一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，涉及植物繁殖【技术领域】。本方法不仅能为生产实践快速繁殖大量优质苗木，也为进一步利用生物技术改良黑果枸杞培育新品种提供技术支撑，同时也是黑果枸杞种质资源保存的理想途径。所述方法包括以下步骤：选择一年生健壮无病害的枝条，剪切为带有1-2个腋芽的茎段，经过消毒处理，接种到诱导芽生长培养基上，待长出新芽后转接到愈伤组织诱导培养基，诱导产生愈伤组织，将愈伤组织转接到诱导分化培养基诱导产生丛生芽，对丛生芽进行生根培养，最后培养出的生根苗进行炼苗移栽。
【专利说明】
一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物繁殖【技术领域】，尤其涉及一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术。
【背景技术】
[0002]黑果枸杞(Lyciumruthenicum Murr.)为爺科(Solanceae)枸杞属(Lycium L.)多年生灌木，分布于新疆、西藏、青海、甘肃、宁夏、陕西北部，中亚、高加索和欧洲亦有分布。常以灌丛状生于盐碱荒地、盐化沙地、盐湖岸边、路旁等各种盐溃化土壤或荒漠环境，具有很高的光合效率和较强抗逆性，是我国西北特有的抗盐抗旱野生植物，即使粗放栽培，亦极易人工种植。黑果枸杞除具有与宁夏枸杞(Lyciumbarbarum L.)相似的化学成分外,其果实色素相对稳定，可广泛应用于轻工、纺织、医药等领域。黑果枸杞具有抗旱、抗寒、耐盐碱、根蘖性强、耐土壤贫瘠及营养价值高等诸多优点，是盐碱地治理、护坡、防止水土流失的良好树种，具有广泛的经济前景和开发潜力。在盐碱荒地和干旱地区水土流失严重区域栽培，既能改善当地生态环境，也能为当地群众提供一定的经济收入。黑果枸杞目前基本处于野生状态，且原生地自然条件恶劣，植被退化严重，在有些地区甚至成片死亡，已经对黑果枸杞的生长造成了很大的威胁，保护和合理利用这一植被资源迫在眉睫。
[0003]愈伤组织培养具有多种用途。一方面可研究植物生长发育及分化的机制、遗传变异规律，对植物遗传育种具有特殊意义。可加快植物新品种和良种繁育速度，迅速高效低成本；培育无病毒苗木；迅速高效低成本获得倍性不同的植株，克服远源杂交困难；利于种质资源长期保存和远距离运输；制造人工种子。另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选工业、农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证明，愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良，种质保存和有用化合物生产的理想途径。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术。
[0005]为达到上述目的，本发明的采用如下技术方案:
[0006]一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，包括以下步骤:在试验地选择生长健壮、开花结果比较多的优良单株一年生枝条；用流水将枝条冲洗干净，将冲洗好的枝条剪切成带有1-2个腋芽茎段，并放在超净工作台上，用75%的酒精浸泡2-5s，再用0.1%的升汞处理1min ;将处理好的材料在超净工作台上接种到诱导培养基上，腋芽开始萌动，并长出新芽，诱导培养基为:MS+IBA 0.2mg/L;以新牙叶片为材料，在超净工作台上，将叶片剪成0.5cm-l.0cm的小块，将其接到愈伤组织诱导培养基上诱导产生愈伤组织，愈伤组织诱导培养基为:MS+6-BA lmg/L+NAA lmg/L ;将所述的愈伤组织接种到愈伤组织诱导分化培养基上诱导产生丛生芽，愈伤组织诱导分化培养基为:MS+6-BA 0.2mg/L ;将所述的丛生芽在超净工作台上，用剪刀剪切成带有1-2个腋芽茎段，接种到生根培养基上，生根培养基为:MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.2mg/L ;将诱导生根的试管苗，在实验室内打开瓶口炼苗7d，在温室内进行移栽；将炼苗移栽到8cmX 12cm的黑色聚乙烯薄膜底部有孔的营养钵中。
[0007]所述的营养钵中的基质为森林土、河沙及蛭石的比例为2:1:1。基质在太阳下暴晒后用0.1 %的高锰酸钾消毒。用镊子轻轻地把试管苗从三角瓶中取出，清洗干净根部残留的培养基。移栽到准备好的容器中。移栽时把根放到预先打好的小洞中，使根系舒展，压实，使根系和土壤紧密接触，要防止栽植过深、窝根和漏根，移栽后浇透水。为防止病虫害，移栽当天喷洒800-1000多倍的多菌灵一次，以后根据情况在喷洒合适农药。此后，根据实际情况采用喷灌进行浇水。待苗高10-20cm时，可移栽到大田。
[0008]由于目前还没有培育出优良的黑果枸杞新品种，所述的实验材料是收集到的甘肃不同地区的黑果枸杞种植在试验田，经过2年的观察所选的优良单株。所述培养基为降低成本均添加白糖20g/L，琼脂粉4.5g/L，pH值5.8-6.0。培养室的培养条件为:温度28°C左右(用空调控制温度)，每天光照14-16h，光照强度为1500-30001x。
[0009]本发明的优点在于:
[0010]1.本发明提供的一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术可为生产实践快速繁殖大量优质苗木；
[0011]2.也可以进一步利用生物技术改良黑果枸杞培育新品种提供技术支撑；
[0012]3.同时也是黑果枸杞种质资源保存的一种理想途径。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为本发明提供的一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术的培养过程示意图。
【具体实施方式】
[0014]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0015]本发明提供了一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，所述方法包括:
[0016](I)外植体选择:在试验地选择生长健壮、开花结果比较多的优良单株一年生枝条。
[0017](2)外植体处理:在实验室用流水将枝条冲洗干净，冲洗好的枝条剪切成带有1-2个腋芽茎段，清洗干净的茎段在超净工作台上，用75%的酒精浸泡2-5s，再用0.1%的升汞处理1min备用。
[0018](3)初代培养:把步骤(2)经消毒处理的材料在超净工作台上接种到诱导培养基上，腋芽开始萌动，并长出新芽，诱导培养基为:MS+IBA 0.2mg/L。
[0019](4)诱导愈伤组织:以步骤(3)的试管苗的叶片为材料，在超净工作台上，将叶片剪成0.5cm-l.0cm的小块，将其接到愈伤组织诱导培养基上诱导产生愈伤组织，愈伤组织诱导培养基为:MS+6-BA lmg/L+NAA lmg/L。
[0020](5)愈伤组织分化:将步骤(4)产生的愈伤组织接种到愈伤组织诱导分化培养基上诱导产生丛生芽，愈伤组织诱导分化培养基为:MS+6-BA 0.2mg/L。
[0021](6)生根培养:将步骤(5)丛生芽在超净工作台上，用剪刀剪切成带有1-2个腋芽茎段，接种到生根培养基上。生根培养基为:MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.2mg/L。
[0022](7)试管苗移栽:将步骤(6)诱导生根的试管苗，在实验室内打开瓶口炼苗7d ;在温室内进行移栽。
[0023](8)容器育苗:将将步骤(7)炼的苗移栽到8cmX 12cm的黑色聚乙烯薄膜底部有孔的营养钵中，营养钵中的基质为森林土、河沙及蛭石的比例为2:1:1，基质在太阳下暴晒后用0.1%的高锰酸钾消毒，用镊子轻轻地把试管苗从三角瓶中取出，清洗干净根部残留的培养基，移栽到准备好的容器中，移栽时把根放到预先打好的小洞中，使根系舒展，压实，使根系和土壤紧密接触，要防止栽植过深、窝根和漏根，移栽后浇透水，为防止病虫害，移栽当天喷洒800-1000多倍的多菌灵一次，以后根据情况在喷洒合适农药，此后，根据实际情况采用喷灌进行浇水，待苗高10-20cm时，可移栽到大田。
【权利要求】
1.一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，其特征在于:包括以下步骤: (1)外植体选择:在试验地选择生长健壮、开花结果比较多的优良单株一年生枝条。 (2)外植体处理:在实验室用流水将枝条冲洗干净。冲洗好的枝条剪切成带有1-2个腋芽茎段，清洗干净的茎段在超净工作台上，用75%的酒精浸泡2-5s，再用0.1%的升汞处理1min备用。 (3)初代培养:把步骤(2)经消毒处理的材料在超净工作台上接种到诱导培养基上，腋芽开始萌动，并长出新芽，诱导培养基为:MS+IBA0.2mg/L。 (4)诱导愈伤组织:以步骤(3)的试管苗的叶片为材料，在超净工作台上，将叶片剪成0.5cm-l.0cm的小块，将其接到愈伤组织诱导培养基上诱导产生愈伤组织，愈伤组织诱导培养基为:MS+6-BAlmg/L+NAAlmg/L。 (5)愈伤组织分化:将步骤(4)产生的愈伤组织接种到愈伤组织诱导分化培养基上诱导产生丛生芽，愈伤组织诱导分化培养基为:MS+6-BA0.2mg/L。 (6)生根培养:将步骤(5)丛生芽在超净工作台上，用剪刀剪切成带有1-2个腋芽茎段，接种到生根培养基上。生根培养基为:MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.2mg/L。 (7)试管苗移栽:将步骤(6)诱导生根的试管苗，在实验室内打开瓶口炼苗7d;在温室内进行移栽。 (8)容器育苗:将将步骤(7)炼的苗移栽到8cmX12cm的黑色聚乙烯薄膜底部有孔的营养钵中。
2.根据权利要求1所述的一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，其特征在于:培养基为降低成本均添加白糖20g/L，琼脂粉4.5g/L，pH值5.8-6.0。
3.根据权利要求1和2所述的一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，其特征在于:培养室的培养条件为:温度27-29°C (用空调控制温度)，每天光照14-16h，光照强度为 1500-30001x。
4.根据权利要求1，2和3所述的一种黑果枸杞愈伤组织的诱导及分化培养技术，其特征在于:营养钵中的基质为森林土、河沙和蛭石的比例为2:1:1，基质在太阳下暴晒后用.0.1 %的高锰酸钾消毒。
【文档编号】A01H4/00GK104273034SQ201410568523
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年10月21日 优先权日:2014年10月21日
【发明者】马彦军, 马瑞, 程艳青, 苏世平, 张荣梅 申请人:甘肃农业大学