一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，包括种子的消毒、种子的诱变、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法通过离子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保护酶系统活性，提高种子抗逆性，且遗传稳定，种苗再生率高。
【专利说明】 一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及马鞭草组织培养的快繁方法，属于植物栽培【技术领域】。
【背景技术】
[0002]马鞭草，/ferAa Verbenae马鞭草科,又名紫顶龙芽草、野荆芥、龙芽草，多年生直立草本植物，高30-120厘米，茎四方形，上部方形，老后下部近圆形，棱和节上被短硬毛。单叶对生，卵形至长卵形，长2-8厘米，宽1.5-5厘米，3-5深裂，裂片不规则的羽状分裂或不分裂而具粗齿，两面被硬毛，下面脉上的毛尤密。喜干燥、阳光充足的环境，对土壤要求不严，喜肥，喜湿润，怕涝，不耐干旱，一般的土壤均可生长，但以土层深厚、肥沃的壤土及沙壤土长势健壮，低洼易涝地不宜种植。多数生长于原野，原产于欧洲，中国华东、华南和西南大部地区都有分布。选择土层较厚的壤土或沙壤土为种植地，4月下旬-5月上旬播种，防止草荒，做到田间无杂草。田间长时间的大量积水有根腐病发生只要及时排水、松土就可以避免。全草含马鞭草甙，5-羟基马鞭草甙，另含苦杏仁酶、鞣质，戟叶马鞭草甙，羽扇豆醇，β_谷甾醇，熊果酸，桃叶珊瑚甙，蒿黄素。叶中含马鞭草新甙，腺甙，β_胡萝卜素。根和茎中含水苏糖，马鞭草甙对交感神经末梢小量兴奋，大量抑制；对哺乳动物可促进乳汁分泌。主要功效为清热解毒药；活血通经药；利水消肿药；截疟药；活血散瘀，截疟，解毒，利水消肿。目前主要采取野外采集，人工繁殖尚未见报道。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种马鞭草组织培养的快繁方法，本发明方法通过离子束照射，可以提高幼苗的可溶性蛋白含量，提高保护酶系统活性，提高种子抗逆性,且遗传稳定,种苗再生率高。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基 DPD+6-BA1.5-2.0mg/L+IAA0.03-0.05mg/L+ABA0.5-0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基l/3Dro+IBA0.5mg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度50001x,光照时间16h/d。
[0005]采用本发明制备的马鞭草再生率高，周期短，遗传性状稳定，产量大，污染小。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA1.5mg/L+IAA0.03mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率90%。
[0008]实施例2
挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.8mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率91%。
[0009]实施例3
挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍，70%的酒精中消毒5min，0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干，消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0 X 10171nS/cm2，无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d，诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA2.0mg/L+IAA0.05mg/L+ABA0.5mg/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d，分化出来的芽苗接入生根培养基 1/3DPD+IBA0.5mg/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度 50001x，光照时间16h/d，再生率93%。
【权利要求】
1.一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，包括种子的消毒、种子的诱变、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下: (1)取马鞭草饱满的种子，进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的马鞭草种子接种到不含任何激素的MS培养基上萌发，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，温度25°C，使用30KeV的N+离子束照射，照射剂量2.0X 10171ns/cm2 ； (3)取步骤(2)长出的无菌苗长约5cm左右时，取叶片为外植体进行愈伤组织诱导培养，培养基 DPD+6-BA4.0mg/L+IBA0.3mg/L+2, 4-Dlmg/L，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，温度25°C，光照强度3001x，光照时间12h/d ； (4)取步骤(3)诱导出来的愈伤组织接入分化培养基DPD+6-BA1.5-2.0mg/L+IAA0.03-0.05mg/L+ABA0.5-0.8mg/L,附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，pH5.8，温度 25°C，光照强度21001x，光照时间12h/d ； (5)取步骤(4)分化出来的芽苗接入生根培养基1/3DTO+IBA0.5mg/L,附加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，pH5.8，温度25°C，光照强度50001x，光照时间16h/d。
2.按照权利要求1所述的一种马鞭草诱变育种的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中马鞭草种子的消毒方法为挑取饱满的马鞭草种子，在浓硫酸中浸泡lh，取出无菌水冲洗5遍,70%的酒精中消毒5min,0.1%的升萊消毒15min,无菌水冲洗5遍,无菌滤纸吸干。
【文档编号】A01H4/00GK104255510SQ201410540465
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司