一种威灵仙植株再生的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及一种威灵仙植株再生的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养。本发明通过建立威灵仙离体再生体系，在资源的有效利用，品种繁育以及新种质创造等方面的发展具有重要意义，为威灵仙产业化的健康发展提供了理论依据和技术支持。
【专利说明】一种威灵仙植株再生的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及威灵仙组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]威灵仙，Clematis chimmsis,H、:铁脚威灵仙、铁角威灵仙、铁脚灵仙，毛茛科，藤本，新鲜茎，光滑无毛，有明显的纵行纤维条纹，茎叶干后变黑色，羽状复叶对生，粉绿色，光滑，小叶3-5，狭卵形至三角状卵形，长3-7cm，宽1.5-3.6cm,先端钝或渐尖，基部楔形或圆形，全缘，上面沿脉有毛，叶柄长4.5-6.5cm,圆锥花序腋生或顶生，花被一片，白色，外面边缘密生白色短柔毛，瘦果狭卵形而扁，疏生柔毛，花期6-8月，果期9-10月，生于山坡、山谷或灌丛中，主产安徽、江苏、浙江，广泛分布于两广地区。威灵仙具有祛风除湿，通络止痛，消痰水，散癖积之功效。主治痛风顽痹、风湿痹痛，肢体麻木，膝冷痛，筋脉拘挛，屈伸不利，脚气，疟疾，症瘕积聚，破伤风，扁桃体炎，诸骨鲠咽，采用育苗移栽的方法进行繁殖。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是威灵仙植株再生的快速繁殖方法，本发明通过建立威灵仙离体再生体系，在资源的有效利用，品种繁育以及新种质创造等方面的发展具有重要意义，为威灵仙产业化的健康发展提供了理论依据和技术支持。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取威灵仙幼嫩叶片，洗洁精清洗2min，流水冲洗15min，超净工作台上8%过氧化氢处理8min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的威灵仙叶片接入培养基为N6+CPPU2.0mg/L+ZTl.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照5001χ,光期6h/d，温度23±2°C，诱导出来的愈伤组织接入N6+CPPU0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照15001x，光期8h/d，温度23±2°C，分化后的芽苗接入Ν6+ΝΑΑ0.01-0.02mg/L+TDZl.5-2.0mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照150001χ，光期12h/d，温度25。。。
[0005]采用本发明制备的威灵仙生根率高，利用率大，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取威灵仙幼嫩叶片，洗洁精清洗2min，流水冲洗15min，超净工作台上8%过氧化氢处理8min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的威灵仙叶片接入培养基为N6+CPPU2.0mg/L+ZTl.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照5001χ,光期6h/d，温度23±2°C，诱导出来的愈伤组织接入N6+CPPU0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照15001x，光期8h/d，温度23±2°C，分化后的芽苗接入N6+NAA0.0lmg/L+TDZl.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖 50g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 150001χ，光期 12h/d，温度 25°C，生根率 90%。
[0008]实施例2
取威灵仙幼嫩叶片，洗洁精清洗2min，流水冲洗15min，超净工作台上8%过氧化氢处理8min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的威灵仙叶片接入培养基为N6+CPPU2.0mg/L+ZTl.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照5001χ,光期6h/d，温度23±2°C，诱导出来的愈伤组织接入N6+CPPU0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照15001x，光期8h/d，温度23±2°C，分化后的芽苗接入N6+NAA0.02mg/L+TDZ2.0mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖 50g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 150001χ，光期 12h/d，温度 25°C，生根率 91%。
[0009]实施例3
取威灵仙幼嫩叶片，洗洁精清洗2min，流水冲洗15min，超净工作台上8%过氧化氢处理8min，无菌水冲洗5遍，消毒处理过的威灵仙叶片接入培养基为N6+CPPU2.0mg/L+ZTl.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照5001χ,光期6h/d，温度23±2°C，诱导出来的愈伤组织接入N6+CPPU0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照15001x，光期8h/d，温度23±2°C，分化后的芽苗接入N6+NAA0.02mg/L+TDZl.5mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖 50g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 150001χ，光期 12h/d，温度 25°C，生根率 93%。
【权利要求】
1.一种威灵仙植株再生的快速繁殖方法，包括叶片的消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根培养，其主要步骤如下: (1)取威灵仙幼嫩叶片，对其进行消毒处理； (2)将步骤(1)消毒处理过的威灵仙叶片接入培养基为N6+CPPU2.0mg/L+ZTl.0mg/L中进行愈伤组织诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照5001x，光期6h/d，温度23±2°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织接入N6+CPPU0.5mg/L+ZT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照15001x，光期8h/d，温度 23±2°C ； (4)取步骤(3)分化后的芽苗接入Ν6+ΝΑΑ0.01-0.02mg/L+TDZl.5-2.0mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖50g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照150001χ，光期12h/d，温度25。。。
2.按照权利要求1所述的一种威灵仙植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述威灵仙无菌叶片的获得为，取威灵仙幼嫩叶片，洗洁精清洗2min，流水冲洗15min,超净工作台上8%过氧化氢处理8min,无菌水冲洗5遍。
【文档编号】A01H4/00GK104255525SQ201410550319
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司