成愈伤组织，培养温度为23-27℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为40-60umol/m2·s；（4）将愈伤组织转入再分化培养基中培养7-10d，培养温度为23-27℃，光照时间为12-14h/d，光照强度为40-60umol/m2·s。本发明可为沼泽小叶桦的突变体筛选研究提供大量胚性愈伤组织作为基础材料，对沼泽小叶桦的育种研究具有促进作用。
【专利说明】
一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养【技术领域】，具体是一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法。
【背景技术】
[0002]沼泽小叶桦为桦树科桦木属小叶桦的新变种，是原产于新疆阿勒泰县内朗河下游的特有种，是极为稀有和濒临绝灭的温带落叶阔叶树种，国家二级稀有濒危植物。高3至4米落叶小乔木或直立大灌木，耐寒、耐旱、耐盐碱，是盐碱地造林绿化的优良树种。
[0003]目前，关于沼泽小叶桦的引种栽培、嫩枝扦插繁殖、利用组培技术进行种苗快繁的研究已有报道。有关利用沼泽小叶桦试管苗茎段为外植体，诱导胚性细胞发生技术的研究尚未见报道。胚性细胞是具有全能性表达能力的一种细胞，因其数量庞大，以其作为单位进行诱变处理，则可获得数量多，种类多的突变植株，对于进行突变体筛选具有重要的意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种为进行沼泽小叶桦突变体筛选提供诱变处理材料的沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下:(I)选取苗龄28-35d、苗高3_6cm的沼泽小叶桦组培生根苗；(2)将组培生根苗的茎段切成0.2-0.3cm的小段得到外植体；(3)将外植体接种于脱分化培养基中培养4-7d进行脱分化，形成愈伤组织,培养温度为23-27°C，光照时间为12-14h/d，光照强度为40-60umol/m2.s ; (4)将愈伤组织转入再分化培养基中培养7-10d，培养温度为23-27°C，光照时间为12-14h/d，光照强度为40_60umol/
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[0006]作为本发明进一步的方案:所述脱分化培养基包括培养基母液、0.1-0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5-1.0mg/L的萘乙酸和500_1000mg/L的水解酪蛋白。
[0007]作为本发明再进一步的方案:所述再分化培养基包括培养基母液、0.5-1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0-0.lmg/L的萘乙酸。
[0008]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
本发明可为沼泽小叶桦的突变体筛选研究提供大量胚性愈伤组织作为基础材料，对沼泽小叶桦的育种研究具有促进作用。
【具体实施方式】
[0009]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0010]实施例1
一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下:(I)选取苗龄28d、苗高3cm的沼泽小叶桦组培生根苗；(2)将组培生根苗的茎段切成0.2cm的小段得到外植体；(3)将外植体接种于包括培养基母液、0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸和500mg/L的水解酪蛋白的脱分化培养基中培养7d进行脱分化，形成愈伤组织，培养温度为23°C，光照时间为12h/d,光照强度为40umol/m2.s ； (4)将愈伤组织转入包括培养基母液、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.02mg/L的萘乙酸的再分化培养基中培养10d，培养温度为23°C，光照时间为12h/d,光照强度为40umol/m2.S。
[0011]实施例2
一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下:(I)选取苗龄32d、苗高5cm的沼泽小叶桦组培生根苗；(2)将组培生根苗的茎段切成0.25cm的小段得到外植体；(3)将外植体接种于包括培养基母液、0.3mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.8mg/L的萘乙酸和800mg/L的水解酪蛋白的脱分化培养基中培养5d进行脱分化，形成愈伤组织，培养温度为25°C，光照时间为13h/d,光照强度为50umol/m2.s ； (4)将愈伤组织转入包括培养基母液、0.8mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.05mg/L的萘乙酸的再分化培养基中培养8d，培养温度为25°C，光照时间为13h/d,光照强度为50umol/m2.S。
[0012]实施例3
一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，具体步骤如下:(I)选取苗龄35d、苗高6cm的沼泽小叶桦组培生根苗；(2)将组培生根苗的茎段切成0.3cm的小段得到外植体；(3)将外植体接种于包括培养基母液、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的萘乙酸和100mg/L的水解酪蛋白的脱分化培养基中培养4d进行脱分化，形成愈伤组织，培养温度为27°C，光照时间为14h/d,光照强度为60umol/m2.s ； (4)将愈伤组织转入包括培养基母液、1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.lmg/L的萘乙酸的再分化培养基中培养7d,培养温度为27°C，光照时间为14h/d,光照强度为60umol/m2.S。
[0013]以上实施例中沼泽小叶桦组培生根苗的愈伤组织诱导率达100%，胚性愈伤组织平均发生率为83%。
[0014]本发明可为沼泽小叶桦的突变体筛选研究提供大量胚性愈伤组织作为基础材料，对沼泽小叶桦的育种研究具有促进作用。
[0015]对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
【权利要求】
1.一种沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，具体步骤如下:(1)选取苗龄28-35d、苗高3-6cm的沼泽小叶桦组培生根苗；(2)将组培生根苗的茎段切成0.2-0.3cm的小段得到外植体；(3)将外植体接种于脱分化培养基中培养4-7d，直到外植体进行脱分化，形成愈伤组织，培养温度为23-27°C，光照时间为12-14h/d，光照强度为40-60umol/m2.s ;(4)将愈伤组织转入再分化培养基中培养7-10d，培养温度为23-27°C，光照时间为12_14h/d,光照强度为 40_60umol/m2.S。
2.根据权利要求1所述的沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述脱分化培养基包括培养基母液、0.1-0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5-1.0mg/L的萘乙酸和500-1000mg/L的水解酪蛋白。
3.根据权利要求1所述的沼泽小叶桦胚性愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述再分化培养基包括培养基母液、0.5-1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0-0.lmg/L的萘乙酸。
【文档编号】A01H4/00GK104322368SQ201410494639
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】陈权, 孙建, 肖建梅, 周羽, 崔心红, 朱义 申请人:上海孙桥现代温室种子种苗有限公司, 上海市园林科学研究所, 上海农业科技种子有限公司