一种七叶树组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种七叶树组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导等步骤。本发明通过研究筛选出组培各阶段的最佳培养基配方和主要影响因素，找出最佳的技术参数组合，从而建立最适宜的七叶树组织培养体系，为七叶树药用资源的开发奠定基础。
【专利说明】一种七叶树组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及七叶树的组织培养，属于生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]七叶树，Je1ScWw1S chinensis /----,七叶树科，又称梭稷树、梭稷子、天师栗，落叶乔木，高达25米，树皮深褐色或灰褐色，小枝、圆柱形，黄褐色或灰褐色，无毛或嫩时有微柔毛，有圆形或椭圆形淡黄色的皮孔；掌状复叶，由5?7小组成，叶柄长1(Γ12厘米，有灰色微柔毛，小叶纸质，长圆披针形至长圆倒披针形，稀长椭圆形钾先端短锐尖，基部楔形或阔楔形，边缘有钝尖形的细锯齿；花杂性，雄花与两性花同株，花萼管状钟形，长3飞毫米，外面有微柔毛，裂片钝形，边缘有短纤毛，花瓣4，白色；果实球形或倒卵圆形，顶部短尖或钝圆而中部略凹下，直径3?4厘米，黄褐色，无刺，具很密的斑点，果壳干后厚5飞毫来，种子常Γ2粒发育，近于球形，直径2?3.5厘米，栗褐色，种脐白色，约占种子体积的1/2，花期Γ5月，果期10月。中国黄河流域及东部各省均有栽培，仅秦岭有野生，自然分布在海拔700m以下之山地，喜光，也耐半荫，细纹和湿润气候，不耐严寒，喜肥沃深厚土壤。从七叶树中萃取的天然活性成分:七叶素，通过抑制胶原蛋白酶等与肌肤纹理和完整性密切相关的酶类，促进微循环，维持细胞正常代谢，从而促使毛孔收敛，洁净，滋养，使肌肤细致无瑕。七叶树以播种繁殖为主，由于其种子不耐贮藏，如干燥极易丧失生命力，故种子成熟后宜及时采下，随采随播。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是七叶树组织培养的繁殖方法，本发明方法通过研究筛选出组培各阶段的最佳培养基配方和主要影响因素，找出最佳的技术参数组合，从而建立最适宜的七叶树组织培养体系，为七叶树药用资源的开发奠定基础。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取七叶树的种子在浓硫酸中层积处理2h，流水冲洗2h，放入磨口广口瓶中，在超净工作台上用70%乙醇震荡灭菌处理30s，50%的氯胺水震荡灭菌处理15min，无菌水冲洗5次，吸水纸吸干表面水分，消毒处理过的七叶树的种子接种到不加激素的1/2MS培养基中进行无菌苗的培育，培养出来的无菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培养基中进行腋芽的诱导，加入8-10mg/L的牛血清蛋白，诱导出来的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培养基中进行丛生芽的增殖，培养条件为附加蔗糖40g/L，琼脂7.5g/L，培养温度26 °C，光照强度30001X，光照时间12h/d，诱导出来的丛生芽接入3/4MT+0.1-0.2mg/LIBA培养基中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，培养温度28°C，光照强度80001x，光照时间16h/d。
[0005]采用本发明制备的七叶树生根率高，利用率大，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取七叶树的种子在浓硫酸中层积处理2h，流水冲洗2h，放入磨口广口瓶中，在超净工作台上用70%乙醇震荡灭菌处理30s，50%的氯胺水震荡灭菌处理15min，无菌水冲洗5次，吸水纸吸干表面水分，消毒处理过的七叶树的种子接种到不加激素的1/2MS培养基中进行无菌苗的培育，培养出来的无菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培养基中进行腋芽的诱导，加入8mg/L的牛血清蛋白，诱导出来的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培养基中进行丛生芽的增殖，培养条件为附加蔗糖40g/L，琼脂7.5g/L，培养温度26°C，光照强度30001x，光照时间12h/d，诱导出来的丛生芽接入3/4MT+0.lmg/LIBA培养基中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，培养温度28°C，光照强度80001x，光照时间16h/d,生根率93%。
[0008]实施例2
取七叶树的种子在浓硫酸中层积处理2h，流水冲洗2h，放入磨口广口瓶中，在超净工作台上用70%乙醇震荡灭菌处理30s，50%的氯胺水震荡灭菌处理15min，无菌水冲洗5次，吸水纸吸干表面水分，消毒处理过的七叶树的种子接种到不加激素的1/2MS培养基中进行无菌苗的培育，培养出来的无菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培养基中进行腋芽的诱导，加入I Omg/L的牛血清蛋白，诱导出来的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培养基中进行丛生芽的增殖，培养条件为附加蔗糖40g/L，琼脂7.5g/L，培养温度26°C，光照强度30001x，光照时间12h/d，诱导出来的丛生芽接入3/4MT+0.2mg/LIBA培养基中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，培养温度28°C，光照强度80001x，光照时间16h/d,生根率95%。
[0009]实施例3
取七叶树的种子在浓硫酸中层积处理2h，流水冲洗2h，放入磨口广口瓶中，在超净工作台上用70%乙醇震荡灭菌处理30s，50%的氯胺水震荡灭菌处理15min，无菌水冲洗5次，吸水纸吸干表面水分，消毒处理过的七叶树的种子接种到不加激素的1/2MS培养基中进行无菌苗的培育，培养出来的无菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培养基中进行腋芽的诱导，加入9mg/L的牛血清蛋白，诱导出来的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培养基中进行丛生芽的增殖，培养条件为附加蔗糖40g/L，琼脂7.5g/L，培养温度26°C，光照强度30001x，光照时间12h/d，诱导出来的丛生芽接入3/4MT+0.2mg/LIBA培养基中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，培养温度28°C，光照强度80001x，光照时间16h/d,生根率96%。
【权利要求】
1.一种七叶树组织培养的快速繁殖方法，包括种子的消毒、无菌苗的获得、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、生根诱导，其主要步骤如下: (1)取七叶树的种子，进行消毒处理； (2)将步骤(1)消毒处理过的七叶树的种子接种到不加激素的1/2MS培养基中进行无菌苗的培育； (3)取步骤(2)培养出来的无菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培养基中进行腋芽的诱导； (4)将步骤(3)诱导出来的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培养基中进行丛生芽的增殖； (5)将步骤(3)诱导出来的丛生芽接入3/4MT+0.1-0.2mg/LIBA培养基中进行生根诱导，附加蔗糖20g/L，琼脂7.5g/L，培养温度28°C，光照强度80001x，光照时间16h/d。
2.按照权利要求1所述的一种七叶树组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述七叶树无菌种子的获得为取七叶树的种子在浓硫酸中层积处理2h，流水冲洗2h，放入磨口广口瓶中，在超净工作台上用70%乙醇震荡灭菌处理30s，50%的氯胺水震荡灭菌处理15min，无菌水冲洗5次，吸水纸吸干表面水分。
3.按照权利要求1所述的一种七叶树组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(2)、(3)和(4)中培养条件为附加蔗糖40g/L，琼脂7.5g/L，培养温度26°C，光照强度30001x，光照时间 12h/d。
4.按照权利要求1所述的一种七叶树组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(3)中腋芽的诱导中加入8-10mg/L的牛血清蛋白可以防止在诱导过程中褐化现象的出现，影响以下的增殖效果。
【文档编号】A01H4/00GK104255530SQ201410550654
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司